目的:探讨人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3来源的裸鼠原位移植瘤模型的卵巢内肿瘤浸润类型，以及人卵巢上皮癌卵巢内肿瘤浸润类型的特点。方法:将人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3皮下移植获取瘤源，再分别植入裸鼠单侧卵巢包膜内制备裸鼠原位移植瘤模型。观察两种方法制备的肿瘤模型卵巢内的浸润类型。同时通过病理检查分析了54例国际妇产科联盟(FIGO)Ⅰ～Ⅱ期人卵巢上皮性癌的肿瘤浸润类型。结果:肿瘤在卵巢内浸润类型大致分为三类：假包膜型、假包膜浸润型和假包膜穿透型。实体瘤组假包膜型发生率(18.2%)低于细胞株组(42.3%， P<0.05)，而实体瘤组假包膜穿透型发生率(50.0%)高于细胞株组(23.1%， P<0.05)，两组间的假包膜浸润型差异无统计学意义( P>0.05)。肿瘤在卵巢内浸润类型随着种植时间而发生变化，种植初期假包膜型比例较高，随着种植时间的延长，假包膜穿透型比例增加。人卵巢上皮癌卵巢内浸润类型中，Ⅰ期假包膜型比例较高( P<0.05)，而Ⅱ期包膜穿透型比例较高( P<0.05)。两种病理类型之间其肿瘤生长类型的比例差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3制备裸鼠原位移植瘤模型有差别；相对于实体瘤组织片模型，细胞株模型更稳定，更适合后续研究。三种肿瘤卵巢内浸润类型在移植瘤种植8周时比例比较均衡，8周是后续实验最佳切入时机。

目的:研究洛沙坦是否可以通过改善淋巴引流抑制卵巢癌裸鼠模型腹水的形成。方法:8周龄雌性裸鼠，随机分3组，每组24只鼠。空白对照组不给予任何处理。另两组给予原位移植SKOV3 IP1-Gluc卵巢癌细胞，根据外周血Gluc水平监测腹腔内肿瘤生长情况，达到1×10 6相对光单位时入组。对照组为卵巢癌无治疗组，22只鼠入组，卵巢癌洛沙坦治疗组23只鼠入组。注射肿瘤后第28天处死，取出腹腔内肿瘤及膈肌，抽吸腹水测量。免疫组化方法检测sirius red、αSMA、Collagen 1，了解细胞外基质胶原蛋白及纤维母细胞含量。用淋巴管造影方法观察膈肌淋巴管形态，腹腔内注射荧光微球观察膈肌及纵膈淋巴结荧光微球分布情况，了解膈肌淋巴管引流功能。 结果:洛沙坦治疗可以明显减少卵巢癌裸鼠模型腹水形成( P<0.05)。洛沙坦治疗组肿瘤内胶原蛋白含量(sirius red阳性区域，Collagen 1含量)及纤维母细胞(αSMA阳性区域)均明显减少(均 P<0.05)。与正常裸鼠比较，卵巢癌无治疗组裸鼠膈肌淋巴管扩张，结构紊乱；洛沙坦治疗组裸鼠膈肌淋巴管形态和分布情况改善，趋于正常化，而淋巴管引流功能也得到明显改善。 结论:洛沙坦可以抑制细胞外基质形成，减少卵巢癌细胞外基质含量，降低固态压力，解除对淋巴管的压迫作用，改善淋巴引流，减少腹水形成，使临床获益。

目的 探讨生殖系统的淋巴造血组织增生性病变(包括淋巴造血组织肿瘤和淋巴瘤样病变)的临床病理特征.方法 收集2006年1月至2017年8月北京大学人民医院收治的生殖系统出现首发症状的淋巴造血组织增生性病变患者共33例.其中,生殖系统的淋巴造血组织肿瘤20例,包括髓细胞肉瘤和髓性白血病11例、原发性生殖系统非霍奇金淋巴瘤(NHL)9例;子宫颈淋巴瘤样病变13例.应用光镜观察、免疫组化染色、EB病毒原位杂交及临床相关检查对其临床病理特征进行回顾性分析.结果(1)年龄:20例淋巴造血组织肿瘤患者的年龄范围为16~77岁,平均年龄48.5岁,中位年龄56岁.13例子宫颈淋巴瘤样病变患者的年龄范围为23~62岁,平均年龄45.9岁,中位年龄48岁.(2)临床表现:20例生殖系统的淋巴造血组织肿瘤患者的临床表现为发热、乏力、下腹痛、阴道流血,以及肿物等;13例子宫颈淋巴瘤样病变患者的临床表现多为接触性出血.(3)病史:20例淋巴造血组织肿瘤患者中,8例患者有急性髓性白血病病史,3例患者妊娠合并髓性白血病病史;1例慢性淋巴细胞白血病/小细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)患者有卵巢小细胞癌和高级别卵巢浆液性癌术后化疗病史,1例弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者有肾移植术后应用环孢素病史.(4)实验室检查:18例有血清乳酸脱氢酶(LDH)水平检测结果的淋巴造血组织肿瘤患者中,9例(9/18)血清LDH水平升高.(5)肿瘤部位:20例淋巴造血组织肿瘤患者中,肿瘤位于外阴4例,阴道1例,子宫颈4例,子宫4例,卵巢8例,胎盘2例.(6)临床分期:9例原发性生殖系统NHL患者中,Ⅰ期4例,Ⅲb期1例,Ⅳ期4例.(7)病理类型:20例淋巴造血组织肿瘤患者中,髓细胞肉瘤9例,髓性白血病侵犯胎盘2例,DLBCL 6例,CLL/SLL及黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALToma)各1例,间变大细胞淋巴瘤(ALCL)1例.(8)免疫组化法检测:髓细胞肉瘤和髓性白血病为CD43、髓性过氧化物酶(MPO)呈阳性表达,NHL为CD20、配对盒基因5抗体(PAX5)呈阳性表达.(9)治疗及预后:淋巴造血组织肿瘤多采用手术切除辅以化疗.随访期内, 20例淋巴造血组织肿瘤患者中,髓细胞肉瘤或髓性白血病5例死亡,NHL 2例死亡;13例子宫颈淋巴瘤样病变患者均健在.结论 临床病史、病理形态和免疫组化法检测对于诊断生殖系统的淋巴造血组织肿瘤具有重要作用,治疗采用手术治疗辅以化疗.子宫颈淋巴瘤样病变应与淋巴瘤鉴别,前者的预后良好.

目的 观察抗间皮素(mesothelin,MSLN) 嵌合抗原受体修饰的T细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用,探索新的卵巢癌治疗手段与策略.方法 设计人源化抗人间皮素的嵌合抗原受体融合基因;构建慢病毒表达载体;感染人外周血单核细胞,制备稳定表达抗MSLN嵌合抗原受体的T细胞(chimeric antigen receptor-modified T cells,CART);Western blot、qRT-PCR、流式细胞术检测CAR的表达;免疫组织化学法和Western blot检测卵巢癌样本及细胞系中MSLN表达;体内和体外实验验证CART细胞对卵巢癌细胞的杀伤能力.结果 与正常组织相比,卵巢癌组织MSLN表达显著升高(P＜ 0.01);成功制备了抗MSLN-CART细胞;体外实验证明,抗MSLN-CART细胞能够特异性识别和杀伤MSLN阳性的卵巢癌细胞,效靶比为2-4: 1时,MSLN-CART杀伤率仍达到80％;NOD/SCID小鼠卵巢癌原位移植瘤模型证明,经尾静脉回输抗MSLN-CART细胞(1 × 107/只,共2次) ,原位移植瘤消失.结论 抗MSLN-CART细胞能有效、特异且安全地杀伤卵巢癌细胞,抑制肿瘤的生长.

目的:观察黄芪、莪术配伍对人卵巢癌HO-8910原位移植瘤的抑瘤效果及瘤组织中MMP-2、FGF-2、BCL-2蛋白和基因表达的影响.方法:选取已建立荧光蛋白转染的HO-8910卵巢癌原位癌动物模型,分为模型组,阳性对照组(顺铂),黄芪组,莪术组,黄芪、莪术配伍(按照2∶1)高、中、低剂量组,监测抑瘤效果.用免疫组化和Real time-PCR检测移植瘤组织中MMP-2、FGF-2、BCL-2蛋白和基因的表达情况.结果:阳性对照组,黄芪组,黄芪、莪术配伍高剂量组,黄芪、莪术配伍低剂量组平均肿瘤质量明显小于模型组(P＜0.05);各组MMP-2、FGF-2、BCL-2蛋白表达与模型组相比无统计学差异(P＞0.05);黄芪组,莪术组,黄芪、莪术配伍组高、中、低剂量组肿瘤组织中的MMP-2、FGF-2、BCL-2 mRNA表达明显低于模型组(P＜0.05).结论:黄芪、莪术配伍使用在实验周期内对人卵巢癌HO-8910具有抑制作用(P＜0.05),其作用机制可能与下调移植瘤中MMP-2、FGF-2、BCL-2基因表达相关.

目的 探索腹水中瘦素(Leptin)对成纤维细胞活化的作用以及对卵巢癌腹腔播散的影响.方法 恶性腹水中分离肿瘤相关成纤维细胞并鉴定;Transwell及系膜撕开试验探究其对卵巢癌细胞侵袭能力的影响;ELISA比较良恶性腹水中Leptin表达水平差异;数据库分析微环境细胞Leptin受体表达情况;免疫荧光、Western blot及胶原回缩试验探究Leptin对成纤维细胞活化的影响;SKOV3原位移植模型探索Leptin对成纤维细胞活化及腹腔播散的影响.结果 腹水中肿瘤相关成纤维细胞高表达α-SMA;其显著增加卵巢癌细胞体外侵袭能力;Leptin在良恶性腹水中表达分别为(132.1±15.6)pg/mL、(576.4±60.4)pg/mL;成纤维细胞高表达Leptin受体;Leptin重组蛋白显著增加成纤维细胞活化;移植瘤模型中IgG/Leptin封闭组活化成纤维细胞比例分别为(24.6±3.5)％、(8.5±1.6)％;腹腔种植灶数目分别为(20±3)、(7±2)个;总的转移灶重量分别为(2±0.5)、(0.5±0.1)g.结论 卵巢癌腹水中Leptin维持成纤维细胞的活化,可考虑作为遏制卵巢癌腹腔播散的治疗靶点.

目的 研究人卵巢癌生长特点和转移范围,构建卵巢癌原位移植瘤动物模型.方法 将对数生长期的1×10 7个人卵巢黏液性腺癌3AO细胞种植于BALB/C(nu/nu)雌性裸鼠右卵巢实质内,观察裸鼠一般情况及肿瘤生长、浸润转移情况,移植后3～8周解剖裸鼠,对双侧卵巢和各脏器行光镜和免疫组织化学检查.结果 人卵巢黏液性腺癌3AO细胞裸鼠原位移植瘤模型成功率为86.67％.移植后3周可见移植侧卵巢稍增大,逐渐形成团块,并转移至对侧卵巢、肠管、肝脾、肺、淋巴结等器官,有无色透明腹腔积液形成,1～3 mL.光镜下观察,移植瘤和转移瘤的病理特征符合人卵巢黏液性腺癌表现,免疫组织化学检测人糖类抗原CA125呈阳性或强阳性表达,着色部位定位于细胞浆.结论 人卵巢黏液性腺癌细胞株3AO裸鼠原位移植瘤模型成功建立,该模型与人卵巢癌的生物学行为类似,可以作为进行人卵巢癌研究的体内模型.

1病例报告患者,32岁,因鼻咽癌放、化疗后4年发现肿瘤复发行生育力保存,于2012年7月26日就诊中山大学附属第六医院生殖医学中心.2008年患者因鼻咽癌(未分化型非角化性癌,T1N2M0,Ⅲ期)行顺铂+依托泊苷方案化疗4疗程,末次化疗时间为2008年9月17日.同期行鼻咽部放疗共35次,剂量＞70 Gy.2012年正电子发射计算机断层显像提示患者骶骨、左侧骶髂关节转移,遂就诊本科室要求行生育力保存.行阴道B超检查示:右侧卵巢20 mm×15 mm,左侧卵巢21 mm×17 mm,双侧共7枚窦卵泡.患者就诊时月经规则,末次月经为2012年7月9日,月经周期30天,经期5天,无痛经,生育史G0P0.患者诉对“甘露醇”药物过敏,余既往史无特殊.父母体健,无“鼻咽癌”等家族史.

目的 探讨KLF4通过调控TGF?β通路减弱EMT对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 构建过表达KLF4及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达KLF4组卵巢癌细胞系.Western blot法测定各组卵巢癌细胞中TGF?β通路相关蛋白及上皮?间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测KLF4过表达对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;构建原位小鼠移植瘤模型,验证KLF4过表达对肿瘤生长、转移的影响.结果 MTT及Transwell实验结果显示,与空白对照组相比,过表达KLF4组可以抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);过表达KLF4能够明显抑制卵巢癌细胞的EMT过程(P<0.05);过表达KLF4能通过抑制Smad介导的TGF?β通路抑制卵巢癌细胞EMT;KLF4可以抑制原位小鼠卵巢癌移植瘤中原发性肿瘤生长和转移.结论 KLF4可以通过抑制Smad介导的TGF?β通路抑制EMT,从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,KLF4/Smad/TGF?β/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点.

目的 探索不同制作工艺的复方颗粒剂对乳腺癌小鼠瘤体生长及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)表达水平的影响.方法 以BALC乳腺癌小鼠为模型,采用1×107细胞/ml乳腺癌细胞4T1原位移植多选择小鼠乳腺脂肪垫内方式造模,将造模成功组分成煎药剂组(A组)、配方颗粒剂组(B组)、生理盐水组(C组)及模型组(D组),每组各15只,同时另选15只作为空白对照组(E组),仅进行正常条件性饲养.给药21 d后检测各组BALC乳腺癌小鼠的瘤质量、脾脏指数、胸腺指数及卵巢雌激素、孕激素、PI3K和Akt,探讨不同工艺复方颗粒治疗乳腺癌的疗效和作用机制.结果 A组和B组小鼠瘤体质量明显低于C组和D组小鼠(P＜0.05),A组与B组瘤体质量和抑瘤率比较差异无统计学意义(P＞0.05),C组与D组瘤体质量比较差异无统计学意义(P＞0.05),E组小鼠均未见瘤块;与E组相比,A组、B组、C组和D组小鼠脾脏指数明显提高(P＜0.05);A组、B组小鼠脾脏指数较C组、D组明显降低(P＜0.05);与E组相比,A组、B组、C组和D组小鼠胸腺指数均降低(P＜0.05),A组、B组较C组、D组小鼠胸腺指数升高(P＜0.05);B组、C组和D组小鼠血清雌二醇和孕酮水平明显高于E组(P＜0.05),A组与E组小鼠血清雌二醇和孕酮水平差异无统计学意义(P＞0.05),A组、B组小鼠血清雌二醇和孕酮水平明显低于C组和D组(P＜0.05),且A组小鼠血清雌二醇和孕酮水平低于B组(P＜0.05);A组、B组、C组和D组小鼠PI3K和Akt蛋白水平明显高于E组小鼠(P＜0.05),A组和B组小鼠PI3K和Akt蛋白水平明显低于C组和D组小鼠(P＜0.05),并且A组小鼠PI3K和Akt蛋白水平明显低于B组(P＜0.05).结论 黄精覆盆子复方颗粒的加工工艺仅在抑制血清雌二醇、孕酮水平和抑制PI3K和Akt表达等方面差异有统计学意义,但对瘤质量及瘤质量抑制率差异无统计学意义,煎制工艺和制粒工艺对黄精覆盆子复方颗粒的疗效影响不显著.