人类生殖细胞低温冷冻作为生育力保存的一种方式，在辅助生殖技术（assisted reproductive technology，ART）发展中起着重要作用，目前该技术已成为生殖医学领域的研究热点之一，并在辅助生殖实践中得到越来越广泛的应用。为提高ART的成功率，冷冻保存技术在发展中不断改进，尤其是冷冻策略的选择和冷冻保护剂的改良与优化。冷冻保存技术适用于行ART治疗或是因疾病导致的生育力下降而进行的卵母细胞、精子、胚胎冷冻保存的群体，也适用于癌症患者为保存生育力而进行的卵巢及睾丸组织冷冻保存。然而，不同的冷冻方法对于不同生殖细胞类型的冷冻效果并不一致，且目前不同生殖细胞冷冻效果的评价尚缺乏合理有效的标准。本文综述了人类生殖细胞低温冷冻保存技术的发展现状及应用，并探讨了低温保存未来的发展方向。

2015年中国新发恶性肿瘤数据统计表明，30岁以下女性患者为3.88万，这些恶性肿瘤患者急需得到医生关于生育力保护和保存的建议，而卵巢组织冷冻方法是保存内分泌功能和生育能力的最佳方法。目前影响卵巢组织存活的关键是解决卵巢组织移植后的缺血再灌注损伤问题，本文将从卵巢组织移植后缺血再灌注的机制，以及抗氧化剂、促血管生成和远处缺血预处理等干预方法进行系统地文献梳理，有助于结合生物技术与医疗技术开发更有效、安全和可操作的解决方案，以改善卵巢移植后缺血状态，解决日益增长的女性生育力保护需求。

目的:探索女性肿瘤患者在腹腔镜卵巢皮质切除术中获取未成熟卵体外成熟后（ in vitro maturation，IVM）冷冻卵母细胞保存生育力的可行性及有效性。 方法:回顾分析2015年11月至2022年4月期间于北京大学第三医院妇产科生殖医学中心行腹腔镜下卵巢皮质切除术的22例肿瘤患者的一般资料、手术方法及术后随访资料。研究组纳入腹腔镜术中同时获取未成熟卵IVM的患者（ n=14）；对照组纳入仅行皮质切除的患者（ n=8）。分析两组患者的手术时间、出血量、冻存皮质数量等数据，评估该方法的应用价值及安全性。研究组根据取卵方式不同分为两个亚组，经阴道取卵亚组（ n=10）及经腹腔镜取卵亚组（ n=4），分析两亚组患者的手术时间、获卵数、冻存皮质数量等数据，评估不同获卵方式的效率。全部22例患者术后每年进行随访，询问肿瘤治疗情况、月经情况，条件允许者返院复查盆腔超声、性激素水平测定，记录这些患者肿瘤治疗后的卵巢功能并予以适应证范围内的激素替代治疗（hormone replacement therapy，HRT）。 结果:研究组和对照组患者年龄、患病时间、抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）水平、冻存皮质数量之间差异均无统计学意义（均 P>0.05），但研究组的基础窦卵泡数（19.71±6.04）、手术时间［（68.07±17.35）min］、出血量［（9.0（5.0，10.5）mL］高于对照组［9.25±3.15， P<0.001；（44.25±16.97）min， P=0.005；3.5（2.0，5.0）mL， P=0.001］，差异均具有统计学意义。14例取卵患者中，经阴道取卵亚组的获卵数［15.5 （11.0，21.0）个］及年龄［（27.00±2.94）岁］显著高于经腹腔镜取卵亚组［4.0 （0.8，10.3）个， P=0.028；（15.75±2.22）岁， P<0.001］，两亚组间患者窦卵泡数、手术时间、冻存皮质数量差异均无统计学意义（均 P>0.05）。接受造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）的7例患者出仓后均出现闭经，疾病缓解后予以HRT，身体发育及生活质量得以维持及改善。 结论:年轻肿瘤患者在进行卵巢皮质切除术时同时获取未成熟卵IVM后冻存可增加生育力保存的机会；经阴道获取未成熟卵的效率更高；HSCT治疗后闭经率高，HRT可以提高患者生活质量。

阑尾杯状细胞腺癌少见，本文报道1例以卵巢肿瘤为首发症状的转移性阑尾杯状细胞腺癌。患者女，67岁。腹痛2个月，CT示盆腔巨大囊实性肿物，考虑附件来源。术中送检左卵巢肿物，镜下观察大片坏死物中见印戒样/杯状细胞呈片状、筛状、腺管样或单个细胞排列。冷冻病理考虑转移性腺癌，建议临床检查消化道。术中探查发现阑尾肿物。遂行全子宫、双附件+右半结肠切除术。镜下观察少许阑尾肿瘤组织学形态与卵巢肿物一致，其他区域肿瘤细胞似神经内分泌细胞呈巢团、缎带状排列。卵巢和阑尾肿瘤均表达SATB2、CDX2，阑尾肿瘤局灶表达突触素。患者术后接受化疗。随访10个月，未见复发。

目的:探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对猕猴卵巢组织的冷冻保存效果。方法:取新鲜的猕猴卵巢组织随机分成对照组(新鲜卵巢组织)、玻璃化冷冻组和程序化冷冻组，分别进行HE染色、窦前卵泡的分类计数及免疫染色，比较3组卵巢组织内卵泡形态学、各级卵泡正常率及磷酸化组蛋白H3(PHH3)的表达量的差异。结果:①HE染色：3组中，始基卵泡、初级卵泡正常率差异均无统计学意义( P均>0.05)；程序化冷冻组单层次级卵泡正常率[40.6%(28/69)]均低于玻璃化冷冻组[53.5%(38/71)]、对照组[60.7%(34/56)]，3组间差异有统计学意义( P=0.044)，但玻璃化冷冻组、对照组间差异无统计学意义( P>0.05)；玻璃化冷冻组、程序化冷冻组多层次级卵泡正常率[23.4%(11/47)，16.7%(7/42)]均明显低于对照组[57.3%(39/68)]( P均<0.001)，玻璃化冷冻组多层次级卵泡正常率高于程序化冷冻组，但差异无统计学意义( P>0.05)。②分离卵泡比较：玻璃化冷冻组、程序化冷冻组初级卵泡正常形态率均接近对照组，差异无统计学意义( P>0.05)；玻璃化冷冻组和程序化冷冻组次级卵泡正常率[38.2%(34/89)，23.7%(23/97)]明显较低，与对照组[56.4%(61/108)]比较差异均有统计学意义( P均<0.001)；玻璃化冷冻组的次级卵泡正常形态率明显高于程序化冷冻组，差异有统计学意义( P<0.001)；③ PHH3染色：玻璃化冷冻组颗粒细胞PPH3的阳性表达率接近对照组( P>0.05)，程序化冷冻组卵泡颗粒细胞PHH3阳性表达率(58.72%±12.31%)明显低于对照组(67.58%±8.45%， P=0.04)和玻璃化冷冻组(62.87%±9.94%， P=0.03)。 结论:玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存卵巢组织，但玻璃化冷冻对卵巢组织冷冻和复融过程中各级卵泡及颗粒细胞形态学的损伤明显低于程序化冷冻，更适合下一步人类卵巢组织的冷冻保存的研究。

目的:探讨复发性交界性卵巢肿瘤患者保留生育力的手术方法和辅助生殖技术助孕策略。方法:回顾性分析1例复发性交界性卵巢肿瘤患者的病例资料。该患者因双侧卵巢复发性交界性肿瘤，多次入院治疗行右附件切除术和左附件囊肿剥除术。患者未避孕3年未孕，考虑该患者强烈的生育需求，采用微刺激方案进行促排卵治疗，辅助生殖技术助孕过程中左侧卵巢肿瘤显著增大，随后行腹腔镜下左附件切除术，选取健康的卵巢皮质冷冻保存，以保留生育能力。结果:患者共经历了5次控制性促排卵，形成了7枚可利用胚胎。患者于第3次冻胚周期移植获得成功妊娠，并分娩一活婴。患者尚有2枚胚胎和3片卵巢组织冻存。结论:年轻且有生育需求的交界性卵巢肿瘤患者，可实施保留生育能力的手术和辅助生殖技术助孕，虽在一定程度上可能会导致疾病复发风险提高，但并不影响患者的生存质量，且使得患者的生育愿望得到实现。

目的:探讨玻璃化冷冻和组织移植对小鼠卵巢组织的影响。方法:将雌性ICR小鼠分为3组：正常对照组（卵母细胞体外培养及受精， n=9）、新鲜移植组（卵巢组织移植后卵母细胞体外培养及受精， n=9）、冷冻移植组（卵巢组织玻璃化冷冻复苏-移植、卵母细胞体外培养及受精， n=9）。同时，为了更为直接地说明玻璃化冷冻对于卵泡数量的影响和卵巢移植后内分泌功能的改变情况，本研究还设置了冷冻复苏组（卵巢组织玻璃化冷冻复苏， n=6）和卵巢去势组（卵巢组织切除， n=6）。卵巢组织移植3周后，通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色计算各组小鼠的卵泡数量、CD31免疫组织化学染色观察卵巢组织新生血管形成、Masson染色观察卵巢组织纤维化、酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清性激素水平，并统计获卵数、体外受精数量和形成囊胚数量。 结果:新鲜移植组和冷冻移植组小鼠的卵巢组织中总卵泡数量均较正常对照组明显减少（均 P<0.001），且都明显少于冷冻复苏组（均 P<0.001）；新鲜移植组小鼠卵巢组织CD31阳性率明显高于正常对照组（ P=0.044），冷冻移植组小鼠高于正常对照组，但差异无统计学意义（ P=0.162）；新鲜移植组和冷冻移植组小鼠卵巢组织纤维化面积百分率均明显高于正常对照组（ P=0.004； P=0.005）；新鲜移植组和冷冻移植组小鼠血清雌二醇水平均明显低于正常对照组（ P=0.005； P=0.001），但明显高于卵巢去势组（ P=0.011； P=0.035），血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）水平均明显高于正常对照组（ P=0.040； P=0.012），但明显低于卵巢去势组（ P=0.001； P=0.004）；新鲜移植组和冷冻移植组小鼠的获卵数均较正常对照组明显减少（均 P<0.001），新鲜移植组小鼠的获卵数高于冷冻移植组，但差异无统计学意义（ P=0.272）；新鲜移植组和冷冻移植组卵母细胞的体外受精数量和囊胚数均明显低于正常对照组（均 P<0.001）。新鲜移植组和冷冻移植组小鼠在总卵泡数量、CD31阳性率、纤维化面积百分率、血清雌二醇和FSH水平、受精数和形成囊胚数上差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:小鼠卵巢组织在接受玻璃化冷冻复苏-移植后能够恢复卵泡生长、内分泌功能以及生育功能，证实利用玻璃化冷冻技术进行卵巢组织冻存可以作为女性生育力保存的一个有效手段。玻璃化冷冻和组织移植均会造成卵巢组织中的卵泡损失并影响生育能力，移植后阶段是卵巢组织冷冻复苏-移植过程中卵泡损失的主要阶段，组织移植是影响卵巢组织冷冻复苏-移植效果的主要因素。

肿瘤患者放、化疗治疗可能会导致卵巢功能紊乱、生育能力丧失，如何保护年轻肿瘤患者的生育力，提高愈后生活质量，是肿瘤治疗者面临的问题。卵巢组织冻存与移植可以恢复患者的生殖内分泌功能，是保护年轻肿瘤患者生育力的重要方法之一，为不适用于卵母细胞冻存和胚胎冻存患者的生育力保存提供了新的选择。近年来，有越来越多的健康婴儿借助卵巢组织移植技术出生，但该技术仍存在移植初期卵泡闭锁、再次引入肿瘤细胞的风险等问题。本文就卵巢组织冻存与移植技术的发展现状进行综述。

目的:探讨青春期前重度β-地中海贫血（thalassemia major，TM）患者进行生育力保存的方法，为青春期前血液疾病患者进行生育力保存提供进一步的数据支持。方法:对1例青春期前拟行造血干细胞移植的TM患者通过卵巢组织冷冻（ovarian tissue cryopreservation，OTC）合并卵子体外成熟（ in vitro maturation，IVM）行生育力保存进行病例报道，结合文献阐述青春期前地中海贫血患者进行生育力保存的时机、指征及策略。 结果:患者卵巢组织获取术后，体外穿刺抽吸共获取24枚卵丘-颗粒细胞复合体（cumulus-oocyte complexes，COCs）及11片卵巢组织皮片。COCs经48 h IVM后共有9枚M Ⅱ期卵子行玻璃化冷冻。 结论:对亟待造血干细胞移植的青春期前女童，OTC结合卵母细胞IVM技术能在短期内最大程度地保存TM患者的生育力，提高其生育力保存的治疗效果。

近年来随着女性生育力保存的需求日益增加，生育力保存相关技术和方法不断得以完善。为了建立适合我国女性生育力保存的实践体系，中国妇幼保健协会生育力保存专业委员会组织专家参考多国的最新指南，结合国内临床实践情况和专家意见，编写了本共识，包括女性生育力保存的适应证以及生育力保存技术和方法两部分内容，为临床常见的适合生育力保存的疾病提供诊疗路径，为生育力保存技术的临床应用提供实践指南，从而规范临床诊疗，推动我国生育力保存工作有序发展。