目的:探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对猕猴卵巢组织的冷冻保存效果。方法:取新鲜的猕猴卵巢组织随机分成对照组(新鲜卵巢组织)、玻璃化冷冻组和程序化冷冻组，分别进行HE染色、窦前卵泡的分类计数及免疫染色，比较3组卵巢组织内卵泡形态学、各级卵泡正常率及磷酸化组蛋白H3(PHH3)的表达量的差异。结果:①HE染色：3组中，始基卵泡、初级卵泡正常率差异均无统计学意义( P均>0.05)；程序化冷冻组单层次级卵泡正常率[40.6%(28/69)]均低于玻璃化冷冻组[53.5%(38/71)]、对照组[60.7%(34/56)]，3组间差异有统计学意义( P=0.044)，但玻璃化冷冻组、对照组间差异无统计学意义( P>0.05)；玻璃化冷冻组、程序化冷冻组多层次级卵泡正常率[23.4%(11/47)，16.7%(7/42)]均明显低于对照组[57.3%(39/68)]( P均<0.001)，玻璃化冷冻组多层次级卵泡正常率高于程序化冷冻组，但差异无统计学意义( P>0.05)。②分离卵泡比较：玻璃化冷冻组、程序化冷冻组初级卵泡正常形态率均接近对照组，差异无统计学意义( P>0.05)；玻璃化冷冻组和程序化冷冻组次级卵泡正常率[38.2%(34/89)，23.7%(23/97)]明显较低，与对照组[56.4%(61/108)]比较差异均有统计学意义( P均<0.001)；玻璃化冷冻组的次级卵泡正常形态率明显高于程序化冷冻组，差异有统计学意义( P<0.001)；③ PHH3染色：玻璃化冷冻组颗粒细胞PPH3的阳性表达率接近对照组( P>0.05)，程序化冷冻组卵泡颗粒细胞PHH3阳性表达率(58.72%±12.31%)明显低于对照组(67.58%±8.45%， P=0.04)和玻璃化冷冻组(62.87%±9.94%， P=0.03)。 结论:玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存卵巢组织，但玻璃化冷冻对卵巢组织冷冻和复融过程中各级卵泡及颗粒细胞形态学的损伤明显低于程序化冷冻，更适合下一步人类卵巢组织的冷冻保存的研究。

目的:探讨重度β地中海贫血（β-thalassemia，β-TM）青春期前男孩在性腺毒性治疗前进行生育力保存的方法。方法:报道3例重度β-TM男孩行造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation， HSCT）前，采用慢速程序化冷冻方法行睾丸组织冷冻保存，并结合文献对青春期前男孩进行生育力保存的必要性和地中海贫血男孩生育力监测、睾丸冷冻方法学及其相关流程进行阐述。结果:采用慢速程序化冷冻方法分别成功为3例男孩冷冻31块、31块、20块睾丸组织，冷冻过程顺利。结论:对拟行HSCT的重度β-TM男孩，青春期前睾丸组织冷冻可以保存其生育力，为其成年后孕育后代留下希望。

近年来,恶性肿瘤治疗技术的进步改善了患者的远期预后,但放化疗对卵巢功能的损伤已成为新的焦点问题,越来越多的育龄期女性患者开始重视治疗后的生育力保存.女性生育力保存包括胚胎冷冻、卵母细胞冷冻及卵巢组织冷冻,其中,胚胎及卵母细胞冻存技术已近成熟,但不适用于儿童、未婚女性及迫切需要治疗的肿瘤患者.卵巢组织冷冻保存是继胚胎和卵母细胞冷冻技术之后的另一重大突破,其保存方法主要包括慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻.

目的:探讨青春期前男孩睾丸组织冷冻保存手术护理配合的方法.方法:回顾性分析生育力保存的4 例青春期前男孩睾丸组织冷冻保存围手术期护理方法与效果,重点阐述与睾丸组织保护相关的术前、术中无菌冰盅的制作准备及使用注意事项,术中睾丸组织离体后的保护以及转运等细节.结果:进行生育力保存的 4例青春期前男孩手术均顺利完成,快速恢复,获取的睾丸组织得到良好保护并顺利转运到胚胎实验室,组织状态好,规范处理后采用慢速程序化冷冻方法分别为4 例患者冷冻了 31、31、20、34 块睾丸组织,为患者未来恢复、维持男性内分泌功能、生育自己的后代提供了可能.结论:对于需进行生育力保存的男孩,睾丸组织获取术围手术期无菌冰盅的准备、使用及术中护理操作配合、组织保护转运等措施,可以实现睾丸组织的有效保护,为后续胚胎实验室睾丸组织的处理及冷冻奠定了基础,取得了很好的护理效果,也为生育力保存护理的推进提供借鉴和参考.

目的 利用昆明小白鼠胚胎体外培养技术评估海淀区妇幼保健院新建实验室,选择合适的胚胎冷冻方法.方法 ①将小鼠体外和体内受精胚胎培养至第5天,观察囊胚形成率;②对第3天胚胎进行程序化及玻璃化冷冻和解冻.结果 ①两种方法的囊胚形成率均大于80％,且差异无统计学意义.②两种冷冻方法的胚胎复苏率均大于80％,玻璃化方法的胚胎复苏率高于程序化方法的胚胎复苏率,且差异有统计学意义.结论 本实验中,小鼠体内、体外受精胚胎在体外均稳定发育,符合各项质控标准;实验结果还为本中心选择玻璃化方法冻存胚胎提供了依据.

目的 比较研究在玻璃化冷冻和慢冻解冻后卵裂期胚胎的发育潜能和临床结局.方法 在我院生殖医学中心以同期慢速冷冻解冻胚胎为对照,收集2015年3月-2017年5月在行玻璃化冷冻解冻的分裂期胚胎,并进行囊胚培养,如继续发育后行胚胎移植,并随访比较其临床结局.结果 玻璃化组复苏率为99.4±4.1％,囊胚形成率为60.0％±33.0％,临床妊娠率为56.8％ (54/95),出生率为47.4％ (45/95);慢冻组复苏率为95.2±12.2％,囊胚形成率为48.3％±29.6％,临床妊娠率为50.0％ (19/38),出生率为44.7％ (17/38).两组冻胚时年龄、冷冻时平均优质胚胎数比较,差异无统计学意义(P＞0.05);两组囊胚形成率、临床妊娠率和出生率比较,未发现差异有统计学意义(P＞0.05).结论 胚胎的玻璃化冷冻保存,可以获得比较满意的囊胚形成率和临床结局;囊胚培养可以进一步筛选具有种植潜能的胚胎.

目的:比较程序化冷冻与玻璃化冷冻人卵巢组织的冻存效果.方法:收集19例人卵巢组织标本,每例分成2份,1份应用程序化方法冷冻,另1份应用玻璃化方法冷冻,复苏后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下.38只重症联合免疫缺陷(SCID)裸鼠(移植宿主)随机分为2组:A组19只,移植程序化冷冻复苏的人卵巢组织;B组19只,移植玻璃化冷冻复苏的人卵巢组织.以去除移植宿主双侧卵巢日为D0,移植人卵巢组织日为D21,整个实验过程中,每日通过阴道脱落细胞学检查观察移植宿主动情周期变化,分别于D0、D21、D42、D63取裸鼠静脉血,酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清AMH浓度.结果:切除卵巢后移植宿主动情周期消失,D63共有14只裸鼠恢复动情周期,2组间差异无统计学意义(A组8只,B组6只,P＞0.05),但A组恢复时间显著少于B组[(16.38±1.60)d vs.(18.33±1.21)d,P＜0.05].2组间AMH水平在D0、D21、D42、D63差异均无统计学意义(P＞0.05),但A组、B组D21 AMH水平均显著低于D0,差异有统计学意义(P＜0.05).恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63逐渐回升但未恢复至D0水平,未恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63均未回升但仍低于D0.结论:程序化冷冻和玻璃化冷冻均能有效保存卵巢组织.在冷冻的卵巢组织经解冻-移植后宿主恢复动情周期方面,程序化冷冻要优先于玻璃化冷冻,但仍需进一步研究.

目的 探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对人卵母细胞纺锤体定位、细胞骨架及其发育潜能的影响.方法 将第2日发育为MI卵母细胞随机分为对照组、程序化冻融组、玻璃化冻融组(解冻0 h、1 h、3 h).应用液晶偏振光显微镜(Polscope)成像系统观察卵母细胞纺锤体与第一极体(Pb)的夹角、表面积、卵透明带内层光阻值和外层光阻值.采用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察卵母细胞的表面和内部超微结构.统计2种冻融方法对卵母细胞发育潜能的影响.结果 对照组、程序化冷冻解冻培养3 h组和玻璃化冷冻解冻后培养0 h、1 h、3 h组中的纺锤体可见率分别为92.4％、56.4％、11.2％、24.8％、61.1％.与程序化冻融组相比,玻璃化冷冻解冻培养3 h后卵母细胞中纺锤体与Pb的夹角更小(37.3° 与68°,P=0.023).对照组、程序化冻融组和玻璃化冻融后培养3 h组中卵母细胞的纺锤体面积、卵透明带内层光阻值和透明带外层光阻值差异无统计学意义(P>0.05).与程序化冻融组相比,玻璃化冻融后培养3 h组中卵母细胞表面突起丰富,微绒毛形态较为正常,倒伏在细胞表面,卵透明带边界较为清晰,与对照组较为接近.程序化冻融组的正常受精率(65.7％)明显低于对照组(79.2％,P=0.041),而卵裂率和囊胚形成率与对照组和玻璃化冻融组差异无统计学意义(P>0.05).玻璃化冻融后培养3 h组中正常受精率、卵裂率、囊胚形成率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 相比程序化冷冻,玻璃化冷冻对卵母细胞纺锤体和卵透明带的损伤及对卵母细胞的发育潜能的影响都较小,可以作为卵母细胞冷冻的一种有效方法.

癌症患者治疗前行卵巢组织冷冻保存、待其病情稳定后,重新进行卵巢组织移植,可使其保持女性的正常生殖内分泌功能,并能够进行正常生育.目前常用的冷冻方案包括慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻,其中慢速程序化冷冻是卵巢组织冷冻的标准方法,但近年来玻璃化冷冻由于其方便、高效,越来越受到关注.卵巢组织冷冻保存作为癌症患者保留生育能力的一种选择具有广泛的应用前景.虽然卵巢组织移植已用于临床,并有成功分娩的报道,但卵巢组织体外培养技术尚处于研究阶段,仍不够成熟.本文旨在对卵巢组织体外培养及冻融技术的方法改进以及现阶段的研究情况作一综述.

目的 通过检测血管生成素-2(Ang-2)的表达,探讨两种冷冻方法对人卵巢组织的冻融及异种移植后的效果.方法 共收集16例人卵巢组织标本,每例分成2份,其中1份应用程序化冷冻方法进行冷冻,另1份应用玻璃化冷冻方法进行冷冻.解冻后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下.32只SCID裸鼠随机分为两组:A组16只,移植以程序化方法冷冻复苏的人卵巢组织;B组16只,移植以玻璃化方法冷冻复苏的人卵巢组织.解冻后及移植6周后观察两组卵巢组织中始基卵泡的存活及颗粒细胞Ang-2的表达情况.结果 解冻后,A组Ang-2的阳性率明显高于B组(P＜0.05),始基卵泡正常率两组相比差别不明显(P＞0.05).移植后,始基卵泡正常率及Ang-2的阳性率两组相比均无明显差别(P＞0.05).解冻后和移植后相比,两组的Ang-2阳性率及A组的始基卵泡正常率差别均不明显(P＞0.05),B组移植后始基卵泡正常率明显低于解冻后(P＜0.05).结论 与玻璃化冷冻相比,程序化冷冻对人卵巢组织始基卵泡颗粒细胞Ang-2的表达影响更小.将解冻后的人卵巢组织进行异种移植不影响Ang-2的表达.