天然斑蝥素源自于芫青科昆虫斑蝥。斑蝥作为传统中药昆虫类药物之一，对消化道肿瘤等实体肿瘤、机体顽癣、瘰疬、赘疣、斑秃、颜面神经麻痹等具有一定的治疗作用。西医基础研究表明，斑蝥提取物斑蝥素在体外明显干预肿瘤细胞凋亡、自噬等生物学过程，具有显著的抗肿瘤活性。天然提取的斑蝥素或斑蝥虫中药炮制品毒副作用明显，相关药品的直接使用不仅对皮肤、粘膜具有剧烈的刺激作用，也会对肝、肾、胃等主要脏器功能产生显著损害，因此限制了它在临床中的广泛应用。近年研究表明，人工制备的天然斑蝥素的化学衍生物(去甲斑蝥素、斑蝥胺、斑蝥素钠等)可显著降低毒副作用并保留天然斑蝥素的部分生物学功能，有望成为包括肿瘤在内的多种疾病的潜在有效药物。文章对斑蝥素及其衍生物在肿瘤治疗中的作用机制以及应用前景作一综述。

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)体外对骨巨细胞瘤(GCTB)细胞活性、侵袭能力及凋亡的作用及其相关机制。方法:收集复旦大学附属华山医院2018年1月—2019年3月骨科3例GCTB患者的术中肿瘤组织标本，其中男2例、女1例，年龄分别为35岁、40岁、27岁，Campanacci影像学分级均为2级。(1)将GCTB标本组织进行原代细胞分离、培养、鉴定。(2)将制备好的GCTB细胞分为对照组及4个浓度NCTD组，其中NCTD组分别加入5、10、20、40 μg/mL的NCTD溶液200 μL；对照组加入α-MEM细胞培养基200 μL。培养后在显微镜下观察各组的细胞形态，采用CCK-8法检测各组细胞的活性。(3)将制备好的GCTB细胞分为对照组、5 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组，采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力，采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率，采用caspase-3、caspase-9酶活性检测试剂盒检测各组细胞中caspase-3和caspase-9的酶活性，采用DHE染色检测GCTB细胞中活性氧(ROS)水平，采用JC-1染色检测GCTB细胞线粒体膜电位水平，采用Western blot检测相关凋亡蛋白cleaved caspase-3、caspase-3、cleaved caspase-9、caspase-9、B细胞淋巴瘤相关蛋白X(Bax)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的表达情况。结果:(1)GCTB组织标本经体外分离培养、传代后，镜下多为不规则形的间质细胞，细胞核周围CD68表达阳性，提示所提取分离细胞为GCTB细胞。(2)GCTB细胞活性检测，显微镜下观察显示，NCTD对GCTB细胞的增殖有抑制作用，随NCTD浓度的增加，细胞逐渐出现皱缩、悬浮，逐渐丧失原有形态；CCK-8检测结果显示，对照组、5 μg/mL NCTD组、10 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组、40 μg/mLNCTD组GCTB细胞的存活率分别为100%、76.45%±9.86%、62.34%±10.21%、39.74%±8.36%、25.54%±7.18%，随着NCTD浓度的增加，细胞存活率逐渐降低，各组间比较差异有统计学意义( F＝75.716, P<0.01)。(3)Transwell小室细胞侵袭能力检测，对照组、5 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组侵袭细胞比例分别为49.33%±9.84%、32.84%±2.73%、8.34%±1.41%，各组间比较差异有统计学意义( F＝36.034, P<0.01)。细胞凋亡检测，对照组、5 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组细胞凋亡率分别为4.73%±0.05%、14.23%±0.85%、51.21%±10.47%，各组间比较差异有统计学意义( F＝49.183, P<0.01)。caspase-3、caspase-9酶活性的检测，对照组、5 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组caspase-3、caspase-9酶活性逐渐增高，各组间比较差异均有统计学意义( F＝15.223、30.841, P值均<0.01)。GCTB细胞ROS水平检测，随着NCTD浓度的增加，对照组、5 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组GCTB细胞中ROS的水平明显升高，并呈剂量依赖性。GCTB细胞线粒体膜电位水平检测，对照组、5 μg/mL NCTD组、20 μg/mL NCTD组GCTB细胞胞膜电位的红/绿光强度比分别为2.01±0.11、1.27±0.07、0.79±0.14，各组间比较差异有统计学意义( F＝128.641, P<0.01)。凋亡相关蛋白检测，对照组、5μg/mL NCTD组、20μg/mL NCTD组cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的相对表达量逐渐升高，Bcl-2蛋白的相对表达量则逐渐降低，各组间比较差异均有统计学意义( P值均<0.01)；而caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平无明显变化，各组间比较差异均无统计学意义( P值均>0.05)。 结论:NCTD可显著抑制GCTB细胞的体外活性，增加细胞侵袭能力，促进细胞凋亡。其作用机制可能与降低细胞线粒体膜电位、提高细胞活性氧水平、调整凋亡相关蛋白的表达有关。

目的:探讨去甲斑蝥素对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株凋亡的影响,并初步分析其可能的作用机制.方法:将SK-N-SH细胞分为空白对照组及去甲斑蝥素50、100、500 μg/L组.观察各组SK-N-SH细胞形态学变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,试剂盒检测氧化损伤指标水平,RT-PCR检测凋亡相关基因表达,Western Blot检测凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达.结果:与空白对照组比较,干预48 h后,去甲斑蝥素各给药组细胞形态皱缩,细胞贴壁能力较弱,细胞数量较少,细胞内颗粒较多;除去甲斑蝥素低浓度组细胞活力在16 h差异无统计学意义(P＞0.05)外,作用16、24、48 h去甲斑蝥素各浓度组SK-N-SH细胞活力显著降低(P＜0.05);作用24 h,去甲斑蝥素各浓度组细胞早期凋亡率及ROS、MDA显著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA 及蛋白表达显著升高,p-PI3Kp85、p-Akt、p-mTOR、p-4E-BP 1 蛋白表达显著降低(P＜0.05),去甲斑蝥素的作用呈浓度依赖性.结论:去甲斑蝥素可促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株凋亡,且其作用呈浓度依赖性,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.

目的 对去甲斑蝥素的药理作用机制及临床联用进行系统阐述,并对开发去甲斑蝥素新型给药系统进行展望,为去甲斑蝥素进一步深入研究和临床应用奠定基础.方法 查阅国内外相关文献,对去甲斑蝥素的药理作用机制和临床联合用药情况进行分析和归纳总结.结果 去甲斑蝥素既可以通过单药多靶点机制实现抗肿瘤作用,还具有升高白细胞和调节机体免疫平衡的功能;去甲斑蝥素在临床上可以与化疗药物、免疫药物、靶向药物或放射疗法等联用,实现协同抗癌作用;去甲斑蝥素有望开发出脂肪乳注射液、乳化体和脂质体-乳剂复合体等高靶向、缓控释、低毒性和不良反应少的新型改良系统.结论 去甲斑蝥素临床联用具有广阔的应用前景,有待进一步深入研究.

探究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blot实验检测 NCTD对MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和MCL-1表达水平的影响;采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,Parkin和PINK1表达水平的影响;采用流式细胞术检测NCTD对MDA-MB-231细胞线粒体膜电位及线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)变化情况的影响;采用共聚焦显微镜检测NCTD对表达mCherry-EGFP-LC3的MDA-MB-231细胞自噬流的影响;采用流式细胞术检测NCTD联合使用氯喹(chloroquine,CQ)或3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)后,对MDA-MB-231细胞凋亡情况的影响.实验结果显示,NCTD可显著上调Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的表达水平,促进Parkin的线粒体易位,阻断自噬流.此外,NCTD联合使用CQ加剧了细胞凋亡,而NCTD联合使用3-MA则减少了细胞凋亡.研究结果表明,NCTD可以诱导自噬体积累并导致MDA-MB-231细胞凋亡.

目的 探究去甲斑蝥素(NCTD)对U251胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响及分子机制.方法 用不同浓度的NCTD处理U251细胞后,MTT法检测NCTD对U251细胞的细胞毒性.体外培养U251细胞,分为正常对照(NC)组、MST1/2抑制剂XMU-MP-1组(5 μmol/L)、25 μmol/L NCTD组、50 μmol/L NCTD组、100 μmol/L NCTD组、NCTD+XMU-MP-1组(100 μmol/L NCTD+5 μmol/L XMU-MP-1).给予相应的干预后,细胞克隆形成实验检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测Hippo/Yes相关蛋白(YAP)和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白[哺乳动物Ste-20样激酶(MST)1/2、p-MST1/2、大型肿瘤抑制因子(LATS)1/2、p-LATS1/2、YAP、p-YAP、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、β-catenin]的表达.结果 与NC组相比,25、50、100、200 μmol/L NCTD处理组U251细胞活力降低(P<0.05).与NC组相比,25、50、100 μmol/L的NCTD可抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭,并促进U251细胞凋亡(P均＜0.05);Western blot结果显示,NCTD可上调U251细胞中p-LATS1/2、p-MST1/2、p-YAP和GSK-3β蛋白表达,抑制p-GSK-3β和胞核YAP的表达,降低β-catenin在细胞核中的积累(P＜0.05);且XMU-MP-1可减弱NCTD对YAP和β-catenin核易位的抑制作用(P<0.05).结论 NCTD可抑制U251胶质瘤细胞的恶性生物学行为,其作用机制可能与激活Hippo信号通路,抑制YAP的核易位,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.

大肠癌是一种复杂的疾病,其发生发展涉及多个信号通路的异常.中医药在大肠癌的治疗中发挥了积极的作用,可以通过调控多个信号通路,影响大肠细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞衰老、细胞自噬、化疗耐药、上皮-间质转化、细胞侵袭和转移、血管生成等生物过程,从而发挥治疗的作用.研究显示,藤龙补中汤可以调控p16/p21-Rb信号通路,阻滞大肠癌细胞周期,促大肠癌细胞衰老.斑蝥素、白花蛇舌草、藤龙补中汤等中药可以调控大肠癌细胞凋亡通路,激发大肠癌细胞凋亡.黄芩素、和厚朴酚、左金丸等中药可以调控大肠癌核转录因子(NF)-κB通路,抑制大肠癌细胞增殖、促大肠癌细胞凋亡,增强化疗药的敏感性.澳洲茄胺、苦参碱、透脓散等中药可以调控大肠癌磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路,抑制大肠癌细胞增殖、促大肠癌细胞凋亡.Diterpenoid C,蟾毒灵,凌草乙素等可以调控大肠癌有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,抑制大肠癌细胞增殖、促大肠癌细胞凋亡或自噬.姜黄素、半枝莲、健脾复方等可以调控大肠癌分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)通路,抑制大肠癌细胞增殖或转移.去甲斑蝥素、乌索酸、海带多糖等可以调控大肠癌表皮生长因子受体(EGFR)通路,抑制大肠癌细胞增殖,阻滞细胞周期或激发细胞凋亡.氧化苦参碱、健脾解毒方、片仔癀等可以调控转化生长因子(TGF)-β/Smad通路,抑制大肠癌上皮-间质转化和转移.白花蛇舌草、半枝莲、肠复康等可以调控Hedgehog通路,抑制大肠癌血管生成.

目的:探讨去甲斑蝥素立方液晶纳米粒的制备工艺.方法:采用不同方法制备去甲斑蝥素立方液晶纳米粒,紫外分光光度法测定药物包封率及体外释放度.结果:利用乳化法制备的立方液晶具有较好的包封率,粒径在140nm左右,粒度分布均匀,稳定性良好.结论:采用乳化法制备立方液晶纳米粒简便可行,去甲斑蝥素立方液晶具有良好的缓释作用.

血管生成是肿瘤生长、转移的重要基础,抗血管生成治疗已成为大肠癌常规治疗方式.研究显示丹参酮ⅡA、去甲斑蝥素和龙葵碱等中药单体,白花蛇舌草、半枝莲和白头翁等中药,健脾解毒方、健脾消癌方及藤龙补中汤等中药复方具有抑制大肠癌血管生成作用.在既有研究基础上,进一步发掘中医药资源,研发高效低毒的抗血管生成的中药制剂,对大肠癌的治疗具有重要意义.

目的:制备去甲斑蝥素白蛋白纳米粒,并考察其理化性质.方法:采用超高压微射流技术制备去甲斑蝥素白蛋白纳米粒,以白蛋白纳米粒的平均粒径和药物包封率作为评价指标,首先应用Plackett-Burman试验设计法筛选出对白蛋白纳米粒性质影响显著的处方和工艺变量,再通过Box-Behnken试验设计法对筛选的变量进一步优化.考察了去甲斑蝥素白蛋白纳米粒的外观形态、粒径分布和Zeta电位及体外释药行为.结果:通过优化制备的去甲斑蝥素白蛋白纳米粒呈类球形分布,平均粒径为(105.2 ± 30.1)nm,PdI为0.127,Zeta电位为( -24.7 ± 1.9)mV,在0.5%吐温80磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中24 h的累积释放度为81.4%.结论:采用超高压微射流技术制备去甲斑蝥素白蛋白纳米粒,工艺简便可行,重复性好,有望工业化生产.