目的:观察调控蛋白激酶B(Akt)/鼠双微体基因2(MDM2)/p53信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)恶性生物学行为的影响。方法:取对数期H1975细胞株(美国类型培养物保藏中心)，分别用Akt/MDM2/p53信号通路激活剂SC79(4 μg/ml)、抑制剂perifosine(5.0 μmol/L)处理，设为SC79组、perifosine组，取不做任何处理的H1975细胞株设为空白组。干预24 h检测细胞增殖能力、凋亡率及侵袭能力。多组间比较用单因素方差分析，两组间比较用LSD- t检验。 结果:SC79组24、48、72 h吸光度值(0.38±0.05、0.63±0.07、0.89±0.12)高于空白组(0.25±0.04、0.46±0.07、0.62±0.11， t＝4.540、3.840、3.709， P<0.01)；perifosine组24、48、72 h吸光度值(0.16±0.04、0.29±0.06、0.40±0.09)低于空白组(0.25±0.04、0.46±0.07、0.62±0.11， t＝3.558、4.123、3.461， P<0.01)。SC79组凋亡率[(2.01±0.57)%]低于空白组[(3.21±0.74)%， t＝2.813， P<0.05]；perifosine组凋亡率[(12.38±3.01)%]高于空白组[(3.21±0.74)%， t＝7.569， P<0.01]。SC79组每个视野透膜细胞数量(95.20±15.62)高于空白组(54.80±9.13， t＝4.993， P<0.05)；perifosine组每个视野透膜细胞数量(30.40±8.41)低于空白组(54.80±9.13， t＝4.395， P<0.01)。 结论:激活Akt/MDM2/p53信号通路可促进NSCLC细胞增殖、侵袭，抑制其凋亡。

基于CKB/p53 信号通路研究白花丹醌对人肝癌Huh-7 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.将白花丹醌 1～12 μmol·L-1 处理Huh-7细胞,进行细胞增殖和活性cell counting kit-8(CCK-8)实验,确定1、3、6 μmol·L-1 为低、中、高浓度用于后续实验.采用规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)-9 基因编辑技术敲除 Huh-7 细胞中的脑型肌酸激酶(creatine kinase,brain type,CKB)基因;CKB过表达慢病毒转染Huh-7细胞上调CKB的表达.通过平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测CKB的mRNA表达情况;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验检测CKB、p53、双微体同源基因2(mouse double minute 2 homolog,MDM2)、B淋巴瘤细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱天冬酶(caspase)-3 蛋白表达水平.结果显示白花丹醌显著抑制Huh-7细胞增殖,诱导细胞凋亡.与对照组比较,白花丹醌组凋亡水平显著升高,而白花丹醌联合凋亡抑制剂组凋亡水平显著降低.白花丹醌可显著下调CKB、Bcl-2和MDM2 蛋白表达水平,上调p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平.敲除CKB基因后,Huh-7细胞增殖能力降低,凋亡率升高,Bcl-2 和MDM2 蛋白表达水平降低,p53、Bax和caspase-3 蛋白表达水平升高.上调CKB表达后,Huh-7细胞增殖能力增强,Bcl-2和MDM2 蛋白表达水平升高,p53、Bax和caspase-3 蛋白表达水平降低.而白花丹醌可逆转过表达CKB对Huh-7细胞增殖和凋亡的作用.该实验表明,白花丹醌可显著抑制Huh-7细胞的增殖能力,其机制可能是通过抑制CKB表达,激活p53 信号通路,调控线粒体相关凋亡蛋白的表达,最终诱导细胞凋亡.

目的 观察益母草碱调节蛋白激酶B(Akt)/双微体同源基因2(MDM2)/p53 信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响.方法 2022 年3-9 月于湖北省十堰市太和医院实验室进行实验.采用CCK-8 法测定不同浓度(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L)益母草碱处理的小鼠脑胶质瘤细胞GL261 存活率并筛选出其最佳作用浓度.体外培养GL261 细胞并随机分为对照组、益母草碱组、益母草碱+SC79(Akt激活剂)组,以益母草碱1.6 mmol/L和5 μmol/L的SC79 分组处理后,采用蛋白免疫印记法检测各组细胞Akt/MDM2/p53 通路相关蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况.构建颅内胶质瘤小鼠模型30 只并随机分为对照组、益母草碱低剂量组、益母草碱中剂量组、益母草碱高剂量组及益母草碱高剂量+ SC79组,分组处理后以 TUNEL染色检测各组小鼠颅内胶质瘤细胞凋亡情况;以免疫印记法检测各组胶质瘤组织 Akt/MDM2/p53 通路相关蛋白表达.结果 (1)细胞实验:与对照组比较,益母草碱组细胞凋亡率、p53 蛋白表达显著升高(P<0.05),存活率、迁移率、侵袭数、p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2 降低(P<0.05);与益母草碱组比较,益母草碱+ SC79 组细胞凋亡率、p53 蛋白表达降低(P<0.05),存活率、迁移率、侵袭数、p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2 升高(P<0.05).(2)动物实验:与对照组比较,益母草碱组胶质瘤组织细胞凋亡率、p53 蛋白表达升高(t/P =20.076/<0.001、7.486/<0.001),p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2 降低(t/P =11.769/<0.001、7.579/<0.001);与益母草碱组比较,益母草碱+SC79 组胶质瘤组织细胞凋亡率、p53 蛋白表达降低(t/P =18.328/<0.001、7.359/<0.001),p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2升高(t/P =9.640/<0.001、5.529/<0.001).结论 益母草碱可通过抑制Akt/MDM2/p53 信号而抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭及在小鼠体内生长,并诱导其凋亡,最终抑制其恶性进展.

RNPC1是一种RNA结合蛋白,通过调节其靶基因mRNA的稳定性在细胞增殖活动、细胞周期、细胞肌源性分化等细胞生物学活动中发挥作用.目前研究发现,RN PC1能够调节p53、p21、p73、p63、人抗原R、巨噬细胞抑制细胞因子1、紧密连接蛋白1、磷酸酯酶与张力蛋白同源物、雌激素受体、孕酮受体、c-Myc、鼠科双微体2等基因mRNA的稳定性.RNPC1参与肿瘤发生、发展的机制十分复杂.生物信息学分析表明,RN PC1具有抑癌和促癌双重性,在不同类型的癌症中发挥着不同的作用.本文综述RN PC1的研究进展.

大多数神经母细胞瘤患者的瘤细胞的染色体改变是特异的；染色体数目的变化范围很大，大多数为近2倍体；染色体结构异常最常见是1号染色体短臂部分缺失，同时还可见到双微体和均质染色区；这些染色体改变与神经母细胞瘤的诊断、分期、预后及治疗有密切关系，在Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ-S期不出现或较少出现染色体结构异常，提示肿瘤正在进展。Ⅲ期和Ⅳ期肿瘤常见染色体畸变，预后极差。此文，还分析了肿瘤染色体变化与癌基因N-myc扩增之间的关系。

目的 探讨不同静脉麻醉药对人高级别脑胶质瘤(HGG)U251细胞增殖和迁移能力的影响.方法 分别采用生理盐水、4 mg·L-1丙泊酚、50 nmol·L-1右美托咪定及500μmol·L-1硫喷妥钠处理HGG细胞U2516 h,以此将U251细胞分为对照组、丙泊酚组、右美托咪定组(右美组)及硫喷妥钠组(硫喷组).CCK-8实验及克隆形成实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞侵袭及迁移能力,实时荧光定量PCR及Western blot实验检测各组细胞原癌基因(C-MYC)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、表皮生长因子受体(EGFR)、双微体基因2(MDM2)的mRNA及蛋白表达变化.结果 相比对照组,丙泊酚组、右美组及硫喷组U251细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(P均<0.01),丙泊酚组增殖及迁移、侵袭能力又低于右美组及硫喷组(P均<0.05);与对照组比较,丙泊酚组C-MYC、PDGFR、EGFR、MDM2的mRNA及蛋白表达均降低(P均<0.01),而右美组C-MYC及EGFR的表达均降低(P均<0.01),硫喷组PDGFR及EGFR的表达均降低(P均<0.01).结论 丙泊酚、右美托咪定及硫喷妥钠可抑制U251细胞增殖及迁移能力,可能与抑制C-MYC、PDGFR、EGFR和MDM2的表达有关.

目的 研究荆防颗粒对马兜铃酸Ⅰ致小鼠急性肾损伤的预防和保护作用.方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和荆防颗粒低、中、高剂量(4、8、16g/kg)组,各给药组连续7 dig相应药物,第5天给药2 h后,除对照组外,其余各组ip马兜铃酸Ⅰ(10mg/kg),连续3d,建立急性肾损伤模型.末次给药后,检测血清中肌酐(creatinine,CRE)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色检测肾组织病理变化;采用TUNEL染色观察小鼠肾组织细胞凋亡情况;检测小鼠肾组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用ELISA检测小鼠肾组织中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)和 IL-6 水平;采用 Western blotting 检测肾组织蛋白激酶 B(protein kinase B,Akt)、双微体扩增基因 2(murine double minute 2,MDm2)、p53、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠血清BUN和CRE水平显著升高(P＜0.01),肾脏出现明显病理损伤;肾组织MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平显著升高(P＜0.01),SOD活性及GSH水平显著降低(P＜0.01),提示肾脏细胞出现氧化应激损伤;肾组织中细胞凋亡数量明显增多(P＜0.01),促凋亡因子p53、Bax蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),Akt、MDm2和Bcl-2蛋白表达受到抑制(P＜0.01).与模型组比较,荆防颗粒组能够明显改善小鼠肾组织病理损伤,降低血清中炎症因子水平,调节氧化应激,上调肾组织Akt、MDm2和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制肾组织p53和Bax的表达,减少肾组织细胞凋亡(P＜0.01).结论 荆防颗粒可以通过抗氧化应激和炎症来减轻马兜铃酸造成的急性肾损伤,其作用机制可能与调控Akt/MDm2/p53通路、抑制细胞凋亡有关.