目的:分析发动蛋白1(DNM1)基因表达与结直肠癌(CRC)患者临床病理参数及预后的关系，探究DNM1与自噬机制的关联。方法:应用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析DNM1在CRC患者正常肠黏膜与癌组织中、肿瘤早期(TNMⅠ期与Ⅱ期)与晚期(TNM Ⅲ期与Ⅳ期)癌组织中的mRNA水平差异，用Kaplan-Meier法进行生存时间估计及预后分析；用免疫组织化学染色检测118例CRC患者癌组织的DNM1蛋白表达情况，分析其表达特点与临床病理参数及预后的关系；用基因集富集分析(GSEA)CRC患者癌组织中DNM1与自噬相关的信号通路；使用共聚焦显微镜检测并分析DNM1(和其他5个自噬相关蛋白ATG9B、ULK1、Beclin-1、P62/SQSTM1、ATG16L1)与自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)的免疫荧光双染色的皮尔逊相关系数(PCC)。结果:DNM1在CRC肿瘤组织中表达升高，在肿瘤晚期的表达显著升高( P<0.05)；Kaplan-Meier生存分析示：DNM1的表达量与肿瘤预后负相关[ HR＝1.71，95% CI(1.21，2.40)， P<0.01]。DNM1阳性强度与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、癌结节、远处转移、神经及脉管侵犯、分化程度、组织学分型、特殊组织学分型有关(均 P<0.01)。有序logistic回归模型验证了肿瘤分化及DNM1的阳性程度均为CRC患者不良预后的危险因素，DNM1强阳性与腺癌复发正相关( P<0.05)。DNM1高表达涉及负调控雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)等自噬的关键信号通路( P<0.05， FDR<0.001)。六组免疫荧光双染色中DNM1与LC3B两基因表达模式的相关性最大。 结论:DNM1高表达是CRC患者的不良预后因素，可能通过正向调控自噬与肿瘤进展有关。

目的:探讨人参皂苷Rd通过发动蛋白相关蛋白1(DRP1)介导的线粒体分裂缓解蟑螂提取物(CRE)诱导的哮喘小鼠气道炎症的分子机制.方法:动物(BALB/c小鼠)和细胞(人气道上皮BEAS-2B细胞)实验均设置对照组、模型组(CRE组)、CRE+低剂量人参皂苷Rd组、CRE+高剂量人参皂苷Rd组和CRE+地塞米松组.利用HE染色法观察肺组织病理改变;ELISA及流式细胞术检测辅助性T细胞(Th1/Th2)因子水平;Western blot和荧光染色法检测活性氧(ROS)产生、线粒体分裂蛋白及线粒体形态.结果:人参皂苷Rd显著减轻CRE诱导的小鼠气道周围炎症细胞浸润,降低血清总免疫球蛋白E(IgE)和CRE特异性IgE水平(P<0.05),以及支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例(P<0.05),纠正Th1/Th2失衡(P<0.05).人参皂苷Rd还可降低模型小鼠肺组织和CRE诱导的BEAS-2B细胞中DRP1、p-DRP1(Ser616)和线粒体分裂蛋白1(FIS1)水平(P<0.05),改善线粒体形态,抑制ROS产生.结论:人参皂苷Rd通过下调DRP1介导的线粒体分裂,减轻CRE诱导的哮喘气道炎症.本研究对人参皂苷Rd在哮喘模型中的免疫药理作用提出了新的见解.

目的:探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)在小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及迁移中的作用及机制.方法:用30 μg/L血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导小鼠VSMCs增殖和迁移,将小鼠VSMCs分为溶剂对照(vehicle)组和PDGF-BB组,采用Western blot和免疫荧光染色检测PCK1表达水平的变化.使用小鼠Pck1 siRNA(si Pck1)转染小鼠VSMCs沉默PCK1表达,将VSMCs分为vehicle组、si Pck1+vehicle组、PDGF-BB组和si Pck1+PDGF-BB组,采用免疫荧光染色检测细胞增殖能力,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,透射电镜观察细胞线粒体动力学变化.发动蛋白相关蛋白1(Drp1)基因过表达慢病毒(lenti-Drp1)转染VSMCs使DRP1过表达,将小鼠VSMCs分为PDGF-BB组、si Pck1+PDGF-BB组、lenti-Drp1+PDGF-BB组和lenti-Drp1+si Pck1+PDGF-BB组,再次检测上述指标.结果:PDGF-BB使VSMCs中PCK1和DRP1表达增加,细胞活力升高,Ki-67阳性细胞率增加,划痕愈合率升高,线粒体分裂增加;沉默PCK1表达后以上过程均受到抑制.过表达DRP1后,沉默PCK1表达对VSMCs细胞活力、Ki-67阳性细胞率、划痕愈合率和线粒体分裂的抑制作用明显削弱.结论:PCK1通过调控DRP1表达促进小鼠VSMCs线粒体分裂、细胞增殖和迁移.

目的 采用气-液界面(air-liquid interface,ALI)培养和暴露系统,探索二轮摩托车来源的汽油发动机尾气(gasoline engine exhaust,GEE)对人肺细胞氧化应激相关蛋白表达的影响.方法 实验分为空白对照组、洁净空气组、GEE组.除了空白对照组,其余各组采用气-液界面体外染毒技术,分别在暴露流量为10、15和25 mL/min,37℃水浴条件下,对生长在气-液界面插件多孔膜上的人支气管上皮细胞BEAS-2B和人肺癌A549细胞持续暴露60 min.利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法评价细胞相对存活率.采用2',7'-二氯荧光黄双 乙酸盐(2',7'-dichloro-dihydro-fluoresceindiacetate,DCFH-DA)探针检测 细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂 盒检测GEE对BEAS-2B和A549细胞凋亡及坏死率的影响.蛋白质免疫印迹法检测全细胞裂解物中核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平.结果 在10、15和25 mL/min三种暴露流量下,随着暴露流量增大,GEE暴露组的2种细胞相对存活率逐渐降低、胞内ROS生成量和细胞凋亡率逐渐升高,且与洁净空气组相比,存在统计学上的显著性差异(P＜0.05).BEAS-2B和A549细胞相对存活率、胞内活性氧水平、早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率和总凋亡率在GEE暴露和暴露流量上存在主效应,且GEE暴露与暴露流量存在交互效应(P＜0.01).在GEE暴露组,BEAS-2B细胞Nrf2和HO-1蛋白表达下降,A549细胞Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高.BEAS-2B细胞Nrf2蛋白表达仅在暴露流量主效应上差异有统计学意义(P＜0.01).BEAS-2B细胞HO-1蛋白表达仅在GEE主效应上差异有统计学意义(P＜0.01).A549细胞Nrf2蛋白表达在GEE主效应、暴露流量主效应和交互效应上差异均有统计学意义(P＜0.05).A549细胞HO-1蛋白表达则在GEE主效应、暴露流量主效应和交互效应上差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 GEE对肺细胞具有较强的急性毒性作用;GEE诱导的细胞存活率、胞内活性氧生成和细胞凋亡率的改变受暴露流量的显著影响.暴露流量对GEE诱导的BEAS-2B和A549细胞Nrf2蛋白表达的影响显著,而对HO-1蛋白表达影响不显著.

目的 比较硬膜外程序性间隙脉冲式给药(PIEB)与硬膜外持续输注(CEI)分娩镇痛对产妇及新生儿的影响.方法 选取泰兴市人民医院自2020 年7 月至2022 年7 月收治的拟行阴道分娩的足月初产妇90 例为研究对象.按照随机数字表法将产妇分入PIEB组和CEI组,每组各 45 例.PEIB组采用 0.075%罗哌卡因联合舒芬太尼 0.4 μg/ml PIEB镇痛;CEI组采用相同药物进行CEI镇痛.比较两组产妇的各产程时间点[产程发动后镇痛前(T0)、第一产程结束时(T1)、第二产程结束时(T2)、第三产程结束时(T3)]视觉模拟评分法(VAS)评分、总产程、分娩结束时Bromage评分、镇痛药用量、满意度评分,以及两组新生儿的娩出后5 min时Apgar评分和C-反应蛋白水平.结果 T0 时,两组产妇的VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);T1、T2、T3 时,PIEB组产妇的VAS评分均低于CEI组,差异有统计学意义(P<0.05).两组产妇的总产程、分娩结束时Bromage评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05).两组新生儿的娩出后5 min时Apgar评分、C-反应蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).PIEB 组产妇的罗哌卡因和舒芬太尼用量均少于 CEI 组,满意度评分高于CEI组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 与CEI比较,PIEB在分娩中具有更好的镇痛效果和满意度.

目的 观察电针预处理对脂多糖(LPS)诱导的认知障碍小鼠线粒体动力学的影响.方法 将 45只 10～11周龄SPF级雄性C57BL/6 小鼠(体重 25～27 g)按随机数字表法分为对照组、模型组和电针组,每组 15 只.模型组和电针组侧脑室注射LPS建立神经炎症诱导的认知障碍小鼠模型,对照组注射人工脑脊液.电针组于造模前对小鼠神庭、百会、足三里、内关行电针治疗,30 min/次,5次/周,连续 2周.造模后6h,每组随机选 5只小鼠处死取材,采用酶联免疫吸附试验检测其海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素 1β(IL-1β)水平.造模后24 h,采用旷场实验观察各组剩余小鼠的自发活动和焦虑行为,Morris水迷宫空间探索测试评估认知功能,化学发光法检测各组海马组织腺苷三磷酸(ATP)水平,流式细胞术检测线粒体膜电位(MMP),蛋白质印迹法检测发动蛋白相关蛋白 1(DRP1)和线粒体融合蛋白 2(MFN2)的表达.结果 模型组移动总路程、中央区停留时间和穿越中央区次数与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).电针组移动总路程、中央区停留时间和穿越中央区次数与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).模型组穿越原平台次数和目标象限停留时间百分比及海马组织MMP、ATP、MFN2 水平均低于对照组,海马组织TNF-α、IL-1β、DRP1 水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).电针组穿越原平台次数和目标象限停留时间百分比及海马组织MMP、ATP、MFN2 水平均高于模型组,海马组织TNF-α、IL-1β、DRP1水平低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 电针预处理改善LPS诱导的小鼠认知功能障碍,降低神经炎症,其机制可能与抑制线粒体分裂,促进线粒体融合有关.

目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(DRP1)通过调节线粒体动力学对破骨细胞分化的影响。方法:体外培养稳定生长的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)。将细胞分为正常组、模型组[核因子受体配体激活因子(RANKL)]、实验组[RANKL ＋线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)]。使用细胞毒性实验对不同浓度的DRP1抑制剂(Mdivi-1)作用于RAW264.7细胞的结果进行分析，得出安全有效浓度。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、肌动蛋白环染色和Western Blot实验，观察DRP1对体外破骨细胞分化过程的调控关系。通过透射电镜、流式细胞术和线粒体膜电位荧光探针(JC-1)检测DRP1在破骨细胞分化过程中对线粒体形态、动力学改变的重要作用。TRAP阳性细胞数、肌动蛋白环面积值、JC-1荧光强度及Western Blot结构数据均采用方差分析。结果:细胞计数试剂盒(CCK-8)结果显示10 μmol/L及以下浓度的Mdivi-1对RAW264.7细胞无明显毒性作用(F＝319，P<0.001)，所以选取10 μmol/L浓度的Mdivi-1干预RAW264.7破骨分化进程。在TRAP染色中发现10 μmol/L的Mdivi-1会明显抑制破骨细胞分化，且TRAP阳性细胞数目及破骨细胞的面积明显减少(F＝391.7，P<0.0001)。肌动蛋白环染色结果表明，与模型组比，RANKL＋Mdivi-1组的破骨细胞数量及肌动蛋白环的面积明显变小(F＝321.5、1444，均为P<0.001)。扫描透射电镜观察，与对照相比，RANKL＋ Mdivi-1组线粒体分裂明显减少。通过Western Blot实验，10 μmol/L浓度的Mdivi-1会明显抑制线粒体动力学相关蛋白及破骨细胞分化相关蛋白的表达，包括DRP1、T细胞核因子c1(NFATc1)、组织蛋白酶K(CTSK)(F＝317.8、3510、6404，均为P<0.001)。JC-1荧光实验结果发现，与模型组相比，异常的线粒体膜电位表达有所恢复(F＝2917, P<0.001)。结论:线粒体分裂蛋白DRP1通过影响破骨细胞表面肌动蛋白环的形成参与调节破骨分化；DRP1通过改变线粒体形态和线粒体动力学参与调节破骨分化。

Dynasore is a small molecule that inhibits the GTPase activity of dynamin and mitochondria-related proteins both in vitro and in vivo,consequently preventing bacteria and viruses from entering cells via endocytic processes,impeding infection and spread of the pathogen.Dynasore is able to participate in cell survival,proliferation and apoptosis through a variety of dynamin protein-independent mechanisms such as reducing reactive oxygen species production,inhib-iting ferroptosis,lowering dynamin-related protein 1 activity to reduce mitophagy,and deeply engaging in vascular endo-thelial growth factor pathway.Here based on the molecular mechanisms and signaling pathways of dynasore involving in diseases,this review summarizes the role of dynasore in microbial infections,neurodegenerative diseases,and tumors.

目的 探讨抗纤益心方对扩张型心肌病(DCM)小鼠心肌细胞线粒体动力学及细胞凋亡的影响.方法 40只cTnTR141W转基因DCM小鼠按照随机数字表法分为模型组、抗纤益心方低剂量组(2.7 g/kg)、抗纤益心方高剂量组(5.4 g/kg)、卡托普利组(10.1 mg/kg),每组10只.另设10只C57BL/6J小鼠为正常组,各组小鼠分别灌胃8周.小动物超声仪检测小鼠左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(EF)、缩短率(FS),HE染色观察心肌病理形态,透射电子显微镜观察心肌线粒体超微结构,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,蛋白质印迹法检测心肌线粒体融合蛋白2(MFN2)、视神经萎缩因子1(OPA1)、发动蛋白相关蛋白1(DRP1)、线粒体分裂蛋白1(FIS1),以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组小鼠LVESD和LVEDD升高、FS和EF降低(均P<0.05),心肌损伤明显,线粒体排列紊乱、肿胀伴空泡样变化,细胞凋亡增多,ROS含量增加,线粒体融合蛋白MFN2、OP A1及抗凋亡因子Bcl-2表达降低,线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1及凋亡因子Bax、Caspase-3表达增加(均P<0.05).与模型组比较,抗纤益心方低、高剂量组LVESD和LVEDD降低、FS和EF增加(均P<0.05),心肌损伤减轻,线粒体排列紊乱与肿胀减轻,细胞凋亡减少,ROS含量降低,Bcl-2、MFN2、OPA1蛋白表达增加,Bax、Caspase-3、DRP1、FIS1蛋白表达降低(均P<0.05).结论 抗纤益心方能够抑制DCM小鼠心肌细胞凋亡,改善心脏功能,其作用机制可能与调控线粒体动力学平衡相关.

目的 探讨心力衰竭患者血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、发动蛋白2(DNM2)与心脏储备功能及心肌耗能(MEE)的关系.方法 选取安阳市人民医院2019年4月-2022年1月收治的70例心力衰竭患者作为实验组,并选取同期健康体检者64名作为对照组.对比两组入选者血清NT-proBNP、DNM2、心储备功能[舒张期时限/收缩期时限(D/S)、6 min步行试验(6MWT)]、MEE,并通过Pearson相关性分析NT-proBNP、DNM2与心脏储备功能及MEE的相关性.结果 与对照组入选者相比,实验组患者血清NT-proBNP和MEE显著更高,D/S和6MWT、DNM2水平显著更低(P＜0.05);实验组患者血清NT-proBNP与D/S和6MWT水平呈负相关性,与MEE呈正相关性(P＜0.05);血清DNM2水平与D/S和6MWT水平呈正相关性,与MEE呈负相关性(P＜0.05).结论 心力衰竭患者血清NT-proBNP、DNM2与与心脏储备功能及MEE存在明显的相关性.