目的:探讨新生儿血色病-妊娠同族免疫性肝病（NH-GALD）的临床病理特征。方法:收集广州市妇女儿童医疗中心2018年9月至2021年3月3例NH-GALD的临床资料，尸体解剖检查内脏及脑组织，各脏器常规取材并行HE染色观察各脏器形态学改变，行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况，应用免疫组化染色检测肝脏组织肝细胞膜复合攻击物C5b-9的表达。病例1由于病情危重死亡未做基因检测，病例2及病例3两例均行全外显子高通量测序。同时进行相关文献回顾。结果:3例NH-GALD均为男性，死亡年龄分别为9、58、50 d。病例1及病例2母孕期无异常，均为G1P1，胎龄分别为36 +4 W、33 +6 W。病例1出生时羊水少，出生体质量2300 g。病例2为胎龄双胎之大，出生体质量1450 g。病例3母妊娠期糖尿病，G2P2，胎龄37 +3 W，出生体质量2900 g。3例均无窒息抢救病史。3例临床均表现为急性肝衰竭及多脏器损害，包括凝血功能障碍、黄疸、水肿、新生儿肺炎等。实验室检查3例均提示贫血、血糖降低、严重的凝血障碍、直接及间接胆红素均增高、转氨酶正常或增高后降至正常、铁蛋白增高；2例AFP增高。3例尸体解剖主要病症均为NH-GALD，急性重型肝坏死并肝纤维化（或肝硬化），其他诊断包括肺出血、肺水肿、间质性肺炎、淤血性脾肿大、脑水肿及急性胸腺退化等。尸体解剖时大体观察3例肝脏重41.1~73.1 g（均低于同龄儿平均值），病例1及2肝脏表面细颗粒状，切面灰黄或暗红，病例3表面及切面可见大小不等暗红或墨绿色结节。镜下，3例肝脏均可见肝小叶结构破坏，肝细胞大片坏死，病例1及2见残留肝细胞呈梁索状或假腺样散在分布于疏松纤维间质中，胞质内含色素颗粒，可见少量多核肝巨细胞，微胆栓形成，小胆管相对增生。病例3肝组织见大小不等呈结节状分布的假小叶，结节内肝细胞大片坏死，周边残留多少不等的肝细胞。普鲁士蓝染色3例肝脏、胰腺及甲状腺均可见弥漫铁沉积；其他铁沉积组织包括肾上腺皮质（病例1和2），心肌和颌下腺（病例2和3），口腔黏膜涎腺、喉和支气管黏膜涎腺和小肠黏膜上皮（病例3）。免疫组化染色3例肝细胞膜复合攻击物C5b-9均弥漫阳性。2例全外显子高通量测序，均未检测到与肝脏遗传代谢性及胆汁淤积性疾病相关基因改变。 结论:新生儿急性肝衰竭时需要考虑到罕见的NH-GALD的可能，肝外器官铁沉积是其特征性改变，明确病理诊断对于患儿治疗及孕母再次妊娠预防性干预的意义重大。

目的 基于网络毒理学方法和体内实验验证探讨槟榔对口腔黏膜下纤维化的影响及作用机制.方法 通过TCSMP和Swiss数据库筛选槟榔潜在活性成分对应靶点,利用GeneCards、Disgenet数据库得到口腔黏膜下纤维化(oral submucosal fibrosis,OSF)疾病相关靶点.将交集靶点上传至STRING数据平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,再采用Metascape数据平台进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析.采用槟榔水提取液低、中、高浓度干预大鼠口腔黏膜,大鼠开口度、病理形态学、免疫组织化学等检测对网络毒理学结果进行验证.结果 网络毒理学结果表明槟榔 52个成分中含有 587个相关靶点,OSF相关靶点 761个,二者交集靶点 72个.PPI网络分析结果显示,白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、细胞凋亡调节因子Bcl-2(apoptosis regulator Bcl-2,BCL2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)可能是槟榔影响OSF的关键靶点.KEGG通路富集分析获得PI3K-Akt信号通路、AGE-RAGE信号通路、松弛素信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路.动物实验结果显示,中、高剂量组开口度值较对照组、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05),HE染色、Masson染色表明中、高剂量组出现不同程度的纤维化病变,免疫组织化学结果提示槟榔水提取液上调IL-6、TNF-α等炎性因子,且呈一定的剂量相关性.结论 槟榔可能通过上调IL-6、TNF-α等关键炎性因子以介导炎症反应诱导口腔黏膜下纤维化的发生.

目的:利用网络药理学和实验验证探究三七总皂苷活性成分调控铁死亡干预口腔黏膜下纤维化的药效物质基础、潜在靶标及作用机制.方法:结合前期研究,通过文献检索确定网络药理学分析的三七总皂苷中的候选有效成分,并通过PubChem(有机小分子生物活性数据库,http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)检索有效成分,使用GeneCards数据库获得三七总皂苷活性成分的对应靶基因.在GeneCards、OMIM数据库中搜集口腔黏膜下纤维化的相关靶点.将三七总皂苷活性成分与口腔黏膜下纤维化的交集靶点通过Cytoscape 3.7.0软件绘制相应"活性成分-作用靶点"网络,并借助CytoHubba插件获得三七总皂苷活性成分的度值(Degree)排名,并对关键核心靶点进行分析.基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析通过DA-VID数据库进行.将三七总皂苷活性成分干预口腔黏膜下纤维化的靶基因与通过FerrDb数据库获取得到的铁死亡过程中的标记基因及调控因子取交集,获得通过调控铁死亡过程干预口腔黏膜下纤维化的三七总皂苷靶基因.利用AutoDockTool1.5.7软件进行化合物和核心靶点的分子对接.人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞系)体外培养后分为空白对照组、模型对照组、三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组;各组在相应不含药或含药的完全培养液中培养24 h后收集细胞;采用Western blot法检测各组细胞I型胶原(COL-Ⅰ)、低氧诱导因子-1(HIF-1α)、轻链溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达;透射电镜观察细胞线粒体形态学变化.结果:共筛选出三七总皂苷中5个活性成分,包括人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、三七皂苷R1和人参皂苷Re,以及前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、一氧化氮合酶2(NOS2)等20个作用靶标.三七总皂苷中的5个活性成分与RNA聚合酶Ⅱ启动子对pri-miRNA转录的正向调控、细胞对缺氧的反应及转化生长因子受体信号通路等生物过程,核浆、胞质和胞核等细胞组成,酶结合、相同的蛋白质结合和RNA聚合酶ii序列特异性DNA结合转录因子结合等分子功能密切相关;KEGG发现其可通过介导PI3K-AKT信号通路、癌症途径、脂肪细胞因子信号通路、肿瘤中PD-L1表达和PD-1检查点等信号通路调控铁死亡,从而发挥干预口腔黏膜下纤维化的作用.细胞实验结果表明,模型对照组较空白对照组COL-Ⅰ、HIF-1α蛋白表达显著上调,SLC7A11、GPX4蛋白表达显著下调(P＜0.01);与模型对照组比较,三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组COL-Ⅰ、HIF-1α蛋白表达明显下调(P＜0.05),SLC7A11、GPX4蛋白表达明显上调(P＜0.05).空白对照组细胞线粒体形态结构正常;模型对照组细胞线粒体形态结构萎缩,线粒体变小,嵴明显减少,呈典型的铁死亡表现;三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组细胞线粒体形态结构逐渐恢复正常.结论:三七总皂苷具有多成分、多靶点、多通路干预口腔黏膜下纤维化的作用特点,下调HIF-1α信号通路抑制铁死亡可能是其抗纤维化重要机制之一.

目的 探究槟榔的成分及其促进口腔黏膜下纤维化的机制.方法 采用Thermo QE plus液相色谱串联高分辨质谱仪和Compound discover 3.2数据处理软件进行槟榔中药化学成分分析,将检测到的化合物以质谱响应值排序,分析排名前20化合物的活性.化合物活性来源根据《中国药典(2015版)》汇总,数据查询基于PubChem、Chemical book以及Scifinder数据库.借助网络药理学方法分析槟榔影响口腔黏膜下纤维化(OSF)的潜在活性成分、核心靶点及主要影响的生物功能、信号通路.通过整合人类基因数据库(Genecards)、基因组百科全书数据库(KEGG)等数据库获取OSF的作用靶点.以OB≥30%为条件,在中药系统药理学技术平台(TCMSP)中筛选出槟榔可作用于靶点的化合物,并构建靶点-化合物、化合物-中药、靶点-化合物-中药网络.运用MOE软件的分子对接技术,分析成分-靶点结合的可能性,再利用Pymol软件进行分子对接可视化.最后通过免疫组化在临床样本中验证槟榔是否影响PI3K-Akt、MAPK两条通路涉及的主要蛋白,初步验证槟榔诱导OSF的潜在作用机制.结果 基于网络药理学和槟榔粗提物中筛选出前10的化合物与OSF核心靶点中核心交集基因,确定了槟榔可能通过调控PI3K-Akt与MAPK通路.通过免疫组化在临床样本中验证,细胞膜上的PI3K蛋白表达量在OSF患者组中表达下降(P=0.0002),p-PI3K(P=0.0002)表达量上升,进一步激活下游的AKT1蛋白表达增加(P=0.0006),加剧磷酸化蛋白p-AKT蛋白的表达及堆积(P=0.0013);而在MAPK通路中,OSF患者组对比正常组,通过上调JNK蛋白(P=0.0130),诱导下游AP-1复合蛋白c-jun及c-fos转录因子的活性增加,促使其向细胞核聚集;且OSF患者组较正常组血浆的IL-6(P<0.0001)与IL-8(P=0.0095)含量均上升.结论 槟榔碱、槟榔次碱、异去甲槟榔碱等槟榔中的主要活性成分可能通过刺激PI3K-Akt与MAPK信号通路,促进炎症介质IL-6及IL-8的表达,诱导胶原增生,导致口腔黏膜下纤维化病变.

口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)是口腔黏膜最常见的癌前病变之一,其发病机制至今尚未完全阐明.非编码小RNA(small non-coding RNAs,SncRNAs)是一类不编码蛋白质的RNA分子,已被广泛报道参与多种人类疾病的调控.越来越多的研究表明多种SncRNAs在OSF发病过程中发挥重要作用.现有研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)通过调控相关转录因子和基因表达或上皮间充质转化来调控成纤维细胞(fbroblasts,FB)活化而参与OSF疾病进展;长非编码RNA(long noncoding RNAs,lncRNAs)通过调控转化生长因子-β/母体抗瘫抑制因子(transforming growth factor-β/suppressor of mothers against decapentaplegic,TGF-β/Smad)信号通路或与miRNA相互作用参与OSF的发生发展;环状RNA(circular RNAs,circRNAs)通过与miRNA相互作用在OSF中发挥作用;tRNA衍生的小RNA(tRNA-derived small RNAs,tsRNAs)参与多种纤维化疾病的进展,但其在OSF中的具体作用机制仍需进一步探索.未来仍需重点关注SncRNAs介导OSF进展的作用靶点,探究其对OSF的作用功能及分子机制,以期为诊断和治疗OSF提供新思路.

目的:探究姜黄素通过调控缺氧诱导因子-1α/微小RNA-760/潜在转化生长因子结合蛋白2(HIF-1α/miR-760/LTBP2)机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果.方法:40只SD大鼠中随机取10只作为正常组,正常饲养不作处理;另30只大鼠采用槟榔碱诱导建立口腔黏膜下纤维化模型.将30只模型大鼠随机分为模型组、姜黄素组和阳性对照组,每组10只.姜黄素组和阳性对照组大鼠分别予以相应药物,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续给药8周.比较各组大鼠张口度、颊黏膜组织变化、纤维化标志物及HIF-1α/miR-760/LTBP2信号轴表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠张口度明显减小(P＜0.05),颊黏膜评分、颊黏膜组织TGF-β1、Col Ⅲ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1α mRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均明显升高(P＜0.05);与模型组比较,姜黄素组和阳性对照组张口度均明显增大(P＜0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、Col Ⅲ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1α mRNA、LTBP2 mRNA及蛋白表达均明显降低(P＜0.05),且姜黄素组张口度大于阳性对照组(P＜0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、Col Ⅲ、IFN-γ、miR-760 mRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均低于阳性对照组(P＜0.05).结论:姜黄素可能降低HIF-1α、miR-760、LTBP2表达,抑制口腔黏膜下纤维化.

口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)表现为慢性损伤过程中胶原蛋白异常聚集、血管闭塞的炎症性纤维化过程.OSF使患者张口受限、吞咽困难,且具有一定的癌变风险.血管生成不仅是逆转纤维化与组织修复的关键机制,而且被认为在各种病理状况中发挥重要作用.促血管生成对于改善OSF组织纤维化具有一定的疗效,其有利于OSF中胶原蛋白的代谢以及改善组织缺氧状态,从而逆转组织纤维化.但最近研究表明促纤维化组织血管生成可能增加潜在的癌变风险.目前在血管生成与OSF纤维化间相关性研究甚少,本文就OSF中血管变化、OSF中血管生成机制以及血管生成与OSF纤维化间的可能作用及其潜在的风险进行综述.

目的:探讨三七总皂苷(PNS)是否通过调控铁死亡减轻槟榔碱(ANE)诱导的口腔黏膜下纤维化(OSF),并初步研究其机制.方法:采用ANE作用于人永生化角质形成细胞系HaCaT构建OSF模型,设置空白组,模型组(50 mg/L ANE),低、中、高剂量(12.5、25和50 mg/L)PNS组,以及liproxstatin-1(铁死亡抑制剂)组,共计6组.光镜观察HaCaT细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞活力;Western blot检测细胞中I型胶原(Col-Ⅰ)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平;透射电镜观察细胞线粒体形态学变化;Ferro-Orange荧光探针检测细胞Fe2+水平;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;比色法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与空白组比较,模型组HaCaT细胞多数呈长梭形,纤维化样外观,贴壁不牢靠,形态学改变显著,电镜下线粒体双层膜密度增加,嵴显著减少,呈典型的铁死亡表现,Col-Ⅰ蛋白表达增加,GPX4和SLC7A11蛋白表达降低,Fe2+和ROS水平升高,GSH含量降低(均P<0.05);与模型组相比,低、中、高剂量PNS组细胞多数恢复圆润,呈上皮细胞样,线粒体膜密度减小,嵴数目增加,形态趋于正常,Col-Ⅰ蛋白表达减少,ROS水平下降,GSH含量升高(均P<0.05);与模型组相比,中、高剂量PNS组GPX4和SLC7A11蛋白表达显著上升,Fe2+含量显著降低(均P<0.05);liproxstatin-1组细胞和线粒体形态及各指标水平与高剂量PNS组相比无显著差异(均P>0.05).结论:PNS可通过抑制ANE诱导的HaCaT细胞铁死亡减轻OSF.

目的 探讨丹参治疗大鼠口腔黏膜下纤维化的效果.方法 选取 8 周龄SPF级雄性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠 70 只,采取槟榔碱涂擦法建立SD大鼠口腔黏膜下纤维化模型后,将大鼠分为 6 个实验组和对照组,每组 10 只.实验组分别局部注射 5 mg/ml丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、异隐丹参酮、丹酚酸A、丹酚酸B,对照组局部注射生理盐水,处理8 周后测量局部黏膜病变面积后取局部颊黏膜行HE染色观察病理变化;并检测组织内Ⅲ型胶原、TGF-β1 和IFN-γ的表达情况.结果 丹参酮ⅡA、隐丹参酮和异隐丹参酮组的口腔黏膜下纤维化面积减小分别达到2.72、1.95、1.58 cm2,治愈率60%～80%,明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).丹参酮ⅡA、隐丹参酮和异隐丹参酮组的Ⅲ型胶原蛋白灰度比值、TGF-β1 蛋白降低明显,IFN-γ蛋白明显增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);而丹参酮ⅡB、丹酚酸A和丹酚酸B组的黏膜病变减少量、治愈率及Ⅲ型胶原、TGF-β1 和IFN-γ蛋白的表达与对照组比较,差异均无统计学意义.结论 丹参酮ⅡA、隐丹参酮和异隐丹参酮具有治疗口腔黏膜下纤维化的效果.

目的 通过检测口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis, OSF)患者血液流变学,分析吸烟和血脂等潜在因素与血液流变学的关系,以探讨血液流变学在OSF发病中的作用.方法 选取57例临床及病理诊断为OSF中期的门诊患者为观察组,均无吸烟习惯的20例健康体检者为对照组,分别检测不同切变下的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、红细胞聚集指数和刚性指数,检测血浆中甘油三酯及胆固醇含量,并按照患者吸烟情况以及甘油三酯、胆固醇值进行亚组分析.结果 57例OSF患者全血低、中、高切粘度及红细胞压积增高者分别有38例(66.7%)、33例(57.9%)、22例(38.6%)和38例(66.7%),显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);血浆粘度、红细胞聚集指数和刚性指数虽无异常者,但相较于对照组差异显著(P<0.05);OSF各亚组分析中,吸烟组全血低切粘度、血浆黏度及红细胞压积高于不抽烟组,胆固醇增高组全血中、高切粘度及红细胞压积高于胆固醇正常组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 OSF患者血液粘滞度偏高,抽烟和胆固醇含量可加剧患者血液高粘滞状态,提示戒烟和低脂饮食,并结合活血化瘀药物,对缓解OSF患者局部微循环障碍可能具有一定作用,有待进一步研究揭示.