目的:评价三七总皂苷(PNS)不同口服制剂对急性血瘀模型大鼠的药效差异,并与市售血栓通胶囊(XST)、三七通舒胶囊(SQTS)进行对比.方法:在前期研究基础上,分别制备PNS磷脂复合物肠溶胶囊(PNS-PC)、PNS pH依赖型固体分散体(PNS-SD)、PNS自乳化肠溶胶囊(PNS-SDEDDS)、PNS生物黏附微球肠溶胶囊(PNS-BMS)、N-乙酰-L半胱氨酸修饰的PNS生物黏附微球肠溶胶囊(PNS-NAC-BMS)5种不同PNS 口服制剂.将80只 SD 大鼠随机分为对照(Control)组、模型(AD)组、XST+AD 组、SQTS+AD 组、PNS+AD 组、PNS-PC+AD 组、PNS-SD+AD组、PNS-SDEDDS+AD组、PNS-BMS+AD组、PNS-NAC-BMS+AD组,每组8只.给药组大鼠按照体质量及载药量给予相应剂量的药物灌胃,Control组、AD组大鼠给予空白胶囊灌胃.给药7 d后,采用注射盐酸肾上腺素加冰浴建立大鼠急性血瘀模型.次日,拍摄大鼠舌质及舌下脉络,评价舌象评分;尾静脉采血,记录尾静脉凝血时间;腹主动脉采血,检测血液流变学指标(包括不同切变率下的全血黏度、卡森黏度、血浆黏度)、凝血四项指标[包括活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)]及血浆内皮素(ET)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量.结果:①与Control组相比,AD组大鼠舌质发白、舌下血管紫黑,舌象评分显著升高(P＜0.001),尾静脉凝血时间缩短(P＜0.001),不同切变率下全血黏度、卡森黏度、血浆黏度均升高(P＜0.001),APTT、PT、TT 均缩短(P＜0.001),FIB、ET 水平升高(P＜0.001),eNOS、6-keto-PGF1α 水平均降低(P＜0.001).②与AD组相比,各给药组舌象评分均显著降低(P＜0.001,P＜0.01);与XST+AD组、SQTS+AD组相比,PNS-PC+AD 组、PNS-SDEDDS+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组舌象评分亦显著降低(P＜0.05).③与 AD组相比,PNS-PC+AD 组、PNS-SDEDDS+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组、PNS+AD 组、XST+AD 组、SQTS+AD组的尾静脉凝血时间均明显延长(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.05);与XST+AD组、SQTS+AD组相比,PNS-PC+AD组、PNS-SDEDDS+AD组、PNS-BMS+AD组、PNS-NAC-BMS+AD组大鼠尾静脉凝血时间亦明显延长(P＜0.05).④与AD组相比,5种PNS自制口服制剂组大鼠的全血黏度、卡森黏度、血浆黏度水平均显著降低(P＜0.001,P＜0.01),XST+AD组、SQTS+AD组、PNS+AD组大鼠的全血黏度,XST+AD组的卡森黏度及PNS+AD组的血浆黏度水平亦降低(P＜0.01,P＜0.05);与XST+AD组、SQTS+AD组相比,PNS-PC+AD组大鼠的全血黏度水平亦降低(P＜0.05);与SQTS+AD 组相比,PNS-PC+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组的卡森黏度水平降低(P＜0.05).⑤与 AD组相比,各给药组大鼠的APTT、TT均明显延长(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.05),FIB水平均显著降低(P＜0.01),PNS-PC+AD 组、PNS-SDEDDS+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组的 PT 亦显著延长(P＜0.001,P＜0.01);与 XST+AD 组、SQTS+AD 组相比,PNS-PC+AD 组、PNS-SDEDDS+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组 PT、TT 明显延长(P＜0.05),FIB水平显著降低(P＜0.01).⑥与AD组相比,各给药组大鼠的ET水平显著降低(P＜0.001,P＜0.05),eNOS、6-keto-PGF1α 水平显著升高(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.05);与 XST+AD 组、SQTS+AD 组相比,PNS-PC+AD组、PNS-SDEDDS+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组的 ET 水平显著降低(P＜0.01),eNOS 水平显著升高(P＜0.05),PNS-PC+AD 组、PNS-SD+AD 组、PNS-SDEDDS+AD 组、PNS-BMS+AD 组、PNS-NAC-BMS+AD 组的6-keto-PGF1α水平显著升高(P＜0.01).结论:5种不同的PNS 口服制剂与原料药及市售XST、SQTS均能有效改善急性血瘀模型大鼠的瘀血状态,但PNS-PC、PNS-SDEDDS、PNS-BMS、PNS-NAC-BMS对血瘀大鼠各项血瘀相关指标的改善优于2种市售阳性药和原料药,具有较好的应用前景.

目的:评价腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-沉默信息调节因子1(SIRT1)-核因子-κB(NF-κB)信号通路在三七总皂苷(PNS)减轻机械通气大鼠脑损伤中的作用。方法:SPF级雄性SD大鼠72只，10周龄，体质量357～377 g，采用随机数字表法将大鼠分为6组( n＝12)：假手术组、模型组、PNS低剂量组、PNS中剂量组、PNS高剂量组和PNS高剂量＋compound C组。PNS低剂量组、PNS中剂量组和PNS高剂量组分别腹腔注射PNS 12.5、25.0和50.0 mg/kg；PNS高剂量＋compound C组在腹腔注射PNS 50 mg/kg后10 min时，尾静脉注射compound C 0.2 mg/kg；假手术组和模型组腹腔注射10 ml/kg生理盐水。各组于机械通气前30 min注射药物或生理盐水。机械通气模型：模型组通气频率40次/min，潮气量40 ml/kg，机械通气6 h；假手术组机械通气6 h，潮气量10 ml/kg。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能，采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α及多巴胺(DA)浓度，尼氏染色进行海马CA1区神经元计数，采用Western blot法检测海马CA1区P2Y1嘌呤受体(P2Y1R)、(肌)营养不良短小蛋白结合蛋白1(dysbindin-1)、AMPK的表达、磷酸化SIRT1(p-SIRT1)/SIRT1比值和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB比值。 结果:与假手术组比较，模型组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高，血清DA浓度降低，海马CA1区神经元计数降低，P2Y1R、dysbindin-1表达上调，AMPK表达下调，p-SIRT1/SIRT1比值降低，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高( P<0.05)；与模型组比较，PNS低剂量组、PNS中剂量组和PNS高剂量组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增多，目标象限停留时间延长，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度降低，血清DA浓度升高，海马CA1区神经元计数升高，P2Y1R、dysbindin-1表达下调，AMPK表达上调，p-SIRT1/SIRT1比值升高，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低( P<0.05)；与PNS高剂量组比较，PNS高剂量＋compound C组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高，血清DA浓度降低，海马CA1区神经元计数降低，P2Y1R、dysbindin-1表达上调，AMPK表达下调，p-SIRT1/SIRT1比值降低，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高( P<0.05)。 结论:PNS减轻机械通气大鼠脑损伤的机制可能与激活AMPK-SIRT1-NF-κB信号通路有关。

目的:探讨三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng，TSPN)对卒中后抑郁(post stroke depression，PSD)模型大鼠学习记忆的影响及其作用机制。方法:采用四血管阻断法制作大鼠卒中模型，7 d后采用社会隔离＋慢性不可预见性温和应激(CUMS)方法制备PSD模型。大鼠被随机分成假手术组(Sham组， n＝10)、卒中组(Model组， n＝10)、卒中后抑郁组(PSD组， n＝10)和PSD＋三七总皂苷组(TSPN组， n＝10)。Model组和PSD组在脑缺血后30 min腹腔注射等体积生理盐水，1次/d；TSPN组给予PSD大鼠腹腔注射剂量为75 mg/kg的TSPN，1次/d，连续30 d。30 d后采用水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆，免疫印迹技术检测海马微管相关蛋白(DCX)和巢蛋白(Nestin)的表达，免疫荧光观察海马齿状回的颗粒下层(SGZ)区DCX与内源性细胞增殖标记物(Ki67)的共表达。 结果:与Sham组、Model组相比[(10.4±3.2) s、(19.8±3.7) s]，PSD组在第5天的逃避潜伏期[(31.8±3.8) s]显著延长( t＝9.23，5.15；均 P<0.05)；给予TSPN干预后，大鼠的逃避潜伏期[(14.2±2.8)s]较PSD组明显缩短( t＝8.56， P<0.05)。与Sham组相比[(10.3±1.7)次]，PSD组跨越平台次数[(4.1±1.1)次]显著减少( t＝11.24， P<0.05)，给予TSPN干预后PSD大鼠跨越平台次数[(8.4±1.6)次]显著增加( t＝5.77， P<0.01)。PSD组海马DCX、Nestin的蛋白水平分别为(0.60±0.02)、(0.58±0.03)，给予TSPN干预之后，PSD大鼠海马DCX、Nestin的蛋白水平显著升高(1.07±0.07)、(0.95±0.11)，两组DCX、Nestin的蛋白水平的差异有统计学意义( t＝20.22，7.68；均 P<0.01)。PSD组大鼠海马SGZ区DCX/Ki67细胞为(16.2±2.8)个/mm 2，TSPN组为(21.2±3.1)个/mm 2，差异有统计学意义( t＝2.42， P<0.05)。 结论:三七总皂苷可通过促进海马神经再生改善卒中后抑郁大鼠的学习记忆。

目的:观察三七总皂苷对肝癌细胞HepG2的钙离子平衡和生长的影响。方法:用50、100、200、400、800 mg/L的三七总皂苷药物溶液处理肝癌细胞HepG2(北纳生物公司)，加上正常对照组，共6个分组。培养各组细胞，设置24、48、72 h 3个时间点，噻唑蓝(MTT)检测肝癌细胞抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡，用Fura-2 AM钙离子荧光探针染色后激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子浓度。采用One-way ANOVA检验。结果:随着药物浓度升高和药物作用时间延长，HepG2细胞相对生长抑制率[50 mg/L组：(11.01±2.54)%、(14.46±2.61)%、(19.03±4.20)%；100 mg/L组：(16.97±4.75)%、(21.61±2.85)%、(27.71±4.54)%；200 mg/L组：(22.96±4.08)%、(28.31±2.36)%、(35.61±5.04)%；400 mg/L组：(30.89±4.01)%、(41.61±6.18)%、(51.77±8.32)%；800 mg/L组：(37.96±3.90)%、(49.82.46±5.81)%、(62.23±5.70)%]( F＝44.986、67.821、56.230， P<0.05)，差异有统计学意义；在24、48 h处理组中，随着药物浓度升高，细胞凋亡率也随之升高，与对照组比较差异有统计学意义( F＝79.784、77.350， P<0.05)，并以三七总皂苷浓度在200 mg/L及以上时凋亡率更为明显；在24、48、72 h处理组中可见，随着药物浓度增加，荧光强度升高逐渐明显，即细胞内Ca 2＋浓度逐渐增加，各组间对比差异有统计学意义( F＝26.087、75.007、199.334， P<0.05)。 结论:三七总皂苷能够抑制人肝癌细胞HepG2的生长，诱导其凋亡，并且具有浓度和时间依赖，其机制可能是通过影响HepG2细胞内钙离子浓度来起到肿瘤抑制作用。

目的:观察三七总皂苷(PNS)对过氧化氢(H 2O 2)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的氧化应激损害的保护作用及其机制。 方法:培养HK-2并分组：正常组(不加任何干预因素)，H 2O 2组(在细胞培养体系中加入终浓度为400 μmol/L的H 2O 2，培养6 h)和PNS组(分为3组：先在细胞培养体系中分别加入PNS 25 μg/ml、50 μg/ml和100 μg/ml，培养4 h，再加入终浓度为400 μmol/L的H 2O 2，继续培养6 h)，观察H 2O 2刺激HK-2发生凋亡情况。 结果:与正常组相比，H 2O 2组细胞存活率降低为(45.67±2.52)%、细胞凋亡率升高至(19.23±1.63)%(均 P<0.01)，而PNS组各组的细胞存活率分别为(55.12±2.33)%、(65.37±4.72)%和(83.46±1.52)%，细胞凋亡率分别降低至(15.53±0.70)%、(12.53±1.30)%和(7.17±0.35)%，50 μg/ml和100 μg/ml PNS组的HK-2细胞内活性氧(ROS)水平分别为(845.7±17.79)和(353.3±26.1)；3个PNS组中，随着PNS剂量增加，超氧化物歧化物(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性增加，丙二醛(MDA)的生成减少，与H 2O 2组相比，差异均存在显著统计学意义(均 P<0.01)。 结论:PNS能通过增强细胞内抗氧化酶活力，保护HK-2细胞对抗氧化损伤，随着剂量增加，作用效果增强。

目的:观察三七总皂苷(PNS)对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响，并探讨其诱导凋亡的机制。方法:2019年9月至2020年7月，选取人膀胱癌T24细胞株(购自中国科学院上海生命科学研究院)作为研究对象。将T24细胞分为对照组(加PBS)、实验组(低浓度组100 mg/L、高浓度组200 mg/L)，检测其被不同浓度的PNS处理12、24、48 h后的细胞活力；在经过PNS(100、200 mg/L)处理48 h后，使用细胞划痕实验、Transwell评估处理后T24细胞迁移、侵袭能力的变化，通过流式细胞仪检测干预后T24细胞凋亡状况，利用蛋白质印迹法(Western blot)法检测T24细胞在处理后活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和Hippo信号通路关键蛋白TEA结构域转录子1(TEAD1)、Yes协同蛋白1(YAP1)和大肿瘤抑制基因1(LATS1)的表达水平。组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:PNS处理48 h后，实验组细胞增殖活力显著低于对照组[(63.28±5.81)%、(39.38±3.34)%比(103.00±3.30)%， F＝126.045， P<0.05]；细胞划痕实验提示PNS处理后，实验组膀胱癌T24细胞系的迁移率显著降低[(25.99±2.25)%、(9.79±0.44)%比(52.50±2.29)%， F＝398.345， P<0.05]；Transwell结果说明PNS(100、200 mg/L)能够显著减弱T24细胞株的侵袭性[(249.67±28.01)、(152.67±7.64)个比(397±30.12)个， F＝77.856， P<0.05]；流式细胞仪结果显示，PNS(100、200 mg/L)处理48 h后，实验组细胞凋亡率[(9.55±0.39)%、(15.08±0.94)%]相对于对照组[(6.86±0.68)%]明显升高( F＝105.821， P<0.05)；Western blot结果表明，实验组中抗凋亡蛋白bcl-2(0.43±0.06、0.17±0.04比0.80±0.08)和Hippo信号通路中TEAD1(0.38±0.05、0.17±0.04比0.62±0.06)和YAP1(0.40±0.04、0.23±0.06比0.53±0.02)等蛋白的表达量显著降低，而cleaved Caspase-3(0.39±0.04、0.50±0.03比0.24±0.02)、LATS1(0.51±0.07、0.73±0.04比0.28±0.05)的表达明显上调( F＝87.713、55.109、38.325、53.658、47.578， P<0.05)。 结论:三七总皂苷能够抑制人膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭等能力，并能诱导T24细胞发生凋亡，其中的机制可能与激活Hippo-YAP信号通路相关。

1例71岁男性患者因高血压病、冠状动脉粥样硬化性心脏病给予注射用血塞通800 mg加入0.9%氯化钠注射液250 ml静脉滴注、1次/d。用药前肝功能正常。用药第3天，患者出现食欲不振、上腹部不适和皮疹，实验室检查示血清丙氨酸转氨酶（ALT）490 U/L，天冬氨酸转氨酶（AST）657 U/L，总胆红素（TBil）33.4 μmol/L，直接胆红素（DBil）10.3 μmol/L，碱性磷酸酶（ALP）51 U/L。次日出现黄疸，ALT 2 597 U/L，AST 2 647 U/L，TBil 74.6 μmol/L，DBil 24.3 μmol/L，ALP 58 U/L，凝血酶原活动度（PTA）20%，国际标准化比值2.4。诊断为严重肝损伤，考虑可能与注射用血塞通相关。停用该药，给予多烯磷脂酰胆碱注射液和异甘草酸镁注射液保肝治疗。1周后患者ALT 785 U/L，AST 653 U/L，TBil 46.0 μmol/L，ALP 44 U/L，PTA 42%。7 d后随访，患者皮疹消退，ALT 433 U/L，AST 372 U/L，TBil 35.2 μmol/L，DBil 10.1 μmol/L，ALP 48 U/L。

目的:观察风药（葛根、石菖蒲）与三七总皂苷配伍后对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用，阐明“风药增效”的作用机制。方法:将140只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、三七总皂苷组、葛根组、石菖蒲组、葛根+三七总皂苷组、石菖蒲+三七总皂苷组，每组20只。除假手术组外，其余各组采用改良Longa线栓法建立脑缺血再灌注模型。各组给予相应药物干预7 d后，采用Zea-longa评分法进行神经功能评分，TTC染色法测定脑梗死体积，伊文思蓝（EB）染色检测缺血侧脑组织血脑屏障（BBB）通透性，透射电子显微镜观察BBB超微结构，免疫组化染色检测脑组织密封蛋白（Claudin 5）表达，Western blot检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）、主要促进因子超家族成员2a（Mfsd2a）、闭合蛋白（Occludin）和P糖蛋白（P-gp）、单羧酸转运蛋白1（MCT1）、乳腺癌抗性蛋白（BCRP）表达。结果:与模型组比较，各给药组大鼠神经功能评分降低（ P<0.05），脑梗死率降低（ P<0.05），脑组织EB含量下降（ P<0.05），脑组织Claudin 5、ZO-1、Mfsd2a、Occludin蛋白表达升高（ P<0.05），P-gp、BCRP、MCT1蛋白表达降低（ P<0.05），且葛根+三七总皂苷组、石菖蒲+三七总皂苷组Claudin 5、ZO-1、Mfsd2a、Occludin蛋白表达高于各单独用药组（ P<0.05），MCT1蛋白表达低于各单独给药组（ P<0.05）；葛根+三七总皂苷组ZO-1蛋白表达水平高于单独给药组（ P<0.05）；石菖蒲+三七总皂苷组P-gp蛋白表达低于三七总皂苷组、石菖蒲组及葛根+三七总皂苷组（ P<0.05）。 结论:风药（葛根、石菖蒲）可增强三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用，其机制可能与保护BBB结构完整性、维持中枢屏障特性，同时调节物质转运蛋白、提高药物脑内含量有关。

背景:激素性股骨头坏死多是由于长期大量使用激素所致,但具体的发病机制尚未明确,有待于进一步研究.目的:筛选出三七总皂苷干预破骨细胞来源外泌体中的差异miRNA,在此基础上构建成骨相关铁死亡调控网络,以探索激素性股骨头坏死发生的潜在机制及研究方向.方法:MTT实验检测不同浓度地塞米松和不同质量浓度三七总皂苷对Raw264.7细胞系的毒性作用;抗酒石酸酸性磷酸酶染色和TUNEL染色检测三七总皂苷对破骨细胞抑制和凋亡的影响;从三七总皂苷干预的破骨细胞中提取外泌体,对外泌体进行测序找出差异表达miRNA,通过CytoScape 3.9.1构建并可视化差异表达的miRNA与mRNA间的调控网络;通过GO分析和KEGG分析筛选候选mRNA;最后筛选出铁死亡相关的差异基因,构建铁死亡相关基因的调控网络.结果与结论:①通过MTT实验确定了适合干预Raw264.7细胞的地塞米松浓度(0.1 μmol/L)和三七总皂苷质量浓度(1 736.85 μg/mL);②三七总皂苷对破骨细胞有抑制作用并能促进其凋亡;③从破骨细胞来源外泌体样本中鉴定出20个差异miRNA,通过靶标mRNA预测出11种成骨相关的差异miRNA,并构建了4个上调的差异表达miRNA对应于155个下调的候选mRNA以及7个下调的差异表达miRNA对应于238个上调的候选mRNA的调控网络;④在差异基因中筛选出与铁死亡相关的基因24个,最终构建了12个网络(miR-98-5p/PTGS2,miR-23b-3p/PTGS2,miR-425-5p/TFRC,miR-133a-3p/TFRC,miR-185-5p/TFRC,miR-23b-3p/NFE2L2,miR-23b-3p/LAMP2,miR-98-5p/LAMP2,miR-182-5p/LAMP2,miR-182-5p/TLR4,miR-23b-3p/ZFP36,miR-182-5p/ZFP36).这些结果表明三七总皂苷可能通过调控破骨细胞外泌体来源miRNA的表达来调节成骨细胞铁死亡,为激素性股骨头坏死的机制研究提供新的思路.

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对巨噬细胞分拣蛋白(sortilin)、腺苷三磷酸结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响和抑制泡沫细胞形成的作用及机制.方法 将巨噬细胞分为A组(常规培养)、B组(转染空载慢病毒)、C组(转染过表达sortilin慢病毒)、D组(转染过表达sortilin慢病毒+60 μg.mL-1 PNS)和E组(转染过表达 sortilin 慢病毒+10 μmol·L-1 PD98059+60 μg.mL-1 PNS).用蛋白质印迹法检测各组巨噬细胞中sortilin、ABCA1、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白的表达水平;用50 μg·mL-1氧化低密度脂蛋白刺激巨噬细胞形成泡沫细胞,用油红O染色评估各组巨噬细胞的脂质含量.结果 A、B、C、D、E组的sortilin蛋白相对表达水平分别为1.00±0.08、0.91±0.15、2.28±0.13、1.62±0.09 和 2.01±0.08,ABCA1 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.01、0.92±0.07、0.29±0.04、0.66±0.09 和 0.44±0.07,p-ERK/ERK 比值分别为 1.00±0.09、0.92±0.05、1.03±0.12、2.00±0.12 和1.64±0.14,脂质含量分别为(4.82±2.19)％、(6.70±0.88)％、(44.56±4.15)％、(27.66±3.25)％和(41.67±5.45)％.除 p-ERK/ERK 外,C组的其他指标与A组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.01);D组的上述指标与C组、E组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 PNS通过抑制sortilin表达和上调ABCA1表达,从而减少泡沫细胞的形成;ERK是参与PNS调节sortilin和ABCA1表达的主要信号通路之一.