卵巢上皮性癌（卵巢癌）起病隐匿且进展迅速，是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，认识卵巢癌发生、发展过程中的关键事件并从中寻找潜在的诊疗靶标，是改善患者预后的有效策略。蛋白质糖基化是在分泌蛋白和膜结合蛋白上普遍存在的翻译后修饰过程，恶性肿瘤常呈现蛋白质的异常糖基化。卵巢癌可表现为O-糖基化、N-糖基化、唾液酸化、岩藻糖基化等异常改变。这些异常糖基化不仅参与肿瘤的恶性转化以及进展过程，而且可作为诊断标志物和治疗靶点用于临床。本文对蛋白质的异常糖基化及其与卵巢癌发生发展的关系进行综述，并揭示其潜在的诊疗价值。

糖基化修饰是免疫球蛋白G（IgG）结构和功能的一部分，唾液酸位于IgG N-糖链的最末端，通过调节IgG与可结晶片段γ受体及补体的结合而调控IgG抗炎和促炎活性，与自身免疫疾病的发生发展及转归密切相关，在疾病诊断、监测及治疗领域都显示出了巨大潜能，有望成为自身免疫疾病新型标志物和治疗靶点。

糖基化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一，糖蛋白的糖链在细胞识别、细胞间信号传递、细胞迁移、增殖及分化中均具有重要作用，唾液酸化、岩藻糖基化及糖链分支程度与肿瘤、自身免疫性疾病等发生发展密切相关，聚糖和异常糖基化糖蛋白为疾病发生发展提供了新型生物标志物和干预靶标，并已经成为临床诊断与治疗的研究热点。

目的 探索血清IgG唾液酸化修饰在肝棘球蚴病诊断及鉴别中的应用价值.方法 采集西藏自治区、甘肃省、四川省、青海省2014-2016年的98例肝细粒棘球蚴病患者和29例肝多房棘球蚴病患者血样,广西医科大学附属医院2017年1-12月的30例肝癌住院患者血样,广西医科大学体检科22份健康体检者血样.提取各组血样的血清,每份50μl,采用基于荧光色谱的糖组学技术对血清中IgG的唾液酸化修饰进行定量分析.使用Protein G琼脂糖纯化试剂盒分离纯化血清中的IgG.取50 μg纯化后的IgG样品,在25 mmol/L二硫苏糖醇溶液和50 mmol/L碘乙酰胺溶液中进行还原烷基化反应后加入1μl N-糖苷酶缓冲液,酶解后采用石墨化碳小柱进行糖链的富集并将其冷冻干燥后溶于二甲基亚砜和冰醋酸的7∶3(v/v)混合溶液中,快速加入5 mmol/L的2-氨基苯酰胺溶液和10 mmol/L氰基硼氢化钠溶液各50μl,反应2h后,使用石墨碳小柱纯化.将标记后的糖链在Waters Acquity UPLC(H-Class)系统上进行亲水色谱柱分离,荧光检测器设置的激发和发射波长分别为330 nm和420nm,分析样品的单唾液酸化修饰、双唾液酸化修饰以及总唾液酸化修饰.采用Empower 3软件进行数据收集和处理,SPSS 25进行数据统计分析,数据的比较采用D'Agostino&Pearson omnibus正态分布检验(P1值)与单因素方差分析检验(P2值),两两之间的比较采用Tukey's multiple comparisons test分析(P3值).结果 IgG糖链的色谱图共检测到21个IgG糖链峰,其中单唾液酸化修饰糖链5种,分别为FA2BG1S1(17.79min)、A2G2S1(19.02 min)、A2BG2S1(20.02min)、FA2G2S1(20.27 min)和FA2BG2S1(21.13 min);双唾液酸化修饰糖链4种,分别为A2G2S2(22.70min)、A2BG2S2(23.29min)、FA2G2S2(23.78min)和FA2BG2S2(24.26min).各组血清样品各类唾液酸化修饰的含量均具有正态分布特性(P1＞0.1).肝细粒棘球蚴病组、肝多房棘球蚴病组血清IgG单唾液酸化修饰含量分别为(14.15±2.89)％和(10.24±2.97)％,双唾液酸化修饰含量分别为(3.02±0.98)％和(1.92± 0.65)％,总唾液酸化修饰含量分别为(17.25±3.69)％和(12.27±3.65)％,均低于健康对照组的(16.55±2.95)％、(3.71±1.04)％和(20.26±3.79)％(F=23.70、11.14、22.98,均P2＜0.0001).其中肝细粒棘球蚴病组与肝多房棘球蚴病组相比,单唾液酸化修饰、双唾液酸化修饰和总唾液酸化修饰含量差异有统计学意义(t=6.352、4.701、6.392,P3＜0.0001).利用受试者工作曲线(ROC)进行了 IgG唾液酸化修饰潜在诊断性能的评估,肝细粒棘球蚴病组与肝多房棘球蚴病组间AUC为0.829(95％CI:0.738～0.921),灵敏度和特异性分别为82.7％和87.7％.肝癌组的血清IgG的单唾液酸化修饰、双唾液酸化修饰和总唾液酸化修饰含量分别为(15.09±2.68)％、(3.28± 1.30)％和(18.37±3.69)％,与肝多房棘球蚴病组的差异有统计学意义(t=6.587、4.318、6.372,P3＜0.000 1),肝多房棘球蚴病组和肝癌组间IgG总唾液酸化修饰ROC的AUC为0.881(95％CI:0.793～0.963),灵敏度和特异性分别为86.7％和93.1％.结论 本研究发现了血清IgG唾液酸化修饰可能与肝棘球蚴病的发病机制有关,在肝棘球蚴病诊断,肝细粒棘球蚴病与肝多房棘球蚴病、肝癌与肝多房棘球蚴病的鉴别研究中具有一定的应用价值.

目的 探讨CD44分子岩藻糖基化修饰对兔BMSCs流体黏附力的影响.方法 采用密度梯度离心结合贴壁培养的方法体外分离纯化获得兔BMSCs,倒置显微镜观察细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞表面MSCs相关抗原CD44、CD34、CD29、CD105的表达.使用α-1,3-岩藻糖转移酶Ⅵ(α-1,3-fucosyltransferaseⅥ,FTⅥ)对兔BMSCs进行体外岩藻糖基化处理作为实验组,以未经岩藻糖基化处理的BMSCs作为对照组,采用流式细胞仪检测唾液酸化LewisX (sialyl-LewisX,sLex)阳性率及E-选择素结合率.使用Hank平衡盐溶液重悬的岩藻糖基化BMSCs作为实验组(A组),未经岩藻糖基化修饰的BMSCs作为研究对照组(B组),添加EDTA冲洗的岩藻糖基化兔BMSCs作为阴性对照组(C组),利用平行板流室黏附试验检测兔BMSCs流体黏附力.结果 兔BMSCs形态以长梭形为主,生长旺盛;第3代BMSCs CD44、CD29、CD105呈阳性表达,而CD34呈阴性表达.实验组sLex阳性率为32.52％±1.76％,显著高于对照组的1.48％±0.51％,差异有统计学意义(t=29.277,P=0.000);实验组E-选择素结合率为41.05％±1.84％,显著高于对照组的4.33％±0.92％,差异有统计学意义(t=35.674,P=0.000).随着流体剪切力的增加,A组人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC)表面黏附的BMSCs数量先升高后降低,而B、C组HUVEC表面几乎无BMSCs黏附.各剪切力作用下,A组HUVEC表面黏附的BMSCs细胞数均显著多于B、C组,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD44分子岩藻糖基化修饰能够增强兔BMSCs的流体黏附力.

糖基化是真核生物蛋白质翻译后修饰的主要方式之一,它涉及到一个有组织、高调控的过程,在生物体内有超过50％的蛋白质需要进行糖基化修饰,才能发挥其相应的功能.肿瘤细胞表面糖基化异常是肿瘤恶性转变的一个关键因素,它与肿瘤细胞的生长、增殖、迁移和侵袭等生物学行为密切相关.目前,我们已经能够利用糖基化的改变来对肿瘤患者进行早期诊断和预后分析.本综述主要阐述的是唾液酸化与岩藻糖基化在肺癌发生发展中的作用.

目的 制备内皮性白细胞粘附分子-1(ELAM-1)靶向性MR分子探针,分析其表征,并对其体内靶向性进行探讨.方法 制备:将羧基修饰过的超小型氧化铁颗粒(USPIO)与ELAM-1的配体唾液酸化酶X(sLeX)进行偶联,再以聚乙二醇(PEG)修饰,制备出靶向ELAM-1的MR分子探针USPIO-sLeX-PEG.表征:分别对USPIO和USPIO-sLeX-PEG进行激光动态光散射、热失重、红外光谱以及弛豫性能测试;靶向效果:分别测量两组荷瘤裸鼠瘤灶注药前后的T2值,比较USPIO及USPIO-sLeX-PEG在荷瘤裸鼠MR-T2 mapping上的成像效果,扫描完成后对其精细解剖,取组织病理切片行HE染色及免疫组织化学.结果 ELAM-1分子探针USPIO-sLeX-PEG主要表征:US-PIO-sLeX-PEG水动力尺寸为(51.82 ±5.2)nm,聚合物分散指数为(0.233±0.032);Zeta电位为(-40.17 ±0.55)mV.USPIO-sLeX-PEG分子探针的纵向率r1及横向弛豫率r2分别为6.1 mM-1·s-1、23.6 mM-1·s-1.靶向效果显示:非靶向性USPIO组与靶向性USPIO-PEG-sLeX组比较,后者的增强扫描T2值低于前者(P＜0.05),且后者强化率高于前者(P＜0.05),即USPIO-PEG-sLeX组荷瘤裸鼠在MR-T2 mapping上具有更好的成像效果.免疫组织化学结果示2组荷瘤裸鼠瘤灶ELAM-1均呈高表达.结论 合成的ELAM-1靶向性MR分子探针USPIO-sLeX-PEG表征良好,且对荷瘤裸鼠ELAM-1具有较好的靶向性.

目的:建立全柱成像毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing-whole column imaging detection,cIEF-WCID)方法评价白细胞介素-15(IL-15)融和蛋白的电荷异质性.方法:通过比较5种不同的两性电解质,以及不同尿素浓度(0,3,6和8 mol· L-1)对实验结果的影响,优化建立了IL-15融和蛋白的全柱成像毛细管等电聚焦电泳方法.具体方法为采用3 mol·L-1尿素、0.35％甲基纤维素、4％两性电解质混合溶液作为样品缓冲液,聚焦电压为3 kV,预聚焦时间1 min,聚焦时间7 min.结果:利用新建方法测定了IL-15融和蛋白的等电点范围为6.00 ～6.71,分离检测到12个异构体,重复性实验中各异构体的峰面积百分比RSD为0.7％～7.4％,等电点RSD为0.0％～0.1％;稳定性实验中各异构体峰面积百分比的RSD为1.5％～10.5％,等电点RSD为0.0％～0.3％;3个不同批次IL-15融和蛋白的各异构体峰面积百分比和等电点基本一致.去N-糖基化及去唾液酸化实验结果表明,IL-15融和蛋白的电荷异构体主要是由N-糖基化不同产生,而酸性端异构体是由于唾液酸化程度不同产生的.结论:研究建立的全柱成像毛细管等电聚焦电泳方法可以有效分离IL-15融和蛋白的12种异构体,糖基化尤其是唾液酸化是引起电荷异质性的主要原因,新建方法对IL-15融和蛋白的质量控制有重要意义.

唾液酸化修饰属于一种重要的糖基化修饰,不仅与生物体生长发育密切相关,还直接或间接地影响肿瘤的生物学行为.唾液酰基转移酶介导唾液酸化反应,将供体唾液酸连接到糖蛋白或者糖脂的末端.现已知的唾液酰基转移酶有四大家族,它们分别是ST3 GalI-Ⅵ,ST6GalI-Ⅱ,ST6GalNAcl-Ⅵ和ST8 SiaI-Ⅵ.在许多肿瘤中唾液酰基转移酶的表达量和唾液酸结构均发生改变,并影响肿瘤细胞增殖、转移、血管形成、免疫逃逸等生物学行为.本文对α-2,8唾液酰基转移酶(ST8Sia)的功能及其在不同肿瘤发生发展的机制作一综述.

目的 通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例.方法 通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱图,并根据各峰面积和等电点的相互关系,用最小二乘法进行组成拟合分析,明确峰面积和等电点分布相互关系.结果 确认间隔1个峰模型的合理性,并根据该模型获得一系列基础相关数据,包括该蛋白的表观m值25.53个基准(R);该蛋白的表现n值28.83R;唾液酸的表现m值0.86(0.855)R,表观n值0.12(0.119)R;N乙酰氨基葡萄糖(未区分与N乙酰半乳糖胺的不同)表观n值0.06(0.061)R;去N糖链后形成的羧基表现m值0.19(0.186)R.该蛋白质糖构成的相关信息,包括唾液酸化度为;摩尔比约1.83;蛋白原型占比约8.3％、合N糖链单修饰占比约19.8％、含N糖链双修饰约28.4％、含N糖链三修饰占比约23.7％;带唾液酸O糖链修饰占比19.8％;主要糖型为G0(海藻糖F)、G1(F)、G2(F)、G1A1(F)和G2A1(F).结论 糖链的结构复杂,但也有一定重复性和规律性,希望通过本实验的研究,可以快速勾勒出糖蛋白糖链轮廓,增进对耱蛋白认识和对蛋白相互作用的研究.