目的:制备新型冠状病毒野生株(WT)、Beta变异株、Delta变异株、Omicron变异株(BA.2、BA.5、BQ.1和XBB.1分支)等7株单克隆病毒株，用于申请国家标准株。方法:利用蚀斑纯化技术感染Vero细胞后筛选单克隆毒株，通过观察细胞病变特性与病毒形态学特征、病毒滴度与全基因组序列测定、支原体检测等方法，以评价单克隆毒株的基础生物学特征。结果:WT株、Beta变异株、Delta变异株、Omicron变异株(BA.2、BA.5、BQ.1和XBB.1)7株病毒感染细胞后，细胞病变表现为细胞圆缩脱落；蚀斑纯化后的病毒支原体检测均为阴性，2代至5代的病毒滴度在10 5～10 8 TCID 50/ml之间；电镜下病毒颗粒呈圆形或者椭圆形，直径在60～140 nm之间；全基因组测序与系统进化分析明确了7种毒株的变异株类别，证实了单克隆毒株连续传代5代基因组特征稳定。 结论:制备7种代表性新型冠状病毒变异株的克隆株，具有典型冠状病毒细胞病变效应、形态结构清晰、病毒活性良好、遗传稳定等特性，可作为候选毒株用于申请国家标准株。

目的:确定G1、G3和G5三个基因型别的乙型脑炎病毒(乙脑病毒)国家标准株实验室鉴定评价指标，评价乙脑病毒国家标准株。方法:依据病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准，基于乙脑病毒研究工作中的应用，以形态学特征、生物学特征、分子生物学特征等数据为基础，鉴定G1型(NX1889株)、G3型(P3株)和G5型(XZ0934株)三个基因型别乙脑病毒株的特征。结果:乙脑病毒电镜下为球形颗粒，直径约为60 nm；感染BHK-21、Vero细胞后，细胞病变效应以细胞圆缩脱落为主，感染C6/36细胞后，表现为细胞融合和脱落；病毒滴度为10 5~10 7 PFU/ml，噬斑大小存在型别差异；G1、G3和G5型乙脑病毒三周龄小鼠腹腔攻毒的半数致死量为50.51 PFU、6.98 PFU、8.13 PFU，五周龄小鼠颅内攻毒的半数致死量为3 PFU、0.3 PFU、1.35 PFU；G1、G3和G5型乙脑病毒基因组全长分别为：10 967 bp、10 976 bp和10 983 bp。 结论:通过乙脑病毒电镜、细胞、动物和基因组等实验室指标的确定，鉴定与评价了三个基因型别乙脑病毒国家标准株，为其他病毒国家标准株的鉴定与评价提供了参考。

病原微生物菌(毒)种是开展传染性及感染性疾病防治、科研、教学、食品、药品和生物制品生产、出入境检验检疫等工作的研究对象及物质基础，是直接关系国家生物安全的重要战略资源。做好病原微生物菌(毒)种保藏，提升我国病原微生物资源自我保障能力，事关国家生物安全和核心利益。病原微生物菌(毒)种保藏的核心在于质量、基础在于标准，定义、评价病原微生物菌(毒)种国家标准株，是病原微生物菌(毒)种保藏领域一项重要的基础性工作。本文回顾了标准株的发展，并对评价病原微生物菌(毒)种国家标准株的基本原则、类型、评价技术要求进行论述，以提高我国病原微生物菌(毒)种资源质量和管理水平，确保国家生物安全。

本标准由中国疾病预防控制中心负责技术咨询，由国家卫生健康委科技教育司负责业务管理、法规司负责统筹管理。

目的:对一起食源性疾病暴发事件中分离的2种血清型沙门菌进行病原学分析。方法:采集2022年9月8日某学校暴发事件中病例肛拭子11件、可疑污染食品13件和环境样本10件；对病例肛拭子分别使用亚硒酸盐煌绿增菌液和脑心浸液肉汤（BHI）进行增菌培养，在完成常见肠道病原菌荧光PCR检测后，根据结果开展相应致病菌的分离培养；对可疑污染食品参照食品安全国家标准进行检测；每份肛拭子样本和食品样本均挑取多个疑似沙门菌菌落进行血清学凝集和全基因组测序；根据全基因组测序结果确定沙门菌血清型，基于菌株核心基因组单核苷酸多态性（SNP）进行聚类分析。结果:病例肛拭子和可疑污染食品沙门菌检出率分别为9/11和5/13，其中4例病例肛拭子和4件可疑污染食品样本均分离到2种血清型沙门菌（乌干达沙门菌和伊迪坎沙门菌），其余阳性样本分离沙门菌均为单一乌干达沙门菌血清型或单一伊迪坎沙门菌血清型。11件病例肛拭子样本接种BHI增菌液后12 h和24 h沙门菌荧光PCR检出率均为9/11，与分离培养结果一致。2种血清型沙门菌在基于核心基因组SNP构建的聚类树中形成2个相互独立且遗传距离较远的分支，而每一种血清型沙门菌也表现出基因组多态性，乌干达沙门菌之间SNP差异个数介于0~14个，伊迪坎沙门菌之间SNP差异个数介于0~23个。结论:本次事件为乌干达沙门菌和伊迪坎沙门菌共同导致食源性疾病暴发事件，基于BHI对病例肛拭子增菌并进行沙门菌荧光PCR检测的方案可在暴发中应用。

目的:构建代表我国HIV-1主要流行亚型的标准株，建立种子库和工作库。方法:按照《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》要求，复核鉴定分析病毒的基因型和表型。对6株HIV-1标准株进行逐级放大扩增培养，构建第二代种子库和第三代的工作库，液氮冻存。结果:获得了6株HIV-1标准株，其中3株为CRF_07BC(NRPC2.4.9003、NRPC2.4.9005、NRPC2.4.9006)，1株为CRF_01AE(NRPC2.4.9001)，1株为CRF_08BC(NRPC2.4.9002)，1株为URF(NRPC2.4.9004)。表型检测6株病毒均为CCR5嗜性、非融合诱导型。TCID 50均大于1×10 5/ml，p24抗原浓度均高于2 ng/ml，构建了每株不少于20支的种子库以及每株不少于50支的工作库，应用HIV-1标准株对抗病毒药物PEG2kC34、PEG5kC34、LP-19以及中和抗体LSEVh-LS-F进行评价。 结论:获得了涵盖我国主要流行亚型的HIV-1标准株6株，建立了HIV-1标准株资源库。填补了我国HIV-1标准株保藏的空白，为药物和疫苗评价提供了技术支撑。

2023年5月1日，《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)》正式实施，这是贯彻落实《中华人民共和国生物安全法》《国家卫生健康委人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构"十四五"发展规划》，健全完善病原微生物保藏和国家生物安全标准体系的具体体现和重要举措之一。本标准首次明确了人间传染的病原微生物菌(毒)种国家标准株的一个定义、四项评价原则、五种用途类型、三类评价指标，并首次规范了国家标准株评价技术程序和证明。标准实施后，必将有力支撑我国传染病防控、食品安全检测、生物计量等病原微生物标准株评价、应用的国家需求，逐渐减少对国外标准株长期依赖等"卡脖子"问题，在促进生物科技创新高质量发展的同时，助力国家生物安全和高水平科技自立自强。

目的 为分析云南省生食蔬菜中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、致泻性大肠埃希菌污染情况及菌株的耐药性和致病性,通过各污染菌的抗生素敏感性特征图谱及全基因组测序数据对菌株进行耐药和致病基因分析.方法 采用食品安全国家标准GB 4789.4-2016、GB 4789.30-2016、GB 4789.6-2016对180份生食蔬菜样品中的沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、致泻大肠埃希菌进行检测和鉴定;采用肉汤稀释法对分离到的菌株进行药敏测定;同时对菌株进行全基因组测序,基因组序列经组装后通过相应的生物信息学流程进行数据分析.结果 180份生食蔬菜中共有12份样品检出了致病菌,包括生菜、香菜、折耳根等.共检出了致病菌13株,其中沙门菌7株,共7种血清型,4株存在多重耐药,耐药表型与耐药基因关联性良好,5株携带有与多重耐药相关的IncHI和IncF型质粒;单核细胞增生李斯特菌4株,1株存在多重耐药,2株携带毒力岛LIPI-3;肠聚集黏附性大肠埃希菌2株,1株存在多重耐药.结论 折耳根等具有地域特色的生食蔬菜种类致病菌检出率较高,应该持续关注,部分单核细胞增生李斯特菌菌株因含有更多的毒力基因,而具有更高的致病性;沙门菌和致泻大肠埃希氏菌多重耐药情况较为严重.

目的 对重庆市某高校一起鼠伤寒沙门菌引起的食源性疾病暴发事件进行实验室病原学分析.方法 按照食品安全国家标准(GB 4789.4-2016)对11株沙门菌分离株进行生化和血清型鉴定;使用微量肉汤稀释法进行药敏测试;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和全基因测序(WGS)进行分子分型、毒力和耐药基因分析.结果 11株沙门菌全部为鼠伤寒沙门菌;在测试的15种抗生素中,所有菌株仅对四环素耐药;所有菌株的PFGE带型一致;WGS鉴定与血清学表型实验结果一致,所有菌株均携带2个四环素类耐药基因和10个毒力岛;溯源分析结果显示所有菌株的ST型相同,wgSNP进化树显示所有菌株可聚为一簇.结论 11株鼠伤寒沙门菌序列高度同源,说明患者、环境和食品分离株来源相同,结合流行病学调查结果判定此次食源性疾病暴发事件是由食品加工人员使用器皿生熟不分引起食品污染所致.

目的 采用快速分子诊断方法中TaqMan荧光定量PCR技术,应用于利福平和异烟肼一线抗结核药物耐药基因的诊断中,评价其性能,建立高灵敏度、高特异度、高准确性并且快速的筛查方法,为结核分枝杆菌耐药性的诊断和治疗提供依据并探讨其应用价值,努力改善耐药结核病的检测和可行性.方法 本研究针对利福平ropB基因531位点突变和异烟肼katG基因315位点突变的特点,设计TaqMan-MGB引物和探针,通过反应条件优化,建立TaqMan荧光定量PCR方法;用克隆到pUC57载体上的阳性标准品及不同菌株评价该方法的特异性、灵敏度、重复性和精密度,采用甘油三酯、胆红素和血红素进行了干扰性实验.结果 TaqMan荧光定量PCR方法的检测限可达10copies/μl;在交叉干扰实验中,检测了 5种常见呼吸道感染细菌国家标准菌株,均未检出,基因野生型和突变型探针特异性较好,不受其它基因干扰;批内、批间的CT值变异系数均小于5％,标准曲线R2=0.998,扩增效率均在90％以上;该反应迅速,检测时间为1h.结论 本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法有助于及时发现结核分枝杆菌耐药情况,对结核病的耐药检测与后续治疗具有重要意义.