目的 苏云金芽孢杆菌对不同虫类影响的meta分析.方法 计算机检索NIH数据库、PubMed数据库、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(Wangfang)共4个国内外数据库,检索有关苏云金芽孢杆菌杀虫效果的文献.检索年限从1980年1月-2022年6月,由3名研究者独立提取资料进行质量评价后采用Stata 16.0软件进行meta分析.结果 共纳入25篇符合标准文献,包括20篇中文研究和5篇英文研究.Meta分析结果显示,(1)首先选取95％置信区间及WMD的数据进行异质性分析,半翅目(95％CI:1.83～3.38,Z=6.59,P＜0.01,P=30.98％)、草地贪夜蛾(95％CI:1.40～2.08,Z=11.62,P＜0.01,I2=0.00％)与蚊子(95％CI:0.50～2.20,Z=3.11,P＜0.01)三者统计学异质性较小(I2＜50％),其合并效应的结果较可靠,合并效应差异有统计学意义;棉铃虫(95％CI:1.03～1.60,Z=9.07,P＜0.01,P=96.82％)、甜菜夜蛾(95％CI:2.58～6.87,Z=4.32,P＜0.01,I2=93.49％)与小菜蛾(95％CI:1.61～2.73,Z=7.60,P＜0.01,I2=97.15％)三者统计学异质性较大(I2＞50％),使用随机效应模型后合并效应差异有统计学意义.(2)选取昆虫死亡数作为结局指标,使用空白对照分析,棉铃虫(95％CI:4.72～7.30,Z=9.15,P＜0.01,I2=39.22％)、小菜蛾(95％CI:5.19～6.92,Z=13.78,P＜0.01,I2=46.26％)与蚊子(95％CI:3.79～5.03,Z=13.95,P=0.00,I2=25.83％)三者统计学异质性较小(I2＜50％),采用固定效应模式分析结果,差异有统计学意义.结论 苏云金芽孢杆菌对鳞翅目、双翅目、半翅目的昆虫有大小不等的杀伤作用,研究结果中对棉铃虫与小菜蛾的杀伤作用较为突出,具有研究价值.

目的 探讨在不同环境温度下苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensisisraelensis,Bti)对白纹伊蚊幼虫的杀伤效果.方法 采用Probit analysis生物测定法,检测和比较分析不同环境温度下Bti对白纹伊蚊三龄幼虫的杀伤效果.利用不同浓度Bti处理后的幼虫累积死亡率对应P值和浓度对数值进行线性回归分析,获得线性回归公式,计算LC50和LC95等重要剂量参数.结果 Bti对白纹伊蚊幼虫具有明显的杀伤效应,药物起效快.在常规28 ℃,Bti处理后12h即出现明显的幼虫死亡,随Bti处理时间的延长和浓度的增大,白纹伊蚊幼虫累积死亡率升高.本研究获得了不同温度下各时间点Bti对白纹伊蚊幼虫毒杀作用的线性回归公式.同一Bti浓度下28 ℃～32℃的杀虫效果较为理想,20℃的低温度环境下Bti杀虫效果相对最弱;28 ℃下各时间点的LC95均最低,在24h、48 h、72 h和96 h的LC95分别为122.418、109.404、96.474和92.229 IU/L.结论 Bti对白纹伊蚊三龄幼虫具有很好的杀伤效果,环境温度可影响Bti对白纹伊蚊的杀虫效果,在一定范围内适当升高温度可以增强其杀灭效果;在Bti的实际使用中,应充分考虑温度因素的影响,以达到更好的杀虫效果.

目的 了解安徽省合肥市登革热媒介白纹伊蚊对常用卫生杀虫剂的抗药性水平,为科学防治媒介伊蚊及规范制定杀虫剂使用管理策略提供科学依据.方法 采用幼虫浸渍法和成蚊接触筒法测定白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平.采用SPSS 22.0软件Probit模块对生物测定数据进行分析,获得毒力回归方程、卡方值、半数致死浓度(LC50)及95%置信区间(CI)等,并计算死亡率和抗性倍数,判断抗性水平.结果 合肥市白纹伊蚊幼虫对残杀威、双硫磷、敌敌畏、毒死蜱、苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti)、氯菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯8种杀虫剂的LC50值分别是2.984、0.015、0.055、0.004、0.037(259 ITU/L)、0.235、0.103和0.019 mg/L,抗性倍数分别为8.29、9.25、0.91、0.33、0.84、117.79、257.50和21.13;合肥市白纹伊蚊幼虫对Bti、敌敌畏和毒死蜱的抗药性仍为敏感水平,对残杀威和双硫磷为低抗水平,对高效氯氰菊酯为中抗水平,而对氯菊酯和溴氰菊酯为高抗水平.合肥市白纹伊蚊成蚊对杀螟硫磷和溴氰菊酯产生了抗药性(24 h死亡率分别为21.43%和71.60%),对毒死蜱和(噁)虫威均敏感(24 h死亡率均为100%),对氯菊酯、高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、残杀威和马拉硫磷均为可能抗性.结论 毒死蜱可用于成蚊防治,双硫磷和Bti可作为幼蚊防治首选杀虫剂;(噁)虫威可与敏感型菊酯类联合或复配在重点区域进行成蚊控制,总体上应减少使用菊酯类和杀螟硫磷,以延缓蚊虫对其抗性水平发展并逐渐恢复敏感性.

目的 通过微生物细菌培养组学探究血小板中的可培养细菌组成,将培养组学结果与宏基因组学结果相互验证,以提高血小板中的细菌检出率.方法 收集 6 份健康人血小板标本,采用 8 种培养基于需氧条件和 12 种培养基于厌氧条件中对血小板中细菌进行大规模培养和分离,并对筛选获得的单菌落进行 16S rRNA基因测序鉴定.采用宏基因组测序技术分析健康人血小板微生物组细菌丰度.结合宏基因组测序和培养组结果,确认血小板中存在的的细菌种类.结果 6 份血小板标本经培养组学共分离获得 90 株细菌,隶属于 3 个门,5 个纲,5 个目,7 个科,9个属,23 个种,其中在种水平上得到的单克隆较多的菌株为 aurantiaca 短波单胞菌(Brevundimonas aurantiaca)(16.7%),Bacillus sp.Y1(15.6%),痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)(14.4%)和短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)(13.3%);血小板标本经mNGS测序发现变形菌门(Proteobacteria),厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)丰度值较高.培养组学方法与宏基因组测序都检测出的细菌为:厚壁菌门细菌种类:Bacillus sp.Y1、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、运动芽孢杆菌(B.mobilis)、贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis);放线菌门细菌种类:痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes);变形菌门细菌种类:大肠埃希菌(Escherichia coli)和戴尔福特菌(Delftia tsuruhatensis).结论 培养组学和宏基因组学方法相互验证鉴定出了一些细菌,证明血小板中存在细菌.

目的 构建表达dsRNA的双向启动子以及靶基因AaCPR100A的大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315-AaCPR100A.方法 以苏云金芽孢杆菌pSVP27A质粒为模板通过PCR扩增苏云金芽孢杆菌Cry3A正向启动子Pro-1(+);以埃及伊蚊RNA反转为cDNA为模板,扩增靶基因AaCPR100A;将大肠-苏云金穿梭载体pHT315质粒经Hind Ⅲ和Sal Ⅰ双酶切线性化;按照转录方向将正向启动子与靶基因通过无缝克隆插入穿梭载体pHT315中;以生物合成的含有Cry3A反向启动子序列的质粒为模版,经PCR克隆扩增Pro-1(-)反向启动子;将含有正向启动子与靶基因的中间载体通过EcoRⅠ限制性酶切酶线性化,按转录方向在靶基因下游通过无缝克隆插入反向启动子.结果 经琼脂糖凝胶电泳检测,正向启动子、靶基因AaCPR100A和反向启动子PCR产物条带清晰,质量良好,可用于无缝克隆实验;经无缝克隆连接双向启动子以及靶基因片段后,对含有重组载体pHT315-AaCPR100A的重组质粒进行PCR验证,在重组载体中成功扩增正向启动子、靶基因片段以及反向启动子,经核苷酸测序验证双向启动子序列以及靶基因序列测序结果与序列比对结果基本一致,符合构建载体元件的要求,证明重组载体构建成功.结论 本研究利用无缝克隆技术成功构建含有双向启动子以及靶基因的重组穿梭载体,为构建表达伊蚊表皮蛋白基因AaCPR100A dsRNA的苏云金芽孢杆菌工程菌奠定基础.

[背景]马蜂(Vespa mandarinia Smith)可以防治多种田间害虫,还具有药用价值,其肠道菌群结构和功能还有待研究.[目的]获得马蜂肠道可培养细菌并筛选出具有产消化酶功能的菌株,为理解肠道菌对宿主的影响机理及功能菌株的利用提供科学依据和研究材料.[方法]采用传统细菌分离培养法获得马蜂肠道菌,结合形态学以及 16S rRNA基因序列分析进行鉴定;利用水解圈法分别筛选产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶菌株;通过测量水解圈D与菌落直径d的比值,比较不同细菌的产酶能力.[结果]在马蜂肠道中共分离出 6 属 10 种细菌,其中芽孢杆菌属 5 种,肠球菌属、葡萄球菌属、明串珠菌属、乳球菌属和不动杆菌属各 1 种.从获得的 61 个菌株中筛选出 6 个具有产消化酶功能的菌株.其中,苏云金芽孢杆菌V44 具有产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶 4 种消化酶的能力;粪肠球菌V6 具有产淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶 3 种消化酶的能力;蜡样芽孢杆菌V43 具有产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶 3 种消化酶的能力;粪肠球菌V20、蜡样芽孢杆菌 V19 和维德曼氏芽孢杆菌 V22 均具有产蛋白酶的能力.[结论]马蜂肠道细菌资源较丰富,部分有产消化酶的功能,可帮助马蜂消化食物,对宿主健康有一定影响.本研究筛选的 6 个菌株都能产蛋白酶,其中菌株V43 和V44 分别具有最强产淀粉酶和脂肪酶的能力,是可进一步开发利用的肠道功能菌株资源.

目的 了解潍坊市白纹伊蚊对常用卫生杀虫剂的抗药性,为科学使用杀虫剂提供依据.方法 采用幼虫浸渍法,测定白纹伊蚊Ⅲ龄末Ⅳ龄初幼虫死亡数,SPSS 19软件计算毒力回归方程和幼蚊对杀虫剂的半数致死浓度(LC50);采用成蚊接触筒法,测定羽化后3～5 d未吸血健康雌蚊24 h死亡率.结果 白纹伊蚊幼虫对氯菊酯、残杀威和双硫磷抗性倍数为3.07～6.52倍.对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti,7 000 ITU/mg)抗性倍数为12.40～18.40倍.成蚊对0.08％高效氯氰菊酯、0.4％氯菊酯、0.07％高效氯氟氰菊酯和0.03％溴氰菊酯均产生抗性,24 h死亡率在15.94％～62.32％;除对0.2％杀螟硫磷2022年测定结果为可能抗性(死亡率为92.65％)外,对0.5％马拉硫磷、2％毒死蜱、0.2％杀螟硫磷、0.2％噁虫威和0.05％残杀威均表现为敏感,死亡率为98.63％～100％.结论 潍坊市白纹伊蚊已对大部分拟除虫菊酯类杀虫剂产生了较为严重的抗药性,需根据监测结果调整当地蚊虫防治药剂使用,且应采取环境治理为主的综合性防治措施,不同作用机制杀虫剂交替轮用或复配使用,预防和减缓抗药性的产生.

目的 了解重庆市高层建筑二次供水微生物污染状况、优势菌株及致病菌耐药状况、毒力基因及亲缘关系分析.方法 2020-2021年采集重庆市152栋楼层超过18层、楼龄在5年以上的二次供水样本152份,进行细菌分离鉴定、药敏实验及全基因组测序以及病毒核酸检测.结果 152份水样中56份无细菌生长,67份1种细菌生长,23份2种细菌生长,5份3种细菌生长,共分离获得菌株128株.检出率居于前3位的微生物是芽孢杆菌属(25.0％,32/128)、假单胞菌属(18.0％,23/128)、不动杆菌属(7.8％,10/128).分离率较高的致病菌/条件致病菌有:蜡样芽孢杆菌10株,苏云金芽孢杆菌6株,琼氏不动杆菌6株,产碱假单胞菌6株,溶血葡萄球菌4株,藤黄微球菌、偶发分枝杆菌、铜绿假单胞菌各3株,少动鞘氨醇单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等均有检出.铜绿假单胞菌对8种抗生素耐药、蜡样/苏云金芽孢杆菌对p-内酰胺类抗生素均耐药;诺如病毒、轮状病毒、新型冠状病毒3种病毒核酸检测均为阴性;全基因测序构建系统进化树显示,2株分离自二次供水的苏云金芽胞杆菌进化亲缘关系与致病株97-27等更接近.结论 重庆市高层建筑二次供水存在芽孢杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属等致病菌污染,影响高层建筑居民健康.

目的 研究海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus 162432的化学成分.方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物采用HR-ESI-MS、NMR以及文献比对等方法进行鉴定,新化合物的绝对构型通过计算NMR和圆二色谱(ECD)确定.结果 从菌株Streptomyces parvulus 162432中分离纯化了 9个环二肽类化合物,包括1个新化合物链霉菌二肽A(1)和8个已知化合物:环-(D-顺式-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)(2)、环-(D-脯氨酸-D-苯丙氨酸)(3)、环-(L-羟脯氨酸-L-亮氨酸)(4)、环-(L-羟脯氨酸-D-亮氨酸)(5)、环-(D-脯氨酸-L-亮氨酸)(6)、环-(L-脯氨酸-D-亮氨酸)(7)、环-(D-脯氨酸-L-异亮氨酸)(8)、环-(L-亮氨酸-D-缬氨酸)(9).对分离得到的化合物1～9进行肿瘤细胞增殖细胞毒和抗菌活性评价,活性结果显示,化合物1～9在10 μg/mL下对肿瘤细胞增殖均未显示出明显的细胞毒活性;化合物9对苏云金芽孢杆菌显示抑菌活性,最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为25 μg/mL.结论 化合物1为新化合物,化合物2和4～9为首次从链霉菌Streptomyces parvulus中分离得到,化合物9具有一定的抗菌活性.

[目的]细菌性肠道病是家蚕Bombyx mori主要病害之一.本研究旨在探究广谱性抗菌肽SAAP-148对家蚕细菌性肠道病病原细菌的抑制效果,为进一步采用抗菌肽替代抗生素预防家蚕细菌病提供参考.[方法]采用qRT-PCR检测家蚕抗菌肽基因在健康和感染细菌性肠道病5龄第4天幼虫中肠中的表达量;分离感染细菌性肠道病家蚕5龄第4天幼虫中肠中的菌群,采用最大似然法构建系统发育树;采用添食法(1 × 1010和1 × 1014 CFU/mL菌悬液)和穿刺法(2 × 108和2 ×109 CFU/mL菌悬液)检测分离的8种细菌及4种常见细菌病病原细菌粪肠球菌Enterococcus faecalis、黑胸败血芽孢杆菌Bacillus bombyseptieus、苏云金芽孢杆菌B.thuringiensis和灵杆菌Serratia marcescens对5龄健康家蚕幼虫的致病性;采用琼脂平板扩散法分析抗菌肽SAAP-148对分离的肠道病病原细菌和黑胸败血芽孢杆菌等其他常见细菌病病原细菌的抑制效果.[结果]测定的家蚕抗菌肽基因的表达量在感染细菌性肠道病的家蚕5龄第4天幼虫中肠中较健康个体中均显著上调,表明家蚕自身抗菌肽在抵抗细菌性肠道病的过程中发挥了 一定的作用;感染细菌性肠道病的家蚕5龄第4天幼虫中肠中共分离出8种病原细菌,即松鼠葡萄球菌Mammaliicoccus sciuri、嗜水气单胞菌 Aeromonas hiydrophila、生癌肠杆菌 Enterobacter cancerogenus、布甘氏肠杆菌 E.bugandensis、霍氏肠杆菌E.hormaechei、弗劳地枸橼酸杆菌Citrobacter freundii、肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae和变栖克雷伯菌K.variicola;穿刺结果显示8种细菌均具有致病性,其中松鼠葡萄球菌、嗜水气单胞菌、生癌肠杆菌和布甘氏肠杆菌致病性较强,霍氏肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、肺炎克雷伯菌和变栖克雷伯菌致病性较弱.抗菌肽SAAP-148对分离出的8种病原细菌和家蚕其他4种常见细菌病病原细菌均具有体外抑制效果,且抑制效果随SAAP-148浓度增大而增强.[结论]抗菌肽SAAP-148不仅对可能引起家蚕细菌性肠道病的病原细菌具有明显抑制效果,对引起家蚕黑胸败血症、灵菌败血症、细菌性中毒症的病原细菌和对氨苄青霉素已经产生抗性的霍氏肠杆菌等也具有抑制效果,可作为理想的抑菌剂用于预防家蚕细菌病的发生.