目的:建立健儿颗粒剂、消炎止痒醑、百草洗剂3种医院制剂的微生物限度检查方法。方法:参照2015年版《中华人民共和国药典》四部通则，采用常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法、中和剂结合薄膜过滤法对3种医院制剂进行微生物计数检查方法的适用性试验。采用常规法、薄膜过滤法、中和剂结合薄膜过滤法对3种医院制剂进行控制菌检查方法的适用性试验。结果:健儿颗粒剂采用常规法进行微生物限度检查。消炎止痒醑采用薄膜过滤法进行微生物限度检查。百草洗剂采用中和剂结合薄膜过滤法进行微生物限度检查。结论:建立了3种医院制剂的微生物限度检查方法，方法准确可靠。

目的:体外检测小檗碱对酵母相马尔尼菲篮状菌（TM）的抗菌活性。方法:TM标准株（ATCC22019）1株，临床分离株10株，野生竹鼠分离株10株。TM以（1~5）× 10 3菌落形成单位/ml菌悬液接种于用微量稀释法制备的小檗碱、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、卡泊芬净药敏板，在37 ℃下培养48 h后观察结果，同时设阳性对照（仅加TM和培养基，不加药物）和阴性对照（仅加培养基，不加TM和药物）。参照M27-A3方案测定最低抑菌浓度（MIC）。 结果:质控株（ATCC22019）MIC均在参考范围内，阳性对照孔TM生长良好。小檗碱MIC范围为32~64 mg/L；氟康唑对非耐药株MIC为2~4 mg/L，对2株临床耐药株为128 mg/L；伊曲康唑MIC为0.06~0.125 mg/L，伏立康唑为0.06~0.125 mg/L，两性霉素B为1~2 mg/L，卡泊芬净为16~32 mg/L。结论:小檗碱具有抑制酵母相TM活性的作用。

目的:探究山东省潍坊市农村居民耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌（CR-ECL）耐药基因特征及核心基因组特征。方法:收集2017年山东省潍坊市农村社区居民粪便标本，使用耐碳青霉烯类肠杆菌显色培养基筛选耐药菌株，通过激光解吸/电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOFMS）分析获得CR-ECL阳性菌株，针对CR-ECL分离株，采用微量肉汤稀释法进行抗生素敏感性试验获得CR-ECL耐药表型，开展全基因组测序（WGS）和分析、 blaNDM基因周围环境及菌株间系统进化分析。 结果:共获得并检测628份粪便标本，6份为CR-ECL阳性（检出率0.96%），均表现为多重耐药（MDR）表型。6株CR-ECL共有4个MLST分型（ST），均携带多种耐药基因（ blaNDM-1、 blaNDM-5等）和毒力基因（ acrA、 acrB、 entB、 fepC等），且 blaNDM基因周围遗传环境中均存在移动遗传元件 ISAba125、 TN3-IS3000、 TN3及 IS5。系统发育树显示，核心基因组多位点序列分型（core genome multilocus sequence typing，cgMLST）与单核苷酸多态性（SNPs）结果具有一致性，cgMLST结果显示菌株2BC0101B与2BC0251B，2BG0561B与2BI0221B之间等位基因差异分别为2和1，SNPs结果显示上述2对菌同样各自聚成一簇，并发现美国国立生物技术信息中心数据库（National Center for Biotechnology Information，NCBI）中鸡粪样本的菌株居于进化树中心，且本地序列均可追溯到美国人源序列。 结论:山东省潍坊市农村社区居民中已检出多重耐药碳青霉烯类阴沟肠杆菌。

目的:探讨中药单体小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）细胞膜完整性、通透性的影响以及细菌细胞壁结构的改变，为中药单体成分小檗碱在抗菌中的临床应用奠定基础。方法:本研究采用非随机同期对照试验。收集上海市第八人民医院检验科2019—2020年老年科患者下呼吸道样本分离培养的MRSA菌株3株。采用梅里埃VETEK MS全自动快速微生物质谱检测系统及VETEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪鉴定细菌药敏实验检测细菌菌种及药敏；采用微量肉汤稀释法测定小檗碱对MRSA的最低抑菌浓度（MIC）；采用培养基电导率实验观察不同浓度小檗碱对MRSA细胞膜通透性的改变；透射电子显微镜观察不同浓度小檗碱作用后MRSA细胞壁结构的变化。通过GraphPad Prism5统计软件，对电导率实验结果进行差异性分析。结果:小檗碱对MRSA的MIC为64 μg/ml；8 μg/ml（1/8 MIC）、16 μg/ml（1/4 MIC）、32 μg/ml（1/2 MIC）、64 μg/ml（1 MIC）、128 μg/ml（2 MIC）小檗碱作用菌体4 h后，电导率分别增加了24.49%、34.59%、208.92%、196.40%及208.68%。透射电子显微镜观察发现低浓度（8 μg/ml；1/8 MIC）小檗碱对细菌无明显破坏作用，MRSA菌体结构完整；中浓度（64 μg/ml，1 MIC）小檗碱作用于MRSA后发现MRSA的细胞壁变薄；高浓度（512 μg/ml；8 MIC）小檗碱诱导MRSA的细胞壁结构大量破坏溶解，菌体内容物大量外泄，导致细菌裂解死亡。结论:小檗碱通过改变MRSA细胞膜通透性及破坏和溶解细胞壁的结构，达到杀灭细菌的作用。

目的 探讨非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定分布及耐药性,为临床诊治提供参考依据.方法 搜集2017―2020年贵州某专科医院微量肉汤稀释法药敏试验对-硝基苯甲酸(PNB)培养基阳性的疑似NTM菌株,经聚合酶链式反应(PCR)-荧光探针法初步鉴定为NTM后,用基因芯片法进行菌种鉴定,采用微量肉汤稀释法进行15种药物测试.结果 贵州地区流行的100例NTM菌株经鉴定分为10种菌型类别.其中,占比最高者为龟/脓肿分枝杆菌48%(48/100),其后依次为鸟分枝杆菌16%(16/100),堪萨斯分枝杆菌12%(12/100),胞内分枝杆菌11%(11/100).药敏结果显示100株NTM总耐药率61.8%,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高76.4%,其后依次为微黄分枝杆菌73.3%、偶然分枝杆菌55.6%、鸟分枝杆菌53.8%和戈登分枝杆菌53.3%.男女病人比例为63∶37,男性耐药率56.1%;女性耐药率71.5%.结论 贵州地区有10种NTM菌种流行,龟/脓肿分枝杆菌是该地区NTM优势菌种.不同菌种间耐药率差异较大,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高.男性病人多于女性,女性耐药率高于男性.应用快速NTM菌种鉴定和药敏试验,可为NTM防控项目的决策者提供参考依据,有助于促进医务人员对抗NTM药物的科学选择.

目的 建立反向高效液相色谱法同时测定复方银唑散中磺胺嘧啶银和酮康唑的含量并探讨其微生物限度检查方法.方法 色谱柱为Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.07%三乙胺(A,冰醋酸调节pH至5.07)-甲醇(B),梯度洗脱:0～6 min,A80%;6～8 min,A80%～22%;8～21 min,A保持22%;21～22 min,A22%～80%,流速1.0 mL/min,检测波长:240 nm,柱温:30℃.采用培养基稀释法作为需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法并按《中国药典》2020年版四部通则微生物限度检查法对控制菌检查法进行验证.结果 磺胺嘧啶银在0.029 64～0.069 15 g/L浓度范围下与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),酮康唑在0.030 54～0.071 26 g/L浓度范围下与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),磺胺嘧啶银和酮康唑的平均回收率分别为101.5%(n=6,RSD=0.33%)和98.8%(n=6,RSD=0.65%).采用培养基稀释法,各试验菌的回收率均在0.5～2.0.结论 所建立的高效液相色谱法定量准确、专属性良好,可用于同时测定复方银唑散中磺胺嘧啶银和酮康唑的含量.采用培养基稀释法对复方银唑散进行微生物限度检查可行.

目的 考察市售儿童化妆品的卫生质量状况,研究其控制菌检查方法的适用性.方法 按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)对市售常见的83批儿童化妆品进行微生物检查,通过参考《中国药典》(2020年版)控制菌检查方法对儿童化妆品的控制菌进行方法适用性试验,同时按不同剂型对其进行分类,并统计各剂型中防腐剂使用情况和占比问题,根据抑菌性样品添加的防腐剂成分类型统计防腐剂添加情况.结果 83批儿童化妆品经微生物检查合格率达100％;控制菌检查方法适用性试验表明,12批样品有不同程度的抑菌性,抑菌率为14.5％.样品需通过培养基稀释法或薄膜过滤法结合添加中和剂等方法消除抑菌性,其方法适用性试验才能通过,表明一些儿童化妆品自身的抑菌性较强.防腐剂统计结果可见,儿童化妆品中防腐剂苯氧乙醇的使用率最高,其次是苯甲酸钠和羟苯甲酯,且不同剂型的儿童化妆品对防腐剂添加的种类有相对的偏向选择适用性;抑菌性成分统计情况可见,氯苯甘醚和苯甲酸的抑菌性较强.结论 儿童化妆品在控制菌检查前建议进行方法适用性试验,在儿童防腐剂种类的选择上尽量选择安全有效且抑菌性较弱的防腐剂;本研究可为儿童化妆品生产企业提供参考.

目的 探讨灯台叶总碱与氟康唑联用对耐药白念珠菌CA23 毒力因子的作用和潜在机制.方法 微量稀释法、棋盘法及时间-杀菌曲线测定灯台叶总碱与氟康唑联用效果;荧光探针测定菌株外排泵功能,实时荧光定量PCR法检测耐药相关基因表达;倒置显微镜、扫描电镜观察菌丝诱导培养基中菌株形态转换,RT-qPCR法检测菌丝相关基因表达,添加外源性cAMP验证;卵黄琼脂平板法检测菌株胞外磷脂酶活性.结果 灯台叶总碱与氟康唑对耐药白念珠菌具有较强的协同抑菌作用;联用处理并不能显著抑制菌株的外排功能,与耐药相关基因表达结果一致;两药联用可以抑制在SD和Spider诱导培养基中菌丝生长,且下调菌丝相关基因CYR1、ALS3、RAS1、BCR1、ALS2、TPK2 表达,添加外源性cAMP后,能恢复部分药物联用引起的菌株形态变化;两药联用能抑制胞外磷脂酶活性,且对灯台叶总碱存在剂量依赖性.结论 灯台叶总碱与氟康唑联用对氟康唑耐药株表现为协同抑菌作用,其机制与调节Ras1-cAMP-PKA信号通路抑制菌丝生长,并降低胞外磷脂酶活性从而影响耐药白念珠菌毒力因子有关.

[背景]麻类生物脱胶与化学法脱胶相比具有环保优势.[目的]获得用于汉麻生物脱胶的高效果胶酶菌株.[方法]使用以果胶为唯一碳源的培养基,采用平板稀释法进行菌株筛选,通过生理生化实验和 16S rRNA 基因序列比对鉴定目标菌株.采用单因素试验优化产酶条件,并验证该条件下汉麻生物脱胶效果.[结果]获得一株具备高活性果胶的酶菌株,归类为果胶杆菌(Pectobacterium aroidearum)WNH.在培养温度 27 ℃、转速160 r/min、接种量10%、初始pH 7.0的条件下培养 16 h后,果胶杆菌WNH的粗酶液果胶酶活力达 155.03 U/mL.按上述条件对汉麻韧皮进行二次脱胶处理,处理后脱胶率为 27.18%,较对照组提高了 6.93%.[结论]果胶杆菌 WNH具备汉麻生物脱胶的潜力.

目的 通过对海南医学院第二附属医院肺部感染患者脓肿拟分枝杆菌复合群(Mycobacteroides abscessus com-plex,MABC)进行菌种鉴定,探讨海南地区MABC肺部感染菌种类型、药物敏感性及人群分布情况.方法 收集2014-2021年期间就诊于海南医学院第二附属医院疑似肺结核患者的呼吸道标本并进行分枝杆菌分离培养,通过对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼(PNB/TCH)培养基与DNA微阵列芯片法初步鉴定出非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacte-ria,NTM)菌株,再采用hsp65及rpoB基因测序法鉴定MABC及其亚种,并采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验.结果 研究期间共收集3 025例疑似肺结核患者呼吸道标本,从123例患者呼吸道标本中分离培养鉴定出124株MABC菌株,包括脓肿拟分枝杆菌脓肿亚种(Mycobacteroides abscessus subsp.abscessus)74株,脓肿拟分枝杆菌马赛亚种(Myco-bacteroides abscessus subsp.massiliense)38株,脓肿拟分枝杆菌博莱亚种(Mycobacteroides abscessus subsp.bolletii)12株,其中118例患者为单一MABC亚种感染,1例为2种MABC亚种混合感染,2例为MABC与其他NTM混合感染,2例为MABC与结核分枝杆菌混合感染.患者女多于男,比例为1:0.64,50岁以上患者占76.42％(94/123,95％CI:67.93％～83.61％),不同性别患者年龄分布差异无统计学意义(Z=-0.944,P=0.347).药敏结果显示,所有MABC菌株对替加环素(tigecycline,TGC)敏感,对阿米卡星(amikacin,AK)耐药率为 0.81％(1/124),对头孢西丁(cefoxitin,FOX)、利奈唑胺(li-nezolid,LZD)和亚胺培南(imipenem,IPM)耐药率分别为为6.45％(8/124)、32.26％(40/124)、74.19％(92/124).对于克拉霉素(clarithromycin,CLR),MABC存在诱导耐药,且3个亚种之间的CLR(14 d)耐药率差异有统计学意义(x2=66.335,P＜0.001).对妥布霉素(tobramycin,TOB)、多西环素(doxycycline,DOX)、莫西沙星(moxifoxacin,MFX)、环丙沙星(cip-rofoxacin,CIP)、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(trimethoprim/sulfamethoxazole,TMP-SMX)及阿莫西林/克拉维酸(amoxicillin/cla-vulanic acid,AMC)的耐药率较高,均＞80％.结论 海南省MABC肺部感染主要以脓肿亚种为主,对CLR诱导耐药率较高,及时准确地将MABC鉴定到亚种并进行药敏试验,对临床决策具有重要意义.