目的:建立健儿颗粒剂、消炎止痒醑、百草洗剂3种医院制剂的微生物限度检查方法。方法:参照2015年版《中华人民共和国药典》四部通则，采用常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法、中和剂结合薄膜过滤法对3种医院制剂进行微生物计数检查方法的适用性试验。采用常规法、薄膜过滤法、中和剂结合薄膜过滤法对3种医院制剂进行控制菌检查方法的适用性试验。结果:健儿颗粒剂采用常规法进行微生物限度检查。消炎止痒醑采用薄膜过滤法进行微生物限度检查。百草洗剂采用中和剂结合薄膜过滤法进行微生物限度检查。结论:建立了3种医院制剂的微生物限度检查方法，方法准确可靠。

无菌检查法是无菌药品检查的法定检验方法,其中薄膜过滤法因易操作、风险低和准确度高等优点比直接接种法应用更广泛.无菌药品剂型种类繁多,其中抗生素类药品因品种结构多变、抑菌性强和抗菌谱广等因素,一直以来是建立无菌检查方法的难点.本文就薄膜过滤法中的溶解、过滤、冲洗和培养等4个关键步骤展开讨论,通过对已建立的13类47个品种共61个抗生素药品无菌检查方法的综述,探讨建立无菌检查方法的基本策略,并对无菌检查方法和结果的局限性进行讨论,以期为建立抗生素类无菌药品无菌检查方法及正确认识无菌检查结果提供思路和参考.

目的 建立针对2种注射用多西他赛胶束的无菌检查方法.方法 参照2015年版《中国药典》(四部)通则1105无菌检查法,取注射用多西他赛胶束15瓶,用500 mL 0.9%氯化钠溶液溶解,作为供试液,平均分配至3个滤筒过滤.同法制备6个滤筒.每个滤筒用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗3次,每次100 mL,然后加入相应培养基,并分别接种<100 CFU/mL的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌和黑曲霉,于适宜温度下观察培养.以等量无菌氯化钠溶液替代注射用多西他赛胶束供试液后采用相同的后续操作,作为对照组.采用薄膜过滤法,用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每个滤筒冲洗3次,每次100 mL,检测各菌株生长情况.结果 6种验证菌株均在48 h内生长良好,样品的抑菌活性被完全消除.结论 注射用多西他赛胶束可用上述方法进行无菌检查.

目的:研究医疗器械微生物检测中影响生物负载修正系数的不同因素,以提高医疗器械微生物检测结果的准确性.方法:依据国家标准《医疗器械的灭菌 微生物方法学 第1部分:产品上微生物总数的测定》(GB/T19973.1-2015),对一次性使用无菌注射器进行微生物检测,选择不同菌种接种位置、不同洗脱液采集技术和不同微生物计数方法进行试验,计算生物负载的修正系数.结果:基于一次性使用无菌注射器生物负载的修正系数数据分析,选取锥头内部、管内壁、橡胶活塞3个不同菌种接种部位平板微生物生长情况比较,差异有统计学意义(F=36.575,P＜0.05),回收率的修正系数分别为2.9、16.5和9.9;选取手工振摇20 s、机械振摇5和20 min(200 r/min)3种不同的微生物采集技术平板微生物生长情况比较,差异有统计学意义(F=119.460,P＜0.05),回收率的修正系数分别为14.1、7.1和1.9;选取涂布法、倾注法、薄膜过滤法3种不同的微生物计数方法平板微生物生长情况比较,差异无统计学意义(F=0.529,P＞0.05),回收率的修正系数分别为1.2、1.1和1.2.结论:在检测生物负载时,应选择多个部位同时染菌进行操作,并采用机械振摇的方式采集洗脱液,在医疗器械生物负载的检测中,染菌部位和微生物采集技术的选择是生物负载修正系数的重要因素.

目的 考察市售儿童化妆品的卫生质量状况,研究其控制菌检查方法的适用性.方法 按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)对市售常见的83批儿童化妆品进行微生物检查,通过参考《中国药典》(2020年版)控制菌检查方法对儿童化妆品的控制菌进行方法适用性试验,同时按不同剂型对其进行分类,并统计各剂型中防腐剂使用情况和占比问题,根据抑菌性样品添加的防腐剂成分类型统计防腐剂添加情况.结果 83批儿童化妆品经微生物检查合格率达100％;控制菌检查方法适用性试验表明,12批样品有不同程度的抑菌性,抑菌率为14.5％.样品需通过培养基稀释法或薄膜过滤法结合添加中和剂等方法消除抑菌性,其方法适用性试验才能通过,表明一些儿童化妆品自身的抑菌性较强.防腐剂统计结果可见,儿童化妆品中防腐剂苯氧乙醇的使用率最高,其次是苯甲酸钠和羟苯甲酯,且不同剂型的儿童化妆品对防腐剂添加的种类有相对的偏向选择适用性;抑菌性成分统计情况可见,氯苯甘醚和苯甲酸的抑菌性较强.结论 儿童化妆品在控制菌检查前建议进行方法适用性试验,在儿童防腐剂种类的选择上尽量选择安全有效且抑菌性较弱的防腐剂;本研究可为儿童化妆品生产企业提供参考.

目的 用克拉霉素酶解试验指导建立克拉霉素制品的微生物限度检查方法.方法 采用不同剂量单位的大环内酯酶酶解克拉霉素,高效液相色谱法(HPLC)测定克拉霉素含量以确定酶解时间与克拉霉素降解速度之间的关系,选择最小剂量单位和最佳酶解时间,用于克拉霉素片和克拉霉素颗粒的微生物限度检查.结果 大环内酯酶作用20 min后接近最大酶解效果,30 min后达到酶解平衡,克拉霉素含量不再显著变化.20 U和10U的大环内酯酶对0.02 mg·mL-1克拉霉素的酶解作用没有显著差异.需氧菌总数选择1∶100 供试液,采用薄膜过滤法,冲洗量 300 mL,并在最后一次冲洗液中加入约 10U的大环内酯酶作用 20 min,霉菌和酵母菌总数选择 1∶10 的供试液采用平皿法(倾注法).大肠埃希菌检查采用直接接种法,2 000 mL胰酪大豆胨液体培养基联合 20U大环内酯酶,可检出所加试验菌.结论 大环内酯酶酶解试验指导建立了克拉霉素制剂的微生物限度检查方法,提高了检验效率,开拓了大环内酯类抗生素微生物限度检查的新思路.

目的 建立管路类医疗器械无菌检测新方法,并筛选出更适用于输液器无菌检测的方法.方法 采用培养基冲洗法和培养基灌装法2种无菌检测新技术,与传统的薄膜过滤法比较,评价管路类医疗器械无菌检测新方法的适用性.结果 本研究采用的3种无菌检测技术中培养基灌装法检出率最高,可达100%,其次为培养基冲洗法.两种无菌检测新技术均优于传统的薄膜过滤法.结论 3种方法均适用于输液器产品的无菌检测,其中以培养基灌装法检出率最高,以培养基冲洗法作为输液器产品无菌检测的首选方法.

文章尝试对助滤剂微生物计数方法和控制菌大肠埃希菌检查法进行适用性试验,建立助滤剂微生物限度检测方法,对血液制品生产过程中添加的助滤剂进行微生物控制.具体通过采用涂布法、倾注法、薄膜过滤法、涂布(分解求和)法对珍珠岩和硅藻土进行微生物回收试验,计算各试验菌回收率;用控制菌检查法对控大肠埃希菌检查法进行确认.结果发现涂布法各试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值均在0.5～2.0范围内,微生物计数方法通过;控大肠埃希菌检查法通过.

目的 建立符合《中国药典》2015年版要求的氧化锌滑石粉洗剂的微生物限度检查方法.方法 采用离心沉淀联合薄膜过滤法进行样品前处理,对10批次的氧化锌滑石粉洗剂进行微生物计数检查和控制菌检查.计数检查:需氧菌总数使用TSA培养基检查,菌种为:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉;霉菌和酵母菌总数使用SDA培养基检查,菌种为白色念珠菌和黑曲霉,每种菌株分别制备加菌试验组和菌液对照组,每种培养基分别制备供试品对照组和阴性对照组,进行菌落计数,计算回收率.控制菌检查:应用铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌,设置菌液验证组、供试品对照组和阴性对照组,取各组培养物于相应培养基平板上划线,Microflex LT质谱仪进行菌种鉴定.结果 10批次微生物计数检查的5种菌株的回收率均在0.75～1.16;控制菌检查的菌液验证组均可检出铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌,供试品对照组和阴性对照组均未见茵生长,适用性验证合格.结论 氧化锌滑石粉洗剂的微生物限度检查方法经验证符合《中国药典》2015年版要求.

目的 研究不同用量卵磷脂中和剂和PB缓冲液,在双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)无菌检查中的应用.方法 取双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)转移至卵磷脂中和剂中(摇匀后放置5 min),按薄膜过滤法过滤后,用0.15 mol/LPB缓冲液(30 ～ 35 ℃保温)冲洗滤膜,加入液体培养基培养,进行不同用量卵磷脂中和剂和PB缓冲液适用性试验.用选定的试验条件进行无菌检查方法的适用性试验(薄膜过滤法)及阳性对照验证试验.结果 采用10 ml卵磷脂中和剂中和10瓶供试品(摇匀后放置5 min),用0.15mol/L PB缓冲液(30 ～ 35℃保温)冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100 ml,共冲洗2次(末次冲洗液中含小于100cfu的菌液),该方法过滤速度快,卵磷脂冲洗完全,无残留、不影响结果判定,确定适用.无菌检查方法的适用性试验中,供试品各滤筒中的试验菌与阳性对照比较均生长良好,达到《中国药典》三部(2015版)要求,应用于双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)的无菌检查中无抑菌作用或其抑菌作用可忽略不计.以金黄葡萄球菌和黑曲霉作为阳性对照菌,0和17d培养到期后加入阳性菌,对比试验显示试验菌均生长良好.结论 该方法适用于双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)无菌检查.