目的 监测中国华东地区临床分离念珠菌的耐药性,为临床诊断和治疗提供参考.方法 以质谱或分子的方法对2018年1月—2022年12月收集的菌株进行复核鉴定,采用肉汤微量稀释法进行10种抗真菌药物的药敏试验.依据2022年美国临床和实验室标准化协会(CLSI)M27 M44s-Ed3和M57s-Ed4对药敏试验结果进行判读.结果 共收集念珠菌3 026株,无菌部位分离菌株占65.33％,主要标本类型为血液38.86％和胸腹水10.21％.白念珠菌占比(44.51％)最高、其次为近平滑念珠菌复合群19.46％、热带念珠菌13.98％、光滑念珠菌10.34％和其他念珠菌0.79％.对测试的10种抗真菌药物:白念珠菌较为敏感,敏感率最低为93.62％,2.97％的菌株对氟康唑剂量依赖性敏感(SDD);近平滑念珠菌对氟康唑SDD为2.61％,耐药率为9.42％,对其他药物的敏感率均大于90％;光滑念珠菌对氟康唑SDD为92.01％,耐药率为7.99％,泊沙康唑、伏立康唑非野生型菌株(NWT)分别为32.27％、48.24％,其他药物的敏感率均大于90％;热带念珠菌对氟康唑、伏立康唑耐药率分别为29.55％、26.24％,对泊沙康唑、伊曲康唑NWT分别为76.60％、21.99％,对棘白菌素类药物耐药率为2.36％.结论 华东地区念珠菌的分离率和菌种分布与国内外报道基本一致,近平滑念珠菌复合群对氟康唑有一定的耐药性,热带念珠菌对三唑类药物有较高的耐药性,光滑念珠菌对氟康唑非敏感率较高.白念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌均出现了对棘白菌素类耐药菌株.

目的 了解临床分离的纹带棒状杆菌对抗菌药物的敏感性及其感染或定植患者的临床特征.方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院2020年7月—2022年9月临床分离纹带棒状杆菌72株,采用肉汤微量稀释法检测细菌对18种抗菌药物的敏感性.PCR扩增检测喹诺酮类耐药决定区相关基因gyrA并进行测序以分析氨基酸突变位点,PCR扩增核糖体甲基化酶基因ermX和氨基糖苷修饰酶基因aphA1并进行测序分析.病史资料分析纹带棒状杆菌感染或定植患者的临床特征.结果 药敏试验结果显示,所有菌株对万古霉素、利奈唑胺和达托霉素均100％敏感,对头孢曲松、环丙沙星及莫西沙星均100％耐药,对青霉素(87.5％)、头孢吡肟(95.8％)、美罗培南(95.8％)、甲氧苄啶-磺胺甲唑(90.3％)、红霉素(98.6％)和克林霉素(98.6％)的耐药率较高,对庆大霉素(25.0％)、四环素(30.6％)和利福平(23.6％)耐药率较低.PCR及DNA测序结果显示,3株纹带棒状杆菌发生gyrA基因单点突变(Ser87Val),67株发生双突变(Ser87Phe、Asp91Ala或Ser87Tyr、Asp91Ala),2株发生三位点突变(Ser87Phe、Ala88Pro和Asp91Ala),其中三位点突变是本研究首次发现的突变模式.所有的纹带棒状杆菌均检出ermX基因,aphA1基因检出率为43.1％.病史资料结果显示,72株纹带棒状杆菌主要分离自ICU(占65.2％),标本来源以下呼吸道标本为主(占91.6％),患者平均年龄(68.0±15.3)岁,感染和定植患者比例分别占72.2％(52/72)和27.8％(20/72),两组患者在住院时长≥28 d、合并脑出血、意识障碍及病情恶化方面差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 该院临床分离的纹带棒状杆菌均为多重耐药菌,感染患者预后相对较差.

目的:探讨组氨酸激酶AgrC在亚抑菌浓度环丙沙星促进金黄色葡萄球菌生物膜形成中的作用机制，为金黄色葡萄球菌生物膜相关感染的治疗提供新的思路。方法:于2021年中南大学湘雅三医院检验科收集皮肤组织和体液标本，采用微量肉汤稀释法测定环丙沙星对实验菌株的最低抑菌浓度；采用结晶紫染色法观察不同亚抑菌浓度环丙沙星处理金黄色葡萄球菌后的生物膜形成情况；利用SYTO9和PI荧光染料分析亚抑菌浓度环丙沙星对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响；通过逆转录荧光定量PCR检测亚抑菌浓度环丙沙星对金黄色葡萄球菌 agrC基因及其调控基因 agrA、 icaA和 icaR的表达水平的影响；最后，通过等温滴定量热法验证亚抑菌浓度环丙沙星与AgrC蛋白受体的结合作用；数据采用 xˉ±s表示，服从正态分布和方差齐性则采用方差分析，否则采用非参数检验，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:药敏试验结果显示环丙沙星对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.25~0.5 mg/L。亚抑菌浓度的环丙沙星可促进金黄色葡萄球菌生物膜的形成，在1/4倍最低抑菌浓度即可开始出现显著作用［ATCC 43 300（ t=7.42， P=0.002）、临床菌株SA1（ t=5.42， P=0.005）、SA2（ t=6.38， P=0.002）、SA3（ t=4.8， P=0.009）、SA4（ t=7.06， P=0.002）和SA5（ t=4.36， P=0.004）］。激光共聚焦显微镜观察发现亚抑菌浓度的环丙沙星可明显促进金黄色葡萄球菌生物膜的形成，增加生物膜的形成量并使生物膜显著聚集成三维立体结构。逆转录荧光定量PCR结果显示，亚抑菌浓度的环丙沙星对 agrC基因表达水平无显著影响，但使agr A（ t=4.42， P=0.003）和 icaR（ t=4.49， P=0.007）表达水平下降［（0.61±0.24）和（0.56±0.12）］， icaA表达水平升高［1.51±0.19（ t=5.24， P=0.009）］，差异有统计学意义。等温滴定量热法分析发现，环丙沙星与AgrC蛋白受体具有较好的结合力。 结论:亚抑菌浓度环丙沙星可能通过结合AgrC蛋白受体，影响下游a grA、 icaA和 icaR基因表达水平，从而促进生物膜形成，增加金黄色葡萄球菌的抗菌药物耐药性。

目的:分析我国即食食品中单核细胞增生李斯特菌的分子流行病学特征。方法:将2017年食品安全风险监测即食食品中分离的单核细胞增生李斯特菌作为研究菌株，共239株，分离自27个省份。对菌株进行全基因组测序，分析其谱系、克隆群（CC）、序列分型（ST）和血清群；通过VFDB和BIGSdb-Lm数据库获得其毒力基因分布；采用微量肉汤稀释法检测菌株对8种抗生素的敏感性；采用核心基因组多位点序列分型方法（cgMLST）进行分子分型。结果:实验菌株分属在3个谱系，以谱系Ⅱ为主，共155株（64.9%）；血清群以Ⅱa为主，共133株（55.6%）；分为23个CC型，以及1个未分CC型的ST619，其中CC8、CC101和CC87为优势CC型，共占49.4%（118株）；仅4.6%（11株）的菌株携带耐药基因，主要为甲氧苄啶耐药基因（7株，2.9%）。所有菌株均携带单核细胞增生李斯特菌毒力岛（LIPI）1，携带LIPI-3和LIPI-4的菌株分别占13.8%（33株）和14.2%（34株），ST619同时携带LIPI-3和LIPI-4。51.5%（123株）的菌株携带应激生存岛（SSI）1，10株CC121菌株均携带SSI-2。核心基因组多位点序列分型方法能将不同谱系、血清群和CC型的菌株明显分开，共分为24个亚群，与CC型基本保持一致。结论:我国即食食品中菌株以Ⅱa型血清群为主，CC8、CC101和CC87为优势CC型，其中，CC87为流行性高毒菌株。基于全基因组测序的分型方法cgMLST分辨力高，可用于我国食源性疾病的监测和暴发识别。

目的:对临床分离的致关节感染的两株皮疽诺卡菌（ Nocardia farcinica）进行全基因组测序并分析其耐药性。 方法:2020年1月收集两株导致老年患者膝关节感染的皮疽诺卡菌菌株，采用全基因组测序对细菌进行鉴定，根据CLSI M24推荐的微量肉汤稀释法和E-test法进行药物敏感性分析，通过ABRicate工具比对获得性耐药和毒力基因，Snippy等生物信息学工具进行同源性等基因特征分析。结果:本研究的临床分离株均为皮疽诺卡菌，对头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑（TMP/SMX）耐药，对亚胺培南、利奈唑胺和含有酶抑制剂类抗生素阿莫西林/克拉维酸敏感。携带A类β内酰胺酶基因 far-1、RNA聚合酶结合蛋白基因 RbpA、多耐药外排泵转录激活因子基因 MtrA和调节转录因子基因 vanR-O，分别介导对β内酰胺抗生素、利福平、大环内酯类药物和万古霉素的耐药性。不含有获得性TMP/SMX耐药基因，二氢叶酸还原酶家族基因存在多个错义突变，均携带与结核分枝杆菌同源的 icl、 mbtH、 phoP、 relA毒力基因，SNP同源分析表明两株皮疽诺卡菌具有很近的亲缘关系，两株菌仅存在10个SNP位点、6个复合基因和1段基因缺失变异。 结论:全基因测序技术有助于研究诺卡菌的分子特征和耐药机制；皮疽诺卡菌对TMP/SMX耐药现象需要重视，参与二氢叶酸代谢途径的酶基因突变有可能是TMP/SMX耐药的原因之一。

目的:分析北京批发市场肉类食品中沙门菌的表型和基因组特征。方法:对分离自北京市批发市场的336株肉类食品来源沙门菌，采用微量肉汤稀释法对25种抗菌药物进行耐药性测试，开展全基因组测序并使用SeqSero2、SISTR软件分析血清型和ST型，使用Abricate软件的CARD、VFDB模块预测菌株的耐药基因和毒力因子，使用沙门菌分子血清分型试剂盒和血清凝集法验证部分疑难菌株血清型。结果:336株沙门菌菌株对萘啶酸、氨苄西林的耐药率分别为62.5%（210/336）和55.1%（185/336），对替加环素、头孢西丁和碳青霉烯类抗菌药物均敏感；207株（61.6%，207/336）为多重耐药株，最高可同时耐受10类药物，最常见耐药谱为NAL-AMP-SAM。共检出24种血清型，主要型别为肠炎（34.5%，116/336）、德尔卑（17.3%，58/336）和印第安纳（10.4%，35/336）；共检出27种ST型，主要型别为ST11，ST型与血清型较为相符。氨基糖苷类、氟喹诺酮类、β-内酰胺类、磺胺类、四环素类耐药基因的携带率均超过48%，耐药基因预测与耐药表型结果一致性较高；共预测出122种毒力基因，其中74种携带率达100%。结论:北京市批发市场肉类食品中沙门菌中多重耐药比例较高、耐药谱复杂，血清型和ST型种类多样，耐药基因和毒力基因携带率较高，耐药表型和基因型较为一致。

目的:了解泰安市感染性腹泻病门诊病例粪便中肺炎克雷伯菌的检出率、耐药特征及分子分型特性。方法:对采自泰安市6个县（市、区）2013-2017年腹泻病症候群监测病例的866份粪便标本进行肺炎克雷伯菌的分离培养和鉴定；采用微量肉汤稀释法研究分离菌株的耐药情况；应用PFGE技术对菌株进行分子分型。结果:肺炎克雷伯菌的总检出率为7.97 %（69/866）；各县（市、区）检出率差异有统计学意义（ χ2=39.627， P=0.000）。耐药菌株68株的15种常用抗生素的总耐药率为98.55 %（68/69），对氨苄西林（AMP）和磺胺异恶唑（SOX）的耐药率最高，分别为84.06 %（58/69）和72.46 %（50/69），共有40个耐药谱，主要耐药谱特征为AMP-SOX（ n=10）；多重耐药率为33.33 %（23/69）。69株分离株中共有65种PFGE型别，未发现优势带型或聚集现象。 结论:肺炎克雷伯菌存在于泰安市各地区腹泻病症候群门诊病例的粪便中，能够引起社区获得性感染；对多种抗生素耐药，耐药谱广，多重耐药率高；PFGE带型呈现多样性，无耐药谱对应性。应高度重视和加强对该来源菌株的监测，防止更多的耐药菌株的产生和传播，保护易感人群。

目的:监测2018年中国院内革兰阴性杆菌对常用抗菌药物的敏感性。方法:前瞻性收集2018年1至12月全国13家教学医院革兰阴性杆菌。采用琼脂稀释法及微量肉汤稀释法测定美罗培南等抗菌药物的最低抑菌浓度（MICs）。采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）2019年M100S（第29版）标准进行药敏结果判断。数据分析采用WHONET-5.6软件。结果:共收集1 214株非重复革兰阴性杆菌，血和无菌体液标本来源占96.7%（1 174/1 214）。主要抗菌药物对871株肠杆菌科细菌的敏感率依次为阿米卡星（93.2%，812/871）、美罗培南（92.0%，801/871）、厄他培南（88.9%，774/871）、亚胺培南（88.4%，770/871）、哌拉西林/他唑巴坦（84.0%，732/871）、头孢哌酮/舒巴坦（83.1%，724/871）、头孢吡肟（71.4%，622/871）、米诺环素（68.9%，600/871）、头孢他啶（66.9%，583/871）及左氧氟沙星（54.4%，474/871）。大肠埃希菌对三代头孢菌素的耐药率分别为61.5%（155/252）（头孢曲松）和60.7%（153/252）（头孢噻肟）。肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素的耐药率分别为56.3%（125/222）（头孢曲松）和57.7%（128/222）（头孢噻肟）。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶（ESBLs）检测阳性率分别为50.4%（127/252）和18.0%（40/222），且全部ESBLs阳性菌株对亚胺培南和美罗培南的敏感率均>95%。碳青霉烯耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的发生率分别为2.8%（7/252）和20.3%（45/222）。对阴沟肠杆菌、产气克雷伯菌和弗劳地柠檬酸杆菌，抗菌活性最高的药物依次为替加环素（96.3%~100%）、阿米卡星（94.9%~97.1%）、美罗培南（89.8%~96.6%）及亚胺培南（89.8%~94.9%）。奇异变形杆菌、摩根摩根菌和黏质沙雷菌对美罗培南、阿米卡星的敏感率均大于90%。对67株碳青霉烯耐药的肠杆菌科细菌（CRE）进行改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）显示，45株为丝氨酸型碳青霉烯酶，20株为金属酶。铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南的敏感率分别为73.2%（112/153）和66.0%（101/153）。鲍曼不动杆菌对黏菌素的敏感率最高（100%，163/163），其次是替加环素（87.1%，142/163）。血标本与其他感染来源的标本相比较，肺炎克雷伯菌[17.6%（27/153）比21.7%（15/69）]和鲍曼不动杆菌[68.3%（71/104）比71.2%（42/59）]碳青霉烯耐药比例低，而大肠埃希菌[2.5%（4/198）比0%（0/54）]和铜绿假单胞菌[37.0%（33/89）比18.8%（12/64）]碳青霉烯耐药比例高。结论:碳青霉烯类对肠杆菌科细菌仍保持较高的抗菌活性，尤其是仅产ESBLs的菌株。碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌应引起足够重视。产碳青霉烯酶是当前我国碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌最重要的耐药机制。

目的:探讨我国华东地区2017—2021年临床分离侵袭性感染热带念珠菌的标本来源分布及耐药特征。方法:采用回顾性分析。华东地区侵袭性真菌感染协作组（East China Invasive Fungal Infection Group，ECIFIG）收集2017年1月至2021年12月间我国华东地区32家医院临床分离的热带念珠菌，由上海市东方医院南院检验科真菌实验室作为中心实验室，以质谱法复核菌株鉴定结果，采用ThermoFisher CMC1JHY比色微量稀释法检测菌株对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、艾沙康唑、阿尼芬净、卡泊芬净、米卡芬净和5-氟胞嘧啶的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentrations，MIC），微量肉汤稀释法检测菌株对两性霉素B的MIC，按美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）M27M44s-Ed3和M57s-Ed4判定结果。采用Kruskal-Wallis 检验法和配对 t检验进行数据分析。 结果:共收集到热带念珠菌305株，主要标本来源为血38.0%（116/305）、腹水11.5%（35/305）、导管8.9%（27/305）和引流液8.9%（27/305）。其对氟康唑耐药率为32.5%，对伏立康唑耐药率为28.5%，对氟康唑和伏立康唑交叉耐药率为28.5%；伊曲康唑和泊沙康唑野生型占比分别为79.3%和29.2%。氟康唑与伏立康唑耐药率、MIC 50、MIC 90、伊曲康唑和泊沙康唑野生型占比等五年间无显著变化。95.0%以上菌株对棘白菌素类药物敏感，但发现1株棘白菌素耐药的多重耐药热带念珠菌。唑类药物中，伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑和艾沙康唑GM MIC相似，氟康唑GM MIC显著高于伊曲康唑（ t=9.95， P<0.05）、泊沙康唑（ t=9.99， P<0.05）和伏立康唑（ t=10.01， P<0.05），而棘白菌素类药物中，阿尼芬净的GM MIC与卡泊芬净相当（ t=1.17， P>0.05），均显著高于米卡芬净（ t=11.56， P<0.05， t=4.15， P<0.05）。 结论:2017—2021年华东地区临床分离热带念珠菌对棘白菌素类药物较为敏感，对氟康唑和伏立康唑持续呈高耐药水平，应加强对热带念珠菌的耐药性监测。

目的:基于 ompK36基因GD突变，建立一种快速检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌（KPC-Kp）亚胺培南最低抑菌浓度（MIC）的方法。 方法:方法学建立。收集丽水市中心医院2011年3月至2019年12月的非重复肺炎克雷伯菌258株，PCR扩增膜孔蛋白o mpK36基因以及碳青霉烯酶基因 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP、 blaOXA-48并测序确认，微量肉汤稀释法检测菌株亚胺培南MIC值，建立基因型与MIC值的对应模式。基于该模式，设计建立实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）快速检测MIC值的方法。利用丽水市疾控中心2017—2019年收集的159株非重复肺炎克雷伯菌进一步验证。四格表计算敏感度、特异度， Kappa检验比较RT-PCR法与肉汤稀释法结果的一致性。 结果:258株肺炎克雷伯菌中，109株未携带碳青霉烯酶基因，65株携带 ompK36基因GD突变，127株携带 blaKPC，15株携带 blaNDM，9株携带 blaIMP，未检测到 blaOXA-48。以肉汤稀释法为标准，肺炎克雷伯菌耐药基因与亚胺培南MIC值存在3种对应模式：4种碳青霉烯酶基因均阴性时，MIC≤1 mg/L，敏感度为100%（107/107），特异度为98.4%（125/127）； blaKPC阳性而 ompK36基因GD突变阴性时，4 mg/L≤MIC≤16 mg/L，敏感度为88.2%（60/68），特异度为98.8%（164/166）； blaKPC和 ompK36基因GD突变双阳性时，MIC≥32 mg/L，敏感度为96.6%（57/59），特异度为96.6%（169/175）。RT-PCR法可准确检测 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP、 blaOXA-48基因；在产酶菌株中o mpK36基因GD突变的RT-PCR结果与测序法100%一致。以丽水市疾控中心来源的159株肺炎克雷伯菌为样本，以肉汤稀释法为参照，RT-PCR检测亚胺培南MIC值在3种模式下敏感度和特异度均大于95%， Kappa值为0.971。 结论:基于 ompK36基因GD突变建立的RT-PCR法有助于快速判断KPC-Kp的亚胺培南MIC值范围。