目的:建立一种可单管同时检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法。方法:收集2020年2月至2022年2月广州白云机场海关入境人员新型冠状病毒核酸阳性样本30份和336份排查样本，以及2020年发生新型冠状病毒肺炎疫情前3年期间同样来自广州白云机场海关入境人员的其他呼吸道病原体阳性样本64份和呼吸疾病国家重点实验室提供的呼吸道病原体阳性毒株7份。选取新型冠状病毒 ORF和N基因，以及甲、乙型流感病毒M基因的核苷酸保守区域，设计和筛选出多重巢式荧光PCR引物和探针组合，同时引入人源基因内标的巢式扩增引物和探针，建立一套多重巢式荧光RT-PCR检测方法，应用制备的假病毒阳性质控品和样本盘，评估方法的敏感度、特异度，并进行临床样本应用性验证。结果:所建立的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法可特异性检出新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒，新型冠状病毒的最低检出限约为125拷贝/ml，甲、乙型流感病毒的最低检出限约为250拷贝/ml；检测101份各类呼吸道病原体阳性样本，显示新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的检测敏感度分别为96.67%、92.86%和96.15%，三者的特异度均为100%，超过300份临床样本的应用性检测中，未见假阳性检出。结论:建立了一套新型冠状病毒、甲、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法，该方法具有良好的灵敏度和特异性，可用于新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的大批量样本快速筛查。

目的:了解2011—2020年成都地区5岁以下儿童病毒性腹泻病原谱，为病毒性腹泻防控提供依据。方法:采集成都地区2011—2020年感染性腹泻患儿粪便样本2 520份，用ELISA、逆转录巢式多重PCR、RT-PCR和PCR方法对轮状病毒、诺如病毒、札如病毒、人星状病毒和肠道腺病毒进行检测，采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果:2 520份样本中检出病毒性腹泻阳性样本1 213份，阳性率为48.13%。其中男性患儿阳性检出率为49.64%（779/1 569），女性患儿阳性检出率为45.64%（434/951），男女性别间阳性率差异无统计学意义。病毒性腹泻检出率呈现随着年龄先增加后下降的趋势，其中12~17月组检出率最高为63.12%（380/602）。轮状病毒在秋冬季高发，诺如病毒在秋季高发，肠道腺病毒在5月和10—12月分别出现了两个感染高峰。存在单一病原感染和混合感染，混合感染率为6.79%（171/2 520）；诺如病毒和轮状病毒的检出率位居前2位，其中诺如病毒检出率高于轮状病毒。诺如病毒以GⅡ型为优势株；轮状病毒自2012年起以G9P[8]为流行株。结论:2011—2020年成都地区哨点医院5岁以下儿童病毒性腹泻的主要病原体为诺如病毒和轮状病毒。

探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型（HPIV-3）的感染情况，并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）基因特征。本研究为横断面研究，青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019 年12月期间，每月随机采集急性呼吸道感染（ARTI）儿科患者的咽拭子样本，总共1 674份，采用多重实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，筛查HPIV-3阳性样本。采用巢式PCR方法扩增HPIV-3阳性样本HN全长基因并进行序列测定，序列结果与GenBank中HPIV-3的代表株进行对比分析，建立系统进化树。结果显示，1 674份咽拭子样本中，HPIV-3阳性有90份，检出率为5.37%，其中，6岁以下儿童占97.78%（88份）。HPIV-3阳性病例主要分布在春季和夏季。通过巢式PCR方法扩增得到44株HPIV-3 HN基因全长序列，序列比对及进化分析表明，HPIV-3 HN基因属于C3基因亚型的C3a和C3b分支，其中，C3a亚型有30株，C3b亚型有14株。44株青岛分离株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.0%~100.0%和98.5%~100.0%。综上，2018至2019年间，HPIV-3 C3基因型的C3a和C3b分支在山东省青岛市地区循环流行，其HN基因型变异较小，进化上具有一定的地域特征。

目的:分析北京市西城区2015—2022年5岁以下腹泻患儿A组轮状病毒（group A rotavirus，RVA）病原学及临床特征，为RVA腹泻的临床诊断、疫苗研发和防控提供科学依据。方法:2015年1月—2022年12月，按月收集北京市西城区两家哨点医院就诊的5岁以下腹泻患儿粪便标本，采用实时荧光PCR法进行RVA检测，采用多重半巢式RT-PCR进行基因分型，使用SPSS 19.0软件对流行病学及临床数据进行统计学分析,率的比较采用卡方检验，使用二分类非条件logistic回归分析临床特征差异。结果:共收集粪便标本1 617件，总阳性率13.48%（218/1 617）。每年12月到次年2月为RVA流行高峰，3—5月为次高峰。12~23月龄年龄组阳性率最高（20.44%，84/411）。170件RVA阳性标本进行了G、P基因分型，G分型以G9为主（84.12%，143/170），P分型以P[8]型为主（93.53%，159/170），G/P组合基因型以G9P[8]和G8P[8]为主，2015—2021年G9P[8]为优势基因型，2022年G8P[8]取代G9P[8]成为优势基因型。与每日最高腹泻次数<5次的患儿相比，每日最高腹泻次数≥5次的患儿RVA阳性的风险为1.481（95% CI：1.113~1.972）倍。与未出现水样便的患儿相比，出现水样便的患儿RVA阳性的可能性为3.971（95% CI：2.958~5.331）倍。 结论:RVA具有明显季节性，冬春季高发，12~23月龄为主要感染年龄组，自2022年G8P[8]取代G9P[8]成为优势基因型。出现水样便及每日最高腹泻次数≥5次的患儿RVA感染风险更高。

目的:分析2011—2018年北京市儿童A组轮状病毒(group A rotavirus，RVA)腹泻的临床特征，为RVA腹泻的临床诊断及防控提供依据。方法:2011年1月至2018年12月，在北京市3家医院按月采集5岁以下腹泻患儿粪便标本，收集患儿的一般情况、临床特征等信息。使用酶联免疫吸附试验检测RVA，采用多重半巢式RT-PCR进行基因分型。使用Vesikari临床严重程度评分系统定义腹泻儿童的严重性。使用二分类非条件logistic回归分析RVA阳性病例与阴性病例的临床症状等差异，卡方和Fisher概率法比较不同组别的构成差异。结果:共收集粪便样本4 819份，其中RVA阳性为953份，阳性率为19.78%。低年龄组RVA阳性率高，冬春季为高发季节。RVA阳性的患儿一天最多腹泻次数≥5次、合并呕吐症状、合并发热、轻度脱水，以及Vesikari评分≥11分的风险均大于1。RVA在水样便和感染性腹泻的病例中阳性率最高，分别为26.13%(214/819)和42.20%(265/628)。不同RVA基因型患儿的各项临床症状、临床诊断以及粪便性状比较，差异均无统计学意义。结论:RVA阳性患儿临床症状较重。RVA基因型不影响患儿临床症状。粪便性状(水样便)和Vesikari评分可辅助医生诊断轮状病毒腹泻。

患者，男，51岁，以间断发热10余天，齿龈出血1 d为主诉于2019年9月3日入院。血常规：WBC 3.20×10 9/L，RBC 1.43×10 12/L，HGB 45 g/L，PLT 11×10 9/L。骨髓象：增生尚活跃。粒系异常增生占59.5%，异常早幼粒细胞占58.0%，POX染色：强阳性。红系增生受抑，仅见6.0%，以中晚红细胞为主，形态大致正常。成熟红细胞部分呈缗钱状排列。淋巴细胞占9.5%，形态大致正常。浆细胞占25.0%，均为原始幼稚浆细胞，可见双核浆细胞。巨核细胞缺如，血小板单个散在少见。骨髓活检：HE及PAS染色示送检骨髓增生极度活跃（>90%），异常细胞弥漫增生，部分细胞胞体大，胞质量中等至丰富，胞核不规则，核染色质细致；部分细胞胞体大，胞质丰富，核偏位，部分可见核仁，少量偏成熟阶段粒红细胞散在分布，巨核细胞偏少，分叶核为主；纤维组织增生。网状纤维染色MF-2级。免疫分型：髓系约占66.0%，主要表达CD9、CD13、CD15、CD33、CD38、CD58、CD64、CD117、CD123、MPO。CD45阴性且SSC较淋巴细胞稍大的分布区域可见异常细胞群，表达CD38、CD56、CD117、cKappa，考虑为异常浆细胞。多重巢式RT-PCR检测PML-RARα（bcr1）融合基因阳性，余AML相关基因阴性，荧光原位杂交（FISH）发现t（15;17），AML常见基因突变筛查低水平FLT3/ITD突变，染色体核型筛查结果示46，XY[6]。符合APL[PML-RARα （Bcr1），中危，FLT3-ITD （+）]。

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是一种由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的急性、高度传染性疾病,主要感染山羊和绵羊,发病率和死亡率极高.由于其严重的病理损害及广泛的传播性,给各国养殖业及国际贸易造成巨大经济损失,因此,建立快速、准确的检测方法对该病的防控尤为重要.本文就用于 PPRV检测的普通 RT-PCR、普通多重 PCR、实时荧光定量PCR(real-time fluorence quantitative PCR,RT-qPCR)、焦磷酸光化测序、巢式PCR(nested PCR,nPCR)、环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)等生物检测技术的研究进展作一综述,以期为科学检测、鉴定PPRV提供依据和思路.

目的:探讨急性白血病(acute luekemia,AL)相关融合基因与基因突变在临床诊断、指导治疗、判断预后中的意义.方法:采用多重巢式RT-PCR与基因测序技术检测65例AL患者相关融合基因及基因突变,同时结合患者免疫分型、染色体核型及治疗经过,分析患者的预后生存.结果:65例AL中15例急性淋巴细胞白血病(23.1％),50例急性髓系白血病(76.9％).融合基因阳性率为50.8％,基因突变率为27.7％.其中5例患者BCR-ABL1融合基因阳性(7.7％),6例PML/RARA融合基因阳性(9.2％),11例FLT3-ITD基因突变(16.9％),7例AML1-ETO融合基因阳性(10.8％),7例EVI1融合基因阳性(10.8％),7例NPM1突变(10.8％),3例CEBPA基因突变(4.6％),3例C-kit/D 816V基因突变(4.6％),4例HOX11融合基因阳性(6.2％),10例患者合并两种以上融合基因或突变.65例AL患者3年总生存期(OS)生存率为20％,3年无疾病进展生存期(PFS)为18％.融合基因或突变阳性患者3年OS与融合基因或突变阴性患者3年OS(P =0.052)、PFS(P=0.269)差异无统计学意义.单纯AML1-ETO或CEBPA双突变AL预后较好,缓解率高,长期生存率高.伴PML/RARA的7例患者,无论是否合并FLT3-ITD等基因突变,均达完全缓解,且3年内无复发.结论:多重PCR及基因测序技术能够快速检测AL相关基因,在AL的诊断、预后及疗效判断中起重要作用,并能进一步监测微小残留病,指导临床个体化治疗.

目的 分析儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的分子遗传学改变与临床特征的关系.方法 收集并分析初诊ALL患儿的临床及实验室资料,所有患儿均完善骨髓细胞学、免疫分型、染色体核型分析并利用多重巢式RT-PCR检测29种白血病基因,检测为阳性者采用split-out RT-PCR验证.结果 纳入255例ALL,其中男性153例,女性102例,平均年龄(63.07±2.67)月.共104例检出白血病基因(阳性率40.78％),包括ETV6/RUNX1基因42例、E2A/PBX1基因17例、BCR/ABL基因15例、MLL基因16例、SIL/TAL1基因5例、HOX 11基因6例、EVI1基因4例、FL T3/ITD基因1例及SET/CAN基因1例.T-ALL基因检出率低于B-ALL(32.26％ vs.41.96％,P＜0.05);ETV6/RUNX1、BCR/ABL基因C-B-ALL多见,E2A/PBX1和MLL基因分别多见于pre-B-ALL和pro-B-ALL.B-ALL中,BCR/ABL基因阳性患儿白细胞计数最高(P＜0.05);白血病融合基因在各个年龄组中的阳性率不同:＜1岁组MLL基因阳性率(62.50％)最高(P＜0.05);1～10岁组ETV6/RUNX1基因阳性率(21.13％)最高(P＜0.05);＞10岁组BCR/ABL基因阳性率(22.73％)最高(P＜0.05);＞10岁组E2A/PBX1基因阳性率(18.18％)最高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 T-ALL基因检出率较低,提示T-ALL可能需要其它方法进行分子遗传学分型.B-ALL不同年龄组分子遗传学改变存在差异,可能是不同年龄儿童B-ALL化疗效果存在差异的原因之一.

目的 了解丰台医院就诊的5岁以下轮状病毒腹泻患儿的流行病学和临床特点,为病毒性腹泻的防治提供科学依据.方法 采集2016年7月至2017年6月丰台医院儿科门诊368份腹泻患儿粪便标本,用胶体金法进行临床诊断检测,部分阳性标本用半巢式多重RT-PCR进行G/P基因分型.结果 368份腹泻患儿的粪便标本中,轮状病毒抗原阳性共153份,检出率为41.6％,2岁以下患儿占96.1％(147/153).轮状病毒感染高发季节为9月至12月,检出率为71.2％(109/153).选择68份阳性标本基因分型,其中41份为G9P[8],15份为G3P[8],2份为G9P[N]型未分型,10份未获得型别.选择3株G9P[8]和l株G3P[8]型轮状病毒进行VP7和VP4基因测序,序列分析确认分型正确.结论 轮状病毒是丰台医院就诊患儿腹泻的重要病原体,主要感染2岁以下患儿,G9P[8]型为优势流行株.