流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染性疾病，常常引起暴发流行，是影响公共健康的主要危险因素之一。目前主要的治疗药物是神经氨酸酶抑制剂，如奥司他韦、扎那米韦等。然而，近年来耐药毒株不断增加，迫切需要开发新的抗流感药物。病毒融合蛋白血凝素是其中最主要的研究靶点之一。本文讨论并总结了最新的针对流感病毒血凝素靶点的抗流感药物，包括单克隆抗体、小分子抑制剂、蛋白质和肽。今后基于血凝素的疗法可能会成为预防和治疗流感的手段之一。

目的:研究2022—2024年盐城市分离的甲型H3N2流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)分子进化特征。方法:收集盐城市2022年4月至2024年3月间的流感哨点监测医院以及各县市区流感暴发点采集的流感样病例标本，Rt-qPCR进行核酸检测，阳性样本进行病毒分离。分离的甲型H3N2毒株，采用一步RT-PCR方法扩增HA1和NA基因并测序，采用相关生物信息学软件分析基因核苷酸、氨基酸位点变异及进化特征。结果:2022年4月至2024年3月间共采集5 020份样本，流感病毒核酸阳性检出率为18.59%(933/5 020)。2022年4月至2024年3月两个监测季冬春季流感峰明显，其中，仅2022年4月—2023年3月监测季夏季流感峰明显，甲型H3N2亚型流感病毒是两个监测季的优势流行株。遗传进化树显示：2022—2024年盐城市32株甲型H3N2毒株HA1和NA基因在各分支的聚类关系基本一致，2023—2024年24株分离株的HA1基因和NA基因与2022—2024年北半球疫苗株A/Darwin/9/2021(H3N2)聚类位于3C.2a1b.2a.2a.3a.1进化谱系；2022年8株分离株与2021—2022年北半球疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)聚类位于3C.2a1b.2a.1a进化谱系。6株分离株(A/JSTH/11735/2023、A/JSTH/11788/2023、A/JSTH/11974/2023、A/JSYD/353/2023、A/JSYD/354/2023、A/JSTH/138/2023)均发生F79L、N122D、P239S、K276E氨基酸位点的变异，既存在于散发株又存在于暴发株。盐城市甲型H3N2毒株HA1基因编码区抗原表位、受体结合位点、糖基化位点发生了一定程度变异，基因层面上分析，2023—2024年24株分离株与2022—2024年北半球疫苗株A/Darwin/9/2021免疫原性匹配性较好，2022年8株分离株与2021—2022年北半球疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020免疫原性匹配性较好。盐城市分离株未发生NA蛋白酶活性位点以及耐药位点的变化。结论:2022—2024年盐城市流行的甲型H3N2毒株HA1和NA基因正逐渐发生抗原性漂移，增加推荐疫苗株的不匹配度，造成流感的暴发流行。2022年盐城市分离株相对于疫苗株A/Darwin/9/2021(H3N2)已发生实质性抗原漂移。需要对甲型H3N2流感病毒进行动态监测及时发现变异株。

流感病毒在人类中的传播已有百余年的历史，然而由于其高度可变的抗原结构，常规疫苗难以构建持久的保护作用，开发具备跨亚型保护能力的疫苗成为研究人员面临的挑战。而近十余年发展形成的基于结构的疫苗设计策略有着不同的设计思路，它注重抗原表位的作用，将蛋白质结构信息用于抗原设计，以得到稳定、高效且具有跨亚型保护作用的重组抗原，为流感疫苗的开发提供了新的突破口。本综述汇总现阶段流感病毒中常见抗原的结构特点与表位特征，主要针对流感病毒的3种表面蛋白血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)和基质蛋白2(M2)，分别讨论结构疫苗学在这些抗原设计中的应用与进展。

目的:对活禽市场环境中检出的3份H5N6亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）标本进行测序鉴定和基因特征分析，为预防人感染H5N6亚型AIV提供依据。方法:通过实时荧光定量PCR确定病毒型别，采用二代测序方法对病毒血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）基因序列进行测序。使用NCBI中BLAST模块进行比对，用Mega7.0软件构建进化树并进行基因特征分析。结果:3份H5亚型阳性标本经测序鉴定为H5N6亚型AIV，属于Clade2.3.4.4支系。病毒的HA蛋白存在6个连续碱性氨基酸（LRERRRKRGL，其中R，K为碱性氨基酸）；病毒HA蛋白的受体结合位点238~240位氨基酸是QRG（氨基酸排序以H3-HA为准），受体特征为禽源；NA蛋白第69~73位点氨基酸未出现茎缺失。结论:环境中3份H5亚型AIV核酸阳性病毒鉴定为新型H5N6亚型AIV，属于高致病AIV，但具有不容易感染人的受体结合特征。活禽市场中持续存在H5N6病毒，对人类健康和公共卫生存在威胁，需要继续加强监测。

目的:分析上海市松江区2017—2020年乙型流感病毒流行情况及其血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)基因特征。方法:使用实时荧光逆转录-聚合酶链式反应检测流感病毒疑似病例的标本，乙型流感病毒阳性标本接种犬肾细胞和鸡胚培养病毒。对乙型流感毒株HA和NA基因测序，序列进行基因进化及氨基酸变异分析，采用神经氨酸酶抑制实验研究毒株对奥司他韦和扎那米韦的敏感性。结果:2017—2020年度松江区乙型流感病毒阳性率为14.24%(506/3 554)，主要流行季为冬春季，呈现B/Victoria和B/Yamagata亚型交替流行的特点。松江B/Victoria流行株主要位于1A(△3)B进化分支，少数位于1A及1A(△2)分支，与疫苗株B/Brisbane/60/2008相比，流行株HA和NA核苷酸同源性分别在97.62%~98.19%、98.11%~98.78%，1A(△3)B分支HA蛋白抗原决定簇区突变主要发生在120环和160环。B/Yamagata流行株均位于3进化分支，与疫苗株B/Phuket/3073/2013相比，HA(NA)核苷酸同源性98.71%~99.04%(98.69%~99.27%)，未发现抗原决定簇区氨基酸改变。神经氨酸酶抑制实验显示，所测的乙型流感病毒对奥司他韦和扎那米韦均敏感。结论:2017—2020年乙型流感病毒流行株与疫苗株抗原性匹配度不佳，需持续做好乙型流感病毒监测及病原学特征分析，为流感疫苗筛选及药物研发提供科学依据。

目的:了解苏州市2021年7月至2022年1月流感流行期间乙型流感病毒(influenza B virus, FluB)的基因组和遗传进化特征。方法:采用实时荧光－逆转录聚合酶链反应(Real-time fluorescence reverse transcription polymerase chain reaction, Real-time RT-PCR)法对标本进行流感病毒(influenza virus, Flu)分型检测。对检出的FluB毒株，经全基因组捕获和文库构建，利用Miseq高通量测序平台对样本进行测序。采用MEGA X软件以邻接法(Neighbor-Joining method, NJ)构建FluB血凝素(hemagglutinin, HA)、神经氨酸酶(neuraminidase, NA)和基质蛋白(matrix protein，MP)基因系统发育树；采用NetNGlyc 1.0 server软件预测HA和NA蛋白潜在N-糖基化位点。结果:在送检的1 500份咽拭子样本中，280份检出FluB，对其中53株样本完成了FluB全基因组序列测定。序列分析显示，FluB毒株8个基因节段(PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、MP、NS)核苷酸序列相似性分别为99.3%~100%、98.1%~100%、98.8%~100%、98.0%~100%、99.2%~100%、98.4%~100%、98.2%~100%、99.0%~100%。除2021年7月4份样本的FluB为V1A.3进化分支外，其余样本均为V1A.3a.2进化分支。与疫苗株B/Washington/02/2019相比，2021年10月份以后样本的FluB HA蛋白氨基酸序列存在9~11个差异位点，共享9个突变位点(H122Q、A127T、R133G、P144L、N150K、G184E、N197D、K203R、R279K)；未发现奥司他韦等NA抑制剂相关耐药突变。FluB HA和NA蛋白分别具有11个和4个潜在糖基化位点。结论:2021年7月至2022年1月期间，苏州市流行的FluB以V1A.3a.2毒株为优势流行株，HA和NA蛋白氨基酸序列发生多位点突变。

探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型（HPIV-3）的感染情况，并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）基因特征。本研究为横断面研究，青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019 年12月期间，每月随机采集急性呼吸道感染（ARTI）儿科患者的咽拭子样本，总共1 674份，采用多重实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，筛查HPIV-3阳性样本。采用巢式PCR方法扩增HPIV-3阳性样本HN全长基因并进行序列测定，序列结果与GenBank中HPIV-3的代表株进行对比分析，建立系统进化树。结果显示，1 674份咽拭子样本中，HPIV-3阳性有90份，检出率为5.37%，其中，6岁以下儿童占97.78%（88份）。HPIV-3阳性病例主要分布在春季和夏季。通过巢式PCR方法扩增得到44株HPIV-3 HN基因全长序列，序列比对及进化分析表明，HPIV-3 HN基因属于C3基因亚型的C3a和C3b分支，其中，C3a亚型有30株，C3b亚型有14株。44株青岛分离株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.0%~100.0%和98.5%~100.0%。综上，2018至2019年间，HPIV-3 C3基因型的C3a和C3b分支在山东省青岛市地区循环流行，其HN基因型变异较小，进化上具有一定的地域特征。

目的:分析活禽市场相关环境中检出的H7N9禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)的遗传进化和分子特征。方法:采集禽类粪便、污水，以及脱毛机和案板擦拭拭子等标本，实时荧光定量PCR鉴定甲型流感病毒和H7N9亚型。对于H7N9阳性标本以甲型流感病毒通用引物扩增病毒全基因组并测序，利用BLAST和MEGA X软件进行序列比对、系统进化和分子特征分析。结果:2023年2月采集于许昌市活禽市场的7份外环境标本中检出4份H7N9 AIV阳性，3份H7N9 AIV阳性标本测序成功，其各基因核苷酸一致性较高(98.37%～100.00%)。BLAST分析显示主要与我国2020—2021年国内禽中分离的H7N9毒株一致性最高。遗传进化分析显示3株病毒株聚在同一分支，与最近环境分离株相聚较近，而与最近人/禽感染病毒株关系较远。通过与各时期的代表性病毒株序列比对发现，本研究检出的病毒株呈禽高致病性，裂解位点处插入了4个氨基酸KRAA，病毒株血凝素受体结合位点为QSG，属于禽结合受体，血凝素出现G186I位点突变。聚合酶碱性蛋白2未出现哺乳动物适应性E627K突变。未检测到与神经氨酸酶抑制剂(奥司他韦)和聚合酶酸性蛋白抑制剂(巴洛沙韦)耐药相关的R292K和I38T位点突变，提示病毒对上述药物敏感性未降低。M2蛋白出现S31N突变，提示对烷胺类药物耐药。结论:从活禽市场检出的3株H7N9病毒株呈禽高致病性，与既往感染人/禽代表株相比，未明显增加人受体结合力、哺乳动物致病性、病毒传播力和耐药相关分子位点。

目的:分析2019—2022监测年度铜陵市B型Victoria系流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)的遗传进化特征。方法:选取2019—2022年度本实验室分离的22株B型Victoria系流感病毒进行全基因组测序，利用生物信息分析软件进行序列对比和系统进化分析。结果:2019—2022年铜陵市季节性流感主要以B型Victoria系流感为主，归属于V1A.3分支，其中2021—2022年分离的14株归属V1A.3a.2分支。与疫苗株相比，22株B型Victoria系流感的HA与NA蛋白均出现多个氨基酸变异位点，HA蛋白的四个主要抗原表位(120环、150环、160和190螺旋)均有变异，NA蛋白耐药位点未检测出变异，HA蛋白197 NETQ糖基化位点也发生改变。结论:2019—2022年铜陵市B型Victoria系流感病毒的HA蛋白的氨基酸位点部分发生了变异现象，这可能导致抗原表位的漂移变化，因此需要进一步加强流感病毒变异监测。

目的:分析淮南市2016年2—4月外环境标本中H9N2亚型禽流感病毒基因组特征。方法:选取H9N2亚型荧光PCR检测核酸阳性标本(Ct值≤30)，经鸡胚分离培养提取RNA，扩增8个基因节段进行全基因序列测定，分析淮南株各基因节段分子特征，构建进化树进化分析。结果:淮南市外环境2株H9N2禽流感毒株血凝素(hemagglutinin, HA)基因和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因与A/Anhui-Lujiang/39/2018/H9N2人源株核苷酸同源性分别为98.2%～98.3%/97.2%～94.9%，氨基酸序列同源性为98.9%～98.8%/99.2%～98.6%，其余6个内源基因与A/Anhui/1/2013/H7N9、A/Anhui/33163/2016/H5N6高度同源；基因进化分析显示，2016年淮南市2株H9N2亚型禽流感毒株为G57基因型，淮南市2株H7N9分离株、安徽人感染A/Anhui/1/2013/H7N9和A/Anhui/33163/2016/H5N6内源基因均为G57-like基因型；HA蛋白受体结合域氨基酸S132D、K138T、T189D、V/A190T、Q226L变异，NA茎区缺失了"TEI"序列，H274Y、R292K、N294S耐药位点未发生变异，PA基因I550L，PB1基因I368V，PB2基因I504V，NS1基因P42S，M1基因N30D、T215A，M2基因耐药S31N位点均发生突变。结论:淮南市活禽市场H9N2病毒与人感染H9N2安徽株A/Anhui-Lujiang/39/2018/H9N2高度同源，处于同一进化分支，均为G57基因型，可提供内源基因与人感染H7N9、H5N6亚型禽流感病毒重组；HA受体结合域氨基酸位点、NA茎区缺失序列、聚合酶活性增加，均加强病毒感染人类的能力，M2离子通道抑制剂(金刚烷烃类)耐药，NA抑制剂(磷酸奥司他韦)仍为敏感药物。