本文旨在研究天然冰片(natural borneol,NB)对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞迁移的影响及其作用机制.运用倒置显微镜观察记录细胞的表型变化,发现NB可显著改变SiHa与HeLa细胞的形态,使细胞变圆,胞间连接变松散;采用CCK-8法和集落形成实验发现NB处理SiHa与HeLa细胞明显抑制细胞增殖;流式细胞检测结果表明,NB处理组能显著诱导细胞凋亡,且呈现剂量依赖性;Transwell实验和划痕实验表明,NB能抑制SiHa与HeLa细胞的侵袭与迁移能力;蛋白免疫印迹结果表明,NB处理后下调Bcl-2、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Erk1/2、Snail与N-cadher-in蛋白表达,同时上调p-Erk1/2蛋白表达;mRNA测序结合信号通路富集结果显示NB的作用机制涉及MAPK、细胞凋亡等相关的信号通路.综上,NB可能通过影响MAPK、HIF-1α信号通路抑制宫颈癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡.

目的 制备紫杉醇-天然冰片复合物,同时探究紫杉醇-天然冰片复合物亚微乳的处方和制备工艺及体外抗肿瘤效果.方法 采用研磨法制备紫杉醇-天然冰片复合物并经红外光谱(FT-IR)和差式扫描量热(DSC)分析鉴定所得固体复合物;采用两步高压乳匀法制备复合物亚微乳,应用单因素考察和正交实验优化处方及制备工艺,通过噻唑蓝(MTT)比色法实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验,考察该制剂对HCT-116细胞的作用效果.结果 复合物中紫杉醇3 312.76 cm-1和3 513.92 cm-1的红外光谱吸收峰消失,且DSC分析显示在154.56℃处出现一个明显的新的吸收峰,表明紫杉醇可能与天然冰片偶联,形成新的复合物.复合亚微乳最佳处方为10％脂肪酸甘油酯,原料药0.44％[紫杉醇-天然冰片(1∶3)],3％混合乳化剂[蛋黄卵磷脂-泊洛沙姆188(1∶2)],2.0％甘油,0.3％油酸;最佳工艺为80 ℃乳化,60 MPa高压均质10次,再于100 ℃水浴灭菌45 min.细胞MTT实验中其半数抑制浓度(IC50)为0.75 μg·mL-1,细胞克隆实验结果中,空白对照组、紫杉醇原料药及紫杉醇-天然冰片亚微乳的划痕愈合面积分别为(36.44±3.35)％、(13.59±9.28)％、(8.30±4.09)％(P＜0.05);平板克隆实验中,空白对照组,紫杉醇原料药组,亚微乳组细胞克隆率分别为(37.92±0.729)％、(9.16±1.335)％、(3.36±1.065)％(P＜0.05).结论 紫杉醇-天然冰片亚微乳注射液处方及工艺合理,质量稳定.细胞实验表明,该亚微乳注射剂能明显抑制HCT-116细胞的增殖和迁移.

目的:研究吉列替尼皮肤毒性的发生机制并寻找有效干预策略.方法:对C57BL/6J雄性小鼠连续28 d灌胃给予吉列替尼,通过皮肤形态观察、苏木精-伊红染色、TUNEL检测、免疫组织化学法检测小鼠皮肤组织角质形成细胞损伤情况.对人角质形成细胞HaCaT给予吉列替尼,通过磺酰罗丹明B(SRB)染色法和显微镜观察法考察细胞死亡和形态学变化;蛋白质印迹法、流式细胞术结合碘化丙啶/Annexin Ⅴ双染法、免疫荧光技术考察吉列替尼作用下HaCaT细胞凋亡情况;流式细胞术结合2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法考察细胞活性氧累积情况.采用SRB染色法筛选天然化合物库中能有效干预吉列替尼皮肤毒性的天然化合物.HaCaT细胞给予吉列替尼和/或冰片联合处理,考察冰片对吉列替尼皮肤毒性的体外干预效果.C57BL/6J雄性小鼠连续灌胃给予吉列替尼和/或冰片28 d,考察冰片对吉列替尼皮肤毒性的体内干预效果.结果:体内研究中,组织病理学检查结果提示吉列替尼皮肤毒性造模成功,且模型组雄性小鼠皮肤发生病理性改变,棘层和颗粒层角质形成细胞发生凋亡.体外研究中,与正常对照组比较,吉列替尼模型组发生凋亡、切割型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)和磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)水平显著上调,活性氧累积明显增多.在天然化合物库中筛选发现冰片对HaCaT细胞死亡显示出极好的干预效果.在体外,相较于吉列替尼对照组,冰片+吉列替尼组凋亡明显减少,细胞中c-PARP、γ-H2AX及活性氧水平显著下降.在体内,冰片可缓解吉列替尼诱导的雄性小鼠皮肤病理性改变和皮肤细胞凋亡.结论:吉列替尼通过引起细胞内活性氧累积诱导角质形成细胞凋亡,导致皮肤毒性损伤.冰片可以通过减少活性氧累积和皮肤角质形成细胞凋亡,缓解吉列替尼的皮肤毒性作用.

目的 比较天然冰片对复方中药湿疹乳膏的体外释放和透皮吸收行为的影响,探讨该复方组成改良的可行性.方法 以离体BALB/c裸小鼠皮肤为渗透屏障,采用改良Franz垂直扩散池,比较含有冰片的复方中药湿疹乳膏和复方中药湿疹乳膏不合冰片的的透皮吸收效果,初步评价冰片的作用.采用HPLC测定透皮接收液中苦参有效成分苦参碱的含量,流动相为乙腈:水(0.05％三乙胺,磷酸调pH3.5)(2:98),检测波长220nm.结果 含冰片乳膏中的苦参碱累积渗透量在给药后的各时间点均高于无冰片乳膏,在12 h体外经皮渗透达到稳态.含冰片12 h累积渗透率为3.25％,不合冰片为3.10％.结论 复方中药湿疹乳膏中苦参碱能够透过皮肤,冰片对苦参碱透皮具有一定的促进作用,可在原复方处方中改良加入冰片.

冰片是我国名贵中药,中医认为其具有提神醒脑,芳香开窍等作用.冰片主要分为天然冰片和合成冰片,天然冰片的主要成分为右旋龙脑,合成冰片的主要化学成分除龙脑以外,还含有大量的异龙脑等.现代药理学研究表明,冰片具有抗细菌、真菌,消炎镇痛等药理作用;冰片在心脑血管疾病的防治上具有积极作用.冰片作为常用的佐使药物,在与其他药物配伍时,能提高其他药物的生物利用度.

目的:比较不同采收期龙脑樟挥发油的得率及质量.方法:采集不同生长年限、不同月份龙脑樟枝叶,采取水蒸气蒸馏法提取挥发油,计算挥发油得率,利用GC-MS分析挥发油中主要类型成分,采用气相色谱法测定其中右旋龙脑、异龙脑、樟脑的含量.结果:与3年生长期样品相比,生长期为2年的龙脑樟枝叶挥发油得率稍高,且成分类型更少,主成分右旋龙脑GC-MS峰面积占主要成分总峰面积的80％以上.2年期的龙脑樟叶中,11月底采集的龙脑樟鲜叶挥发油得率最高(1.37％);每个月份样品中右旋龙脑质量分数均＞70％,其中5月份样品中质量分数最高,达87％;樟脑的质量分数11月份最低,仅0.32％;但所有挥发油样品中均不含异龙脑.结论:龙脑樟的最佳采收年限为2年,最佳采收期为11月底至12月初.建立了一种准确、可靠、重复性好的可同时测定龙脑樟中3种挥发性成分的气相色谱法,可为龙脑樟挥发油的质量评价提供实验依据.

目的 研究天然冰片、艾片及合成冰片对模型药物经皮渗透效果的差异.方法 采用改良的Franz扩散池考察不同基源冰片对天麻素、欧前胡素经皮渗透性的影响;利用HPLC法测定透皮接收液中天麻素、欧前胡素的含量.结果 三种基源冰片对天麻素、欧前胡素均具有明显的促透作用,且促透效果存在差异;对于天麻素,其促透效果大小顺序为:艾片>合成冰片>天然冰片;对于欧前胡素,其促透效果大小顺序为:天然冰片>合成冰片>艾片;三种冰片对天麻素的促透效率均显著高于对欧前胡素的促透效率.结论 三种基源冰片对同一药物的促透效果存在差异,说明不同构型冰片对药物的促透效果存在立体选择性;三种基源冰片促透不同药物时,扰乱脂质有序排列、抽提脂质的能力存在明显不同;与亲脂性药物相比,冰片对亲水性药物的经皮渗透性效果更好.

目的:考察天然冰片对局灶性脑缺血大鼠的脑保护作用.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吐温(溶剂)+模型组、尼莫地平10.8 mg/kg组、天然冰片0.15、0.3、0.6 g/kg 7组.预给药三天后,采用线栓法致大脑中动脉栓塞造成局灶性脑缺血模型,记录大鼠翻正反射消失到苏醒的时长;参照Zea Longa评分法对大鼠神经功能损伤进行评分;采用干湿重法测得脑指数、△脑指数和脑组织含水率;采用TTC染色法染色观测缺血侧大脑的梗死灶,并计算脑梗死率;采用HE染色法观察大鼠缺血半暗带脑组织形态.结果:与假手术组比较,模型组和溶媒模型组苏醒时间、神经功能评分、脑组织含水率、脑指数、脑梗死率和脑组织病理评分明显增加或增高,大鼠海马区损伤明显.天然冰片0.15、0.3、0.6 g/kg剂量组均能显著延长麻醉后pMCAO模型大鼠的苏醒时间;能明显降低大鼠行为评分;并能明显降低pMCAO模型大鼠△脑指数、脑组织含水率以及脑梗死率;天然冰片0.3、0.6 g/kg剂量组能有效改善pMCAO模型大鼠海马区脑细胞损伤.结论:天然冰片能够预防局灶性脑缺血发生而发挥脑保护作用,其中0.6g/kg剂量组的作用最明显.

目的 考察天然及合成冰片对大黄素透皮吸收的影响.方法 首先用饱和溶液法,筛选适宜大黄素的供给液和接收液;采用Franz扩散池进行透皮实验,采用HPLC测定1～24 h时间内接收液中大黄素的量,以累积渗透量、渗透速率及增渗倍数为评价指标.结果 含有1％聚山梨酯80的80％乙醇生理盐水和60％乙醇生理盐水分别为供给液、接收液,可使大黄素溶解度提高到648 μg·mL-1并形成漏槽条件;大黄素渗透速率与其浓度呈正相关,为648 μg·mL-1＞ 569 μg·mL-＞ 457μg·mL-1;不同浓度天然及合成冰片对大黄素透皮吸收产生的影响分别为,2％＞3％＞1％＞空白对照组＞4％、5％,2％＞4％＞1％＞空白对照组＞3％、5％;2％天然冰片的稳态渗透速率为15.90 μg·cm-2·h-1,大于2％合成冰片的12.44 μg·cm-2 h-1.结论 天然及合成冰片的用量,决定了对大黄素透皮吸收的促渗或抑制作用,且天然冰片优于合成冰片.本结果为后续大黄素经皮促渗剂的选择提供了实验依据.

目的:探讨天然冰片对癫痫持续状态(SE)模型小鼠的抗惊厥作用机制.方法:将96只C57BI/6J雄性小鼠随机分为4组,分别为空白对照组6只,SE模型组30只,低、高剂量冰片组各30只.选用盐酸匹罗卡品诱导小鼠建立SE模型,观察动物行为学指标变化.对小鼠脑海马区进行Nissl染色观察.采用免疫组织化学法检测各组小鼠海马不同分区TRPV1蛋白、TRPA1蛋白、GABA递质的表达.结果:动物行为学指标方面:与SE模型组比较,天然冰片干预的小鼠癫痫发作等级和程度均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).Nissl染色海马神经元损伤程度:空白对照组＜高剂量冰片组＜低剂量冰片组＜SE模型组.免疫组化检测结果显示:各剂量冰片组小鼠海马CA1、CA3区上的TRPV1和TRPA1蛋白表达量较SE模型组显著降低(P＜0.05,P＜0.01),而GABA递质表达量较SE模型组和空白对照组升高(P＜0.05,P＜0.01).其中高剂量冰片组较低剂量冰片组这种趋势更显著.结论:天然冰片对SE小鼠具有抗惊厥作用,其作用机制可能是抑制脑海马CA1、CA3区中TRPA1及TRPV1蛋白表达以及增加神经递质GABA的释放.