目的:评估时差成像培养系统（time-lapse imaging，TLI）对小鼠胚胎发育潜能及组蛋白表观修饰的影响。方法:选择SPF级雌性ICR小鼠，促排卵后取成熟M Ⅱ卵子进行体外受精（ in vitro fertilization，IVF），获取成功受精的合子，分别在TLI和常规培养体系（standard incubators，SI）中进行体外培养，记录两组胚胎的2-细胞率、4-细胞率、8-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵出率。通过Hoechst、OCT4及CDX2抗体进行免疫荧光染色，分别统计囊胚细胞总数、内细胞团数和滋养外胚层细胞数。两组囊胚移植入第2.5天代孕母鼠子宫，统计植入率及活胎率。通过对组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化（H3K9me2）和组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化（H3K9ac）的免疫荧光染色，评估两组胚胎组蛋白表观修饰情况。 结果:TLI组和SI组的早期胚胎发育情况、内细胞团和滋养外胚层细胞数、植入率和活胎率比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。两组囊胚的组蛋白H3K4me3、H3K9me2和H3K9ac的表达水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:利用TLI体外培养不会影响胚胎的发育潜能以及组蛋白修饰。

目的 探讨辅助孵化(AH)对第6天(D6)低质量废弃囊胚(4CC级)孵出率的影响,观察AH及透明带开孔大小对4CC级囊胚孵出率的影响,以期为AH的临床应用提供参考.方法 2022年7-8月于中山大学孙逸仙纪念医院收集4CC级废弃D6囊胚135枚,随机分为AH组(n=35)和对照组(n=36),以及单次打孔组(n=31)和多次打孔组(n=33).观察AH及打孔方式对囊胚孵出的影响.结果 AH实验中,相应操作后培养至D8,AH组囊胚总孵出率显著高于对照组(77.14％vs.33.33％,P＜0.05),但组间完全孵出率无统计学差异(14.29％vs.11.11％,P＞0.05).打孔方式实验中,两组间D7、D8孵出率以及总孵出率相似(P＞0.05),但是多次打孔组的完全孵出率显著高于单次打孔组(54.55％vs.12.90％,P＜0.05),并且单次打孔组的胚胎在孵化时伴随卡顿象增多.结论 AH有利于低质量囊胚孵出,大孔径AH可以防止低质量胚胎在孵出时的卡顿现象.

目的 了解松江区亚洲小蠊的数量、密度、种群组成、生活史及杀虫剂敏感性,为研究上海市蟑螂种类、生物学及防治积累数据.方法 采用蟑螂屋诱捕法在竹林和灌木林中进行种群组成及密度调查,以网捕法采集小蠊带回实验室进行种类鉴定和饲养,并采用果酱瓶药膜接触法测试其对高效氯氰菊酯的敏感性.结果 通过观察成年雄虫第7、8腹节背板的特征鉴定辰山新型小蠊为亚洲小蠊.蟑螂屋诱捕阳性率达50％ (310/620),诱捕成若虫共1 752只,平均密度为5.65只/张.亚洲小蠊的密度高峰出现在8月下旬,为11.24只/张,越冬期为5个月左右;种群组成中成虫比例呈现先升后降的变化,而若虫比例变化正好相反;灌木林和竹林生境中密度变化呈现一定差异,但差异无统计学意义(t=-0.976,P=0.338);实验室饲养时每个卵鞘孵出若虫20 ～30只,发育周期为3个月左右;亚洲小蠊对0.05％高效氯氰菊酯的KT50为5.962 min,敏感性低于德国小蠊敏感品系.结论 松江辰山的新型小蠊,经鉴定为亚洲小蠊,其密度和种群组成变化呈现明显的季节消长趋势,来源可能是随植物、树木的引种而引入,其趋光性、生活史及携带病原情况等仍值得深入研究.

通过观察日本七鳃鳗Lampetra japonica (Martens,1868)胚胎外部形态和内部组织结构变化,描述受精卵从卵裂至器官形成以及仔鱼孵出的发育阶段,采用实验生态学方法研究卵黄囊期仔鱼的异速生长模式.结果表明:日本七鳃鳗卵子为乳白色,呈卵圆形;受精卵卵裂方式为全卵裂;胚胎发育过程主要包括卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、头凸期、孵出前期和孵出期,历时11-12d;初孵仔鱼为乳白色,全长约(3.41±0.24) mm,体质量约为0.0006 g.日本七鳃鳗胚胎发育研究可为了解七鳃鳗胚胎发育过程,早期脊椎动物的起源和发育进化研究提供参考.卯黄囊期内仔鱼身体各部分中,头长和尾长均表现出快速生长,同在7日龄出现生长拐点,且生长拐点后的生长速率都大于生长拐点前的生长速率;而仔鱼体长在卵黄囊期内表现出慢速生长.在头部器官中,吻长、鳃前长和鳃长均表现出快速生长现象,吻长和鳃长分别在9日龄和8日龄出现生长拐点;口笠长在3日龄时出现生长拐点,在生长拐点前为等速生长,而在生长拐点后表现出快速生长;眼径和眼鳃间距则分别表现出等速生长和慢速生长.泄殖孔在卵黄囊期内未出现生长拐点,生长速率相对于全长生长速率表现出快速生长现象.七鳃鳗卵黄囊期仔鱼的异速生长是在长期进化过程中,适应早期生活环境和独特的生活方式而形成特有的发育机制.

鼋(Pelochelys cantorii, 1864)属于中国国家一级重点保护野生动物,生物学资料相对匮乏, 2015和2016年连续2年对人工驯养的4只亲鼋(2雌2雄)进行了繁殖生物学研究.人工驯养鼋的产卵期集中在5—8月, 夜间产卵, 无护卵行为.通过视频观察分析, 鼋产卵过程可分为Ⅳ个阶段.2只雌鼋2015年共产卵10窝, 每窝32—50枚, 共406枚, 受精273枚, 受精率为67.24%, 孵出稚鼋140只, 孵化率为51.28%; 2016年共产卵11窝, 每窝40—55枚, 共489枚, 受精353枚, 受精率为72.19%, 孵出稚鼋212只, 孵化率为60.06%.鼋卵圆形, 刚性, 均重(16.82±1.99) g, 卵直径(3.10±0.18) cm, 刚孵出稚鼋均重(13.60±0.85) g, 在人工控温下平均孵化期为(64.94±3.47)d.繁殖数据表明这2对鼋处于生育盛年期.针对2016年的繁殖数据分析, 2只雌鼋每窝产卵量无明显差异, 卵均重和卵直径间有显著相关性, 雌鼋1个体体重大于雌鼋2, 前者产的卵均重显著大于后者, 孵出稚鼋的初重差异也显著, 卵大, 稚鼋也大.孵出的稚鼋以活鱼苗为饵料, 在温室内人工养殖周年, 均重可以达(510.30±82.77) g.研究旨在为鼋繁育生物学提供基础性数据, 为其资源保护做贡献.

目的 应用全基因组扩增结合二代测序技术对废弃胚胎进行植入前遗传学筛查.方法 收集476个废弃胚胎,经继续培养后获得23个优质囊胚.根据Gardner囊胚分级法,对4BC级及以上的囊胚进行活检,在有部分滋养外胚层细胞孵出时用活检针吸取5～10个细胞,于全基因组扩增后进行二代测序,检测胚胎中有无染色体片段的缺失/重复以及染色体数目变异.结果 23个囊胚共吸取滋养外胚层细胞148个.进行单细胞全基因组扩增后,选取其中60个扩增产物进行高通量测序,结果显示有39个细胞染色体存在异常,来源于14个囊胚,即囊胚异常比率为60.87％(14/23).结论 应用全基因组扩增结合二代测序技术对废弃胚胎进行植入前遗传学筛查分析,可筛除染色体非整倍体及染色体结构异常的胚胎,对于改善高危人群试管助孕的效果和减少出生缺陷具有重要的意义.

单性养殖在棘胸蛙(Quasipaa spinosa)养殖中意义显著.为了了解棘胸蛙性腺分化,并探讨在不同的培育温度条件下性腺分化的差异.通过组织切片观察了棘胸蛙原始性腺的形成和性腺分化.棘胸蛙的性腺分化有其特殊性:生殖嵴形成时,其中既有体细胞,又有原始生殖细胞(PGCs);无论原始性腺是分化成为精巢还是卵巢,其中都出现一个带有单层扁平上皮初生性腔,当单层扁平上皮逐渐消失后形成次生性腔.性腔周围的PGCs开始长大2-3倍时,性腺将分化成为卵巢;体细胞渗入性腔中,使腔隙变小直至消失,这种原始性腺分化成为精巢.棘胸蛙蝌蚪孵化后的1780 d(Gosner 25-26期)为性腺分化的敏感时期.实验选取同一批次刚孵出蝌蚪(Gosner 24期),分别用不同水温(16±1)℃、(27±1)℃、(31±1)℃3组实验组及自然水温(23±1)℃对照组条件下的培育蝌蚪.结果显示,对照组的雌、雄性比为26∶24,雄性率接近50％;(16±1)℃实验组的雌、雄比例为33∶17,雄性率仅34％(P＜0.05);从(27±1)℃实验组起,雄性率提高,(31±1)℃实验组的雄性率达70％ (P＜0.05).棘胸蛙的性别分化属于温度依赖型性决定(TSD).较高的培育温度可使棘胸蛙蝌蚪性别分化趋向雄性,而较低的培育温度则使蝌蚪雌性化.

目的 探讨环境污染物邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性及其机制.方法 采用水域染毒法,将受精后4 h(4 hpf)的斑马鱼胚胎分别暴露于质量浓度为1、2、4、8 mg/L的DEHP作为4个质量浓度组,同时设79.2 mg/L甲醇对照组、60 mg/L的氯化钠溶液空白对照组.通过分析72 hpf的孵化率,24、48、72、96、120 hpf的死亡率和畸形率等指标以及胚胎整体原位杂交的方法来评价DEHP对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性.结果 与对照组比较,随着DEHP质量浓度的增加,斑马鱼胚胎72 hpf的孵化率降低,24、48、72、96、120 hpf的死亡率和畸形率增加.当DEHP质量浓度达到8 mg/L时,斑马鱼72 hpf的孵出率由对照组的98.33％下降到62.22％,并且120 hpf的死亡率达40.00％、畸形率达27.30％.整体原位杂交结果显示DEHP处理组斑马鱼胚胎心脏的位置和心管环化均出现不同程度的异常.与对照组比较,DEHP处理组胚胎在24 hpf心房肌球蛋白重链(amhc)、心室肌球蛋白重链(vmhc)、心肌肌浆球蛋白轻链(cmlc2)的表达位置均发生了变化；48 hpf amhc的表达量明显下降,vmhc的表达位置发生了变化,cmlc2标志的整个心脏发育异常,未能完成心脏环化过程,仅形成1条心管.结论 DEHP能影响斑马鱼胚胎发育,导致斑马鱼胚胎和幼鱼的畸形与死亡,而它的心脏毒性可能发生在心管的环化过程中.

两栖类胚胎呈卵群一起孵化在反捕食、维持胚胎间的温度平衡和促进胚胎的同步发育等方面具有重要作用.在实验条件下探究孵化条件(单独隔离孵化和卵群一起孵化)对镇海林蛙(Rana zhenhaiensis)蝌蚪的生长发育、社交行为及其运动表现能力的影响.结果 表明,孵出2天后,单独隔离孵化组蝌蚪的体长和发育历期均显著大于卵群一起孵化组.以体长为协变量的协方差分析表明,特定体长的单独隔离孵化组蝌蚪的体宽和体重均显著大于卵群一起孵化组的个体.在蝌蚪的活动行为中,单独隔离孵化组蝌蚪在水体上层和中层出现的频次显著小于卵群一起孵化组,而在水体底层的出现频次显著大于卵群一起孵化组.单独隔离孵化组蝌蚪个体的分布面积率、最近邻个体的距离、个体间的距离均显著大于卵群一起孵化组,但个体间的接触频次显著小于卵群一起孵化组.在运动表现方面,单独隔离孵化组胚胎的摆尾搏动频次显著小于卵群一起孵化组.单独隔离孵化组蝌蚪的运动时长和运动频次均显著小于卵群一起孵化组.本研究结果将为无尾两栖类幼期的生长发育规律提供参考数据.

明确大理地区大片形吸虫的最适中间宿主,为制定防治措施提供依据.收集大片形吸虫虫卵,28℃孵育.每日定时吸取虫卵,观察其发育情况,直至孵出毛蚴.将3种实验用螺随机分为感染组和未感染组.感染组螺数量依次为:尖膀胱螺141只、椭圆萝卜螺240只和小土蜗251只;未感染组螺数量依次为:尖膀胱螺124只、椭圆萝卜螺136只和小土蜗87只.感染实验于24孔细胞培养板上进行,每孔加入数量比为1∶3的螺与毛蚴.感染4h后将螺放入养螺盆,每盆放置48～60只螺,室温下饲养.未感染组螺直接放入养螺盆,与感染组螺同法饲养.每日挑拣死螺,显微镜下观察大片形吸虫幼虫发育情况,同时记录室温和水温.待螺体内的幼虫发育为子雷蚴(含尾蚴雏形),收集囊蚴.结果 显示,毛蚴于第11天孵出.感染组螺中,尖膀胱螺、椭圆萝卜螺的最长存活时间为72 d,小土蜗的最长存活时间为53d.期间测定的饲养室温为21℃～27℃(平均24℃),水温为21℃～25℃(平均23℃).141只尖膀胱螺均为阴性,至感染后第72天,仍有12只存活;仅1只椭圆萝卜螺为阳性,于感染后第28天死亡,其余239只均为阴性,至感染后第72天,仍有36只存活.共检出112只阳性小土蜗,感染率为44.6％(112/251),至感染后第53天,全部死亡.未感染组螺中,尖膀胱螺、椭圆萝卜螺的最长存活时间为77 d,小土蜗的最长存活时间为57 d.124只尖膀胱螺均为阴性,至饲养第77天,有8只存活;136只椭圆萝卜螺均为阴性,至饲养第77天,有30只存活;87只小土蜗均为阴性,至饲养第57天全部死亡.所有阳性螺均未观察到胞蚴;仅有的1只阳性椭圆萝卜螺体内可观察到母雷蚴;112只阳性小土蜗体内可观察到雷蚴、母雷蚴、子雷蚴和尾蚴.阳性小土蜗于感染后第11天可见雷蚴,第23天可见母雷蚴,第26天可见含不成熟尾蚴的子雷蚴,第30天可见含成熟尾蚴的子雷蚴,感染40天后死亡的阳性小土蜗软体中发现尾蚴.感染后第40天开始捡获囊蚴,持续11d,共收获511个囊蚴,其中499个囊蚴(占97.7％)均于次日清晨8:00检获,剩余12个囊蚴(占2.3％)于其中4天下午(14:30～16:30)捡获,期间存活的小土蜗有29只,其中24只为阳性,占阳性螺总数的21.4％ (24/112),每只阳性螺逸出尾蚴且形成囊蚴的平均数为21个(511/24).大理地区大片形吸虫的最适中间宿主为小土蜗.