目的:评估时差成像培养系统（time-lapse imaging，TLI）对小鼠胚胎发育潜能及组蛋白表观修饰的影响。方法:选择SPF级雌性ICR小鼠，促排卵后取成熟M Ⅱ卵子进行体外受精（ in vitro fertilization，IVF），获取成功受精的合子，分别在TLI和常规培养体系（standard incubators，SI）中进行体外培养，记录两组胚胎的2-细胞率、4-细胞率、8-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵出率。通过Hoechst、OCT4及CDX2抗体进行免疫荧光染色，分别统计囊胚细胞总数、内细胞团数和滋养外胚层细胞数。两组囊胚移植入第2.5天代孕母鼠子宫，统计植入率及活胎率。通过对组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化（H3K9me2）和组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化（H3K9ac）的免疫荧光染色，评估两组胚胎组蛋白表观修饰情况。 结果:TLI组和SI组的早期胚胎发育情况、内细胞团和滋养外胚层细胞数、植入率和活胎率比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。两组囊胚的组蛋白H3K4me3、H3K9me2和H3K9ac的表达水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:利用TLI体外培养不会影响胚胎的发育潜能以及组蛋白修饰。

目的:通过胚胎时差成像技术（TLT）结合人工智能（AI）探索体外胚胎发育曲线（EDM）中的卵裂球计数曲线“跳变值”与胚胎形态学特征的相关性，并探讨其在体外受精（IVF）胚胎评估中应用的可行性。方法:本研究为自主研发的AI胚胎评估软件的诊断性试验，即临床数据AI再评估，为回顾性研究。收集2020年12月至2021年12月于重庆医科大学附属妇女儿童医院生殖医学中心行IVF的1 226例患者共6 545个胚胎，其中2 869个胚胎进行囊胚培养。所有胚胎通过TLT培养并进行观察，由TLT记录软件Embryo Viewer依据胚胎发育动力学绘制EDM。本课题组自主研发的AI胚胎评估软件对胚胎发育过程中的卵裂球数目进行实时识别、记录，并与EDM进行比较，分析由卵裂球计数变化而形成的跳变值与胚胎结局的相关性。采用Spearman相关性及logistic回归分析跳变值与胚胎形态学评估、胚胎着床及活产的相关性，使用受试者工作特征（ROC）曲线评估各指标对胚胎着床、活产的预测价值。结果:Spearman相关性分析显示，受精卵受精后72 h卵裂球计数曲线提取的总跳变值与卵裂模式、囊胚形成、培养至第3天胚胎（D3胚胎）的形态学评级、D3胚胎的细胞均一度、D3胚胎的细胞碎片率均呈显著负相关（ β值分别为-0.268、-0.116、-0.213、-0.159、-0.222； P均<0.001），与D3胚胎的细胞数呈显著正相关（ β=0.034； P<0.001）。多因素logistic回归分析显示，胚胎总跳变值排序与囊胚形成（ OR=0.97，95% CI为0.93~0.99； P=0.034）、胚胎着床（ OR=0.96，95% CI为0.93~0.98； P=0.044）呈显著负相关；ROC曲线分析显示，胚胎总跳变值排序预测胚胎着床能力与传统胚胎形态学评估方法相近［其曲线下面积（AUC）分别为0.679、0.620］。多因素logistic回归分析显示，活产与患者年龄（ OR=0.91，95% CI为0.88~0.93； P<0.001）、D3胚胎形态学评级（ OR=0.77，95% CI为0.59~0.99； P=0.045）及胚胎总跳变值排序（ OR=0.98，95% CI为0.96~0.99； P=0.038）呈显著负相关，而与获卵数（ OR=1.08，95% CI为1.05~1.11； P<0.001）及移植日子宫内膜厚度（ OR=1.09，95% CI为1.06~1.12； P<0.001）呈显著正相关；ROC曲线分析显示，纳入建模的以上多个因素预测活产的AUC值为0.666。 结论:跳变值及其排序是对体外胚胎卵裂期发育的系统量化，其与胚胎发育质量及临床结局相关，可能是胚胎体外评估及选择的有益补充。

目的:建立一个能够对卵胞质内单精子显微注射（ICSI）卵子受精失败进行早期判断进而实施早期补救性人工激活的技术体系，并探讨其激活效率及应用价值。方法:首先回顾性分析2017年1月至2018年3月期间广西壮族自治区人民医院生殖医学与遗传中心150个采用时差胚胎动态监测系统（Time-lapse）系统培养的ICSI周期第二极体（Pb2）释放时间分布及其与受精及胚胎发育结局的关系，探讨Pb2释放作为ICSI受精失败早期判断指标的可行性。其次采用随机对照试验，收集2018年3月至2019年6月期间93个ICSI助孕周期的225个受精失败卵子，根据人工激活方式不同分为未激活组（NAOA组）、早期激活组（RAOA组）、晚期激活组（LAOA组），同时将其余ICSI注射卵子作为对照组，比较4组受精及胚胎发育参数，探讨ICSI受精失败早期补救性人工激活的效率和应用价值。结果:Time-lapse监测ICSI注射后卵子有Pb2释放组的受精率（99.91%）、双原核（2PN）受精率（97.76%）显著高于无Pb2释放组（0.03%、0.00%）且差异均具有统计学意义（ P均<0.001）；ICSI注射后卵子Pb2释放时间为（3.04±1.45） h，Pb2释放时间分布及占比分别为0~3 h（58.58%）、3~5 h（36.29%）、5~8 h（3.92%）、>8 h（1.21%）；NAOA组Pb2释放率、受精率、2PN受精率均为0%，LAOA组2PN受精率（36.00%）、第3日（D3）优质胚胎率（8.00%）、第5日（D5）囊胚转化率（0%）、D5优质囊胚转化率（0%）均显著低于RAOA组（60.00%、44.19%、51.16%、25.58%）且差异均有统计学意义（ P=0.005， P=0.002， P<0.001， P=0.005），同时均显著低于对照组（97.63%、48.62%、63.23%、37.94%）且差异均有统计学意义（ P均<0.001）；RAOA组Pb2释放率（84.00%）、受精率（81.33%）、2PN受精率（60.00%）、2PN卵裂率（95.56%）均显著低于对照组（100.00%、99.68%、97.63%、99.51%）且差异均具有统计学意义（ P<0.001， P<0.001， P<0.001， P=0.04），但D3优质胚胎率、D5囊胚转化率、D5优质囊胚转化率2组间差异均无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:Time-lapse监测Pb2释放可以作为早期判断ICSI卵子受精失败的指标，在ICSI注射后5 h对受精失败卵子进行早期补救性人工激活可以获得正常受精和理想的胚胎发育结局。

人类辅助生殖技术(ART)包括人工授精( AI)和体外受精－胚胎移植( IVF-ET)及其衍生技术.近年不孕不育患者比例有升高趋势,此外因二胎政策的开放,有生育需求的高龄患者比例有所增加,ART技术现已成为治疗不孕不育患者的重要方式.随着科技的发展,许多衍生技术的应用,包括卵母细胞的体外成熟培养、时差成像系统、精子微量冷冻、代谢组学评估胚胎发育潜能等,弥补了ART技术的不足,使ART技术更完善,更准确地满足患者的需求.但是,新技术的应用仍然存在一些问题,在临床实施过程中,需要不断改进、更新和完善.

近年来兴起的时差成像技术在为胚胎发育提供稳定培养环境的同时可通过拍摄系统全程记录植入前胚胎的动态发育过程,从而获得更加全面准确的胚胎发育信息.这些信息能够显示人类胚胎行为学及动力学指标,建立胚胎评估模型,能有效地克服形态学评估主观性大、所提供信息有限的弊端,成为胚胎评估更为有利的手段.本文总结了时差成像技术建立的参数与模型,及其在胚胎评估中的临床应用.

目的 探讨时差成像系统(TLI)对囊胚培养及妊娠结局的影响. 方法 选取2017年1月至2018年12月在本中心接受辅助生殖治疗并行囊胚培养的481例不孕患者为研究对象.根据囊胚培养方式不同分为采用TLI系统进行囊胚培养的TLI组(n=189)和采用传统培养体系培养囊胚的标准培养系统(SI)组(n=292),比较两组患者的一般资料及囊胚形成率、可利用囊胚率和优质囊胚率.TLI组采用形态学评分结合胚胎动态发育参数选择囊胚,SI组根据形态学评分选择囊胚,比较两组囊胚移植后的临床妊娠结局. 结果 两组患者的一般资料比较无显著性差异(P＞0.05).两组的受精率、2PN卵裂率、囊胚形成率、可利用囊胚率和优质囊胚率比较亦无显著性差异(P＞0.05).TLI组143例患者移植冻融囊胚,SI组217例移植冻融囊胚,两组的移植囊胚质量比较无显著性差异(P＞0.05);但TLI组囊胚移植后的临床妊娠率(78.32％ vs.68.66％)和着床率(65.63％ vs.54.83％)显著高于SI组(P＜0.05),两组的流产率比较无显著性差异(P＞0.05). 结论 采用TLI系统进行囊胚培养,以形态学评分结合胚胎动态发育参数选择囊胚,可以明显改善囊胚移植后的临床妊娠结局.

目的 利用时差成像系统(TLI)结合胚胎形态学评估建立一种对人卵母细胞体外成熟(IVM)后受精所形成胚胎的筛选模式,以期为临床实践中选择高发育潜能的IVM胚胎提供参考. 方法 收集2016年2月至2019年5月于本中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者的402枚未成熟卵母细胞进行IVM培养,卵母细胞成熟后行卵胞浆内单精子注射(ICSI)授精.受精后胚胎在TLI系统中观察培养,观察IVM胚胎各种卵裂模式与其形成囊胚潜能的关系,并收集胚胎发育的动力学参数,分析原核消失时间(tPNF),发育至2细胞时间(t2)、3细胞时间(t3)、4细胞时间(t4)、5细胞时间(t5),2细胞发育至3细胞所需时间(cc2)、3细胞发育至4细胞所需时间(s2)这些参数在第3天(D3) IVM胚胎未形成囊胚组(A组,111枚)和形成囊胚组(B组,51枚)之间的差异. 结果 402枚未成熟卵母细胞进行IVM培养,共有315枚(78.4％)成熟;315枚IVM成熟卵母细胞进行ICSI,正常受精219枚,其中非二倍性卵裂的发生率最高(24.2％),其次为正常卵裂(21.9％).IVM胚胎中正常卵裂胚胎的囊胚形成能力最高(52.1％),卵裂球碎裂最低(10.0％),发育停滞和非二倍性卵裂胚胎均无囊胚形成.A、B两组的动力学参数tPNF、t2、t3、cc2、s2比较均无显著性差异(P＞0.05),t4、t5组间有显著性差异(P＜0.05);B组t4、t5的参数值范围分别为(24.6～41.9)h和(26.1～56.9)h,该范围内的IVM胚胎具有更高的囊胚形成能力.利用TLI系统结合胚胎形态学评估建立一种高发育潜能IVM胚胎的筛选模式,验证该模式所选出A级胚胎的囊胚形成率显著高于优选胚胎(64.3％ vs.44.0％) (P＜0.05). 结论 利用TLI系统结合胚胎形态学评估方法建立的针对IVM胚胎的筛选模式可以作为筛选高发育潜能IVM胚胎的有效工具.

目的 探讨时差成像系统(TLI)在选择高发育潜能未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)受精胚胎中的应用价值.方法收集2016年2月至2019年5月于嘉兴市妇幼保健院接受体外受精-胚胎移植治疗患者的525枚未成熟卵母细胞进行IVM,同时收集周期中正常成熟卵细胞207枚.IVM后成熟卵母细胞及正常成熟卵母细胞均行卵细胞浆内单精子注射(ICSI),受精后胚胎在TLI中观测培养.收集所有胚胎发育的时间参数,用四分位数法和logistic回归法分析前期收集的402枚未成熟卵母细胞IVM受精胚胎(IVM胚胎)的时间参数与囊胚形成的关系,得出TLI在选择高发育潜能IVM胚胎中的应用价值,并用后期收集的123枚未成熟卵母细胞形成的IVM胚胎时间参数与囊胚形成率的关系进行验证.结果 IVM胚胎D3可利用胚胎率、D3优胚率、囊胚形成率均低于正常卵母细胞受精胚胎(正常胚胎)(均P＜0.05),非二倍性卵裂率大于正常胚胎(P＜0.05).经四分位数法和logistic回归分析发现IVM胚胎发育至5细胞的时间(t5)在时间段(37.50～52.68) h内对形成囊胚最有预测价值.用后期收集的123枚未成熟卵母细胞形成的IVM胚胎时间参数与囊胚形成率的关系验证t5的预测价值,发现t5优势时间段内囊胚形成率为60.0%,显著高于非t5优势时间段内的囊胚形成率(14.3%,P＜0.05).结论 TLI可以作为选择高发育潜能IVM胚胎的有效工具.

目的 比较时差成像(time-lapse,TL)系统培养与常规培养卵裂期胚胎移植的妊娠和新生儿出生结局,评价TL技术的安全性.方法 回顾性分析2016年1月至2019年3月在本中心行体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕治疗的1999周期临床资料,根据胚胎培养方式,分为time-lapse组(n=871)和常规组(n=1128),比较两组的妊娠和新生儿结局.结果 两组移植日内膜、异位妊娠率、早期流产率、晚期流产率、多胎率、早产率、不良新生儿结局、低体质量儿、极低体质量儿、巨大儿、分娩孕周、新生儿体重、畸形率及男女性别比之间差异均无统计学意义(P>0.05);TL组的移植胚胎数明显少于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);TL组的临床妊娠率、着床率、活产率及抱婴回家率明显高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TL培养可改善IVF妊娠结局,对新生儿出生结局无不良影响,该技术是胚胎培养的安全有效方法.

目的 比较时差成像(time-lapse imaging,TLI)系统与常规胚胎培养的胚胎结局和临床妊娠结局,探讨基于TLI技术的胚胎优选模型的临床应用价值.方法 回顾性分析2019年6～11月在我院行体外受精/卵泡浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕的610个周期患者资料.按胚胎培养方式的不同分为常规培养组(n=543)和TLI组(n=67),常规培养组通过胚胎形态学评分优选胚胎,TLI组结合胚胎形态学和动力学方法优选胚胎.比较两组患者女方年龄、不孕年限、BM I、激素水平、胚胎结局、种植率和临床妊娠率等临床资料;再将两组根据女方年龄、获卵数和可用胚胎数进行分组,比较各亚组间种植率和临床妊娠率的差异.结果 两组患者间的一般资料和获卵数、正常受精数、可用胚胎数、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05);TLI组的卵母细胞利用率显著高于常规培养组(37.15％vs.35.30％)(P<0.05).进行新鲜周期移植的两组患者在移植日的子宫内膜厚度和移植个数上均无显著性差异(P>0.05),TLI组的种植率和临床妊娠率较常规培养组略有增高,但无显著性差异(P>0.05).亚组分析显示,不同年龄段,TLI组的种植率和临床妊娠率较常规培养组均略有提升,但无显著性差异(P>0.05);获卵数≥10个或D3可用胚胎数/移植个数>3时,TLI组的临床妊娠率和种植率较常规培养组均有增高趋势,但无显著性差异(P>0.05).结论 TLI系统可显著提高卵母细胞利用率,TLI优选模型是一种简单的胚胎优选方案;获卵数>10个或D3可用胚胎数/移植胚胎数>3时,T L I胚胎优选方案的种植率和临床妊娠率较常规优选方案可能有所改善.