目的 探讨凉血解毒化瘀方对慢加急性肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型小鼠的治疗作用及其对受体Toll样受体4(TLR4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响.方法 采用四氯化碳、细菌脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合诱导法构建慢加急肝衰竭小鼠模型;生化分析检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)肝功能指标.肝组织病理学检查.荧光定量PCR检测肝组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1 β)、TLR4的mRNA表达.CCK8筛选凉血解毒化瘀方对Raw264.7细胞的干预浓度,酶联免疫吸附法检测巨噬细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量.蛋白免疫印迹法检测TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白(TLR4、NF-κB、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、p-JNK、JNK)的表达.结果 与ACLF模型组比较,凉血解毒化瘀方可降低血清ALT、AST、TBIL含量,减少肝组织细胞坏死、纤维化、炎症细胞浸润程度,及肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4的mRNA表达,并降低肝组织TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达.细胞实验进一步发现凉血解毒化瘀方可抑制巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β分泌,下调TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达.结论 凉血解毒化瘀方能有效改善ALCF小鼠肝功能、抑制其炎症反应的疗效,其机制与其下调TLR4/JNK/NF-κB通路有关.

目的:探究异泽兰黄素(Eupatilin)对破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化的作用和分子机制.方法:CCK-8法检测不同浓度的Eupatilin对破骨细胞前体细胞RAW264.7以及小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived mac-rophages,BMDMs)细胞活性的影响.用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7和BMDMs分化形成破骨细胞,同时使用不同浓度的Eupatilin(5、10、20 μmol/L)干预,通过TRAP染色和F-actin染色评价Eupatilin对RANKL诱导的破骨细胞形成作用,qRT-PCR和Western blot检测破骨细胞相关标志基因的表达,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB(NF-κB)信号通路分子的磷酸化水平.结果:20 μmol/L Eupatilin对破骨细胞的分化具有显著的抑制作用,同时对相关标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)、组织蛋白酶 K(cathep-sin K,CTSK)等的表达也表现出有效的下调作用.Western blot结果显示Eupatilin显著抑制了 RANKL诱导的MAPK和NF-κB信号通路分子的磷酸化水平.结论:Eupatilin通过调控MAPK和NF-κB信号通路,对RANKL诱导的破骨细胞分化具有显著的抑制作用.

目的 探讨吡非尼酮(PFD)对慢性非细菌性前列腺炎(CNP)炎性反应和细胞凋亡的影响,及其作用机制.方法 将Wistar大鼠随机分为假手术组(注射等量的0.9％NaCl)、模型组(注射1％角叉菜胶)、阳性组(35 mg·kg-1塞来昔布)、compound C 组(150 mg·kg-1 PFD+0.2 mg·kg-1 compound C)和低、高剂量组(50和150 mg·kg-1 PFD),每组10只.用Von Frey纤维丝测痛仪测定机械疼痛阈值,用蛋白质印迹法检测组织相关蛋白的表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性因子的表达水平,用原位末端转移酶标记法(Tunel)实验检测细胞的凋亡情况.将Raw264.7细胞随机分为对照组(正常培养)、脂多糖(LPS)组(1 μg·mL-1 LPS)、PFD 组(1 μg·mL-1LPS+4 mmoL·L-1 PFD)、联合组(1 μg·mL-1 LPS+4 mmoL·L-1 PFD+10 μmoL·L-1 compound C).用ELISA法检测各组细胞炎性因子的表达水平.结果 假手术组、模型组、阳性组、高剂量组、compound C组的疼痛阈值分别为(45.33±5.09)、(23.13±3.20)、(35.27±4.65)、(33.96±2.65)和(30.30±4.77)g,磷酸化-腺苷酸活化蛋白激酶蛋白相对表达水平分别为0.84±0.11、0.33±0.07、0.31±0.05、0.65±0.09 和 0.20±0.04,白细胞介素-6 含量分别为(80.10±3.33)、(237.82±15.68)、(91.30±5.57)、(139.79±16.93)和(207.92±13.22)pg·mL-1,凋 亡率 分别为(3.57±0.18)％、(26.29±1.84)％、(12.16±0.76)％、(11.78±1.45)％和(15.76±1.05)％.模型组的上述指标与假手术组、高剂量组比较,compound C组的上述指标与高剂量组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).对照组、LPS组、PFD组和联合组的IL-6含量分别为(72.06±4.03)、(328.03±27.80)、(169.84±19.38)和(204.53±18.39)pg·mL-1,LPS组的上述指标与对照组、PFD组比较,联合组的上述指标与PFD组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 PFD通过抑制巨噬细胞向M1型极化,减轻炎症反应和凋亡,改善CNP盆腔疼痛.

目的:探讨lncRNA-Scarna10(Scarna10)对白藜芦醇(RSV)促进巨噬细胞极化的影响.方法:LPS构建RAW264.7巨噬细胞M1极化模型,RSV干预24 h,设置分组:control组、LPS组、RSV+LPS组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Scarna10表达水平,蛋白质免疫印迹法(western blotting)及免疫荧光检测巨噬细胞极化标志物(iNOS、Arg-1、CD206)表达.在RAW264.7细胞中沉默Scarna10,分为Si-NC组、LPS+Si-NC组、RSV+LPS+Si-NC组、RSV+LPS+Si-Scarna10组,检测转染后各组细胞内Scarna10、巨噬细胞极化标志物的表达.结果:经LPS诱导及白藜芦醇干预后,LPS组M1极化标志物iNOS蛋白表达水平升高,RSV+LPS组M2极化标志物Arg-1、CD206蛋白表达水平均升高,iNOS的蛋白表达水平下降,同时Scarna10在RSV+LPS组的表达较LPS组升高;沉默Scarna10后,与RSV+LPS+Si-NC组比较,RSV+LPS+Si-Scarna10组Scarna10表达及Arg-1、CD206蛋白表达水平均下降,iNOS的蛋白表达水平升高.以上各组间的差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:Scarna10在RSV干预后的M1型巨噬细胞中表达升高,沉默Scarna10可以逆转RSV对M1型巨噬细胞向M2型转化的促进作用.

目的 研究巨噬细胞来源含Scr同源区2 结构域蛋白酪氨酸磷酸酶 2(SHP2)通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)通路促进氧化应激和血管生成对子宫内膜异位症凋亡表型的影响.方法 收集2019 年1 月至2022 年12 月50 例子宫内膜异位症异位子宫内膜组织和50 例正常子宫内膜组织.选取健康雌性C57BL/6 小鼠12 只,采用子宫组织自体移植腹膜壁的方法建立小鼠子宫内膜异位症模型,将小鼠随机分为SHP2-NC组和SHP2-shRNA组,每组6 只,利用慢病毒感染的方法构建稳定敲低SHP2 基因的RAW264.7 细胞,经小鼠尾静脉注射.使用 HE 染色、Western blot、TUNEL 染色、CCK-8、成管实验分别检测子宫内膜组织的病理改变、CD68+巨噬细胞相关蛋白表达情况、内膜细胞凋亡、内膜细胞增殖活性以及内皮细胞血管生成情况.结果 相较于正常子宫内膜组织,异位子宫内膜组织CD68+巨噬细胞SHP2 表达水平升高(P＜0.05).而在SHP2-shRNA组子宫内膜异常病变区域间质细胞出现,但腺体和血管形成减少,同时SHP2、NADPH氧化酶 2(NOX2)、NADPH氧化酶 4(NOX4)、环氧化酶2(COX2)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2 表达水平低于SHP2-NC组,而p53、Caspase-3、Bax表达水平高于SHP2-NC组(P＜0.05).与SHP2-NC组比较,SHP2-shRNA组内膜细胞凋亡数目增加,细胞增殖活性降低,内皮细胞血管生成数量减少(P＜0.05).与 SHP2-NC 干预比较,SHP2-shRNA 干预使 p-PI3K、NOX4、COX2 和VEGF表达水平降低,而PTEN和p53 表达水平升高(P＜0.05).在LY294002 干预后,p-PI3K、NOX4、COX2 和VEGF表达水平较干预前下降,而PTEN和p53 表达水平较干预前上升(P＜0.05).在740 Y-P干预后,p-PI3K、NOX4、COX2和VEGF表达水平较干预前上升,而PTEN和p53 表达水平较干预前下降(P＜0.05).结论 SHP2 通过促进PI3K/PTEN通路活性来增强氧化应激和内皮细胞血管新生,同时抑制子宫内膜细胞凋亡.

目的:初步探讨铜绿假单胞菌外膜囊泡(outer membrane vesicles，OMVs)对巨噬细胞炎症反应的调节作用及其分子机制。方法:体外培养铜绿假单胞菌( P. aeruginosa)提取OMVs，不同浓度OMVs刺激RAW264.7细胞后，酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR，qRT-PCR)分别检测细胞上清中白细胞介素(interleukin，IL)-8及其mRNA的表达水平，并通过Western blot法检测细胞内核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)抑制蛋白(inhibitor of NF-κB，IκB)磷酸化水平；siRNA沉默Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)后，检测细胞中IL-8的分泌水平；最后通过髓样分化因子(myeloid differentiation factor88，MyD88)抑制剂以及NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理后OMVs刺激细胞，并检测细胞中IL-8的变化水平。 结果:不同浓度的OMVs(1、5、10 μg/mL)刺激处理RAW264.7细胞后，细胞内IL-8及其mRNA表达水平较未刺激组(0 μg/mL OMVs)均明显增高[IL-8(1、5、10 μg/mL OMVs)：(31.54±4.25)pg/mL、(82.04±10.20)pg/mL、(136.30±16.03)pg/mL比(16.42±6.14)pg/mL， t值分别为7.23，8.92和10.76， P值均<0.05; mRNA(1、5、10 μg/mL OMVs)：(1.25±0.09)，(2.34±0.12)、(4.25±0.43)比(1.00±0.07)， t值分别为5.24，7.98和9.63， P值均<0.05]，且呈一定的剂量依赖性。siRNA沉默TLR4后细胞中IL-8分泌水平较对照组显著降低[(46.07±18.23)pg/mL比(115.50±22.02)pg/mL， t＝9.25， P<0.05]。而通过MyD88抑制剂以及NF-κB抑制剂预处理后，RAW264.7细胞内IL-8的分泌水平较处理前也明显减少[MyD88抑制剂预处理后：(54.04±12.02)pg/mL比(134.02±18.01)pg/mL, t＝9.72， P<0.05；NF-κB抑制剂预处理后：(51.03±17.01)pg/mL比(142.01±22.02)pg/mL， t＝7.21， P<0.05]。 结论:铜绿假单胞菌OMVs能够通过TLR4以及NF-κB途径诱导巨噬细胞RAW264.7分泌IL-8。

目的:探讨WNT1诱导信号通路蛋白2对棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中巨噬细胞极化的调节作用。方法:用不同浓度的WISP2蛋白处理巨噬细胞系RAW264.7，采用Cell-Titer发光法测定细胞活力，确定WISP的作用浓度。将细胞分为对照组、棕榈酸处理组、棕榈酸联合不同浓度WISP2处理组(10 μg/L及100 μg/L)以及脂多糖处理组、脂多糖联合不同浓度WISP2处理组(10 μg/L及100 μg/L)。应用实时定量聚合酶链式反应检测各组巨噬细胞中M1及M2表型分子的mRNA水平；应用酶联免疫吸附实验检测巨噬细胞分泌的重要炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的蛋白水平。结果:和对照组相比，10 μg/L、100 μg/L WISP2处理组均未对RAW264.7细胞的活性产生影响，却显著上调 Tnfα(1.877±0.039、2.202±0.034， F＝309.7， P<0.001)、 Il6(1.418±0.056、1.506±0.059， F＝81.39， P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1( Mcp1)(1.620±0.014、1.982±0.125， F＝71.45， P<0.001)、趋化因子c-c配体( Ccl3)(1.892±0.118、1.942±0.132， F＝32.93， P<0.001)和诱导型-氧化氮合酶( iNos)(1.691±0.201、1.548±0.090， F＝13.60， P<0.05)mRNA表达，显著下调抗炎因子 Tgfβ(1.376±0.025、2.152±0.107， F＝1.846， P<0.05)、 CD206(2.123±0.031、3.139±1.663， F＝8.037， P<0.05)、 Il4(2.098±0.464、2.494±0.141， F＝48.68， P<0.01)、 Il10(1.303±0.216、1.574±0.274， F＝5.774， P<0.05)mRNA表达，使其向M1型巨噬细胞极化；与对照组相比，100 μmol/L棕榈酸能在转录及蛋白水平温和而显著地增加TNF-α、IL-6等炎症因子的表达；与棕榈酸单独刺激相比，给予WISP2联合处理进一步促进巨噬细胞炎症因子TNF-α[(589.4±17.0)ng/L、(692.6±83.4)ng/L， F＝56.38， P<0.05]、IL-6[(15.13±1.14)ng/L、(13.33±1.22)ng/L， F＝23.32， P<0.001]的蛋白表达及趋化因子 Mcp1(160.0±9.8、140.0±18.9， F＝141.1， P<0.0001)和 Ccl3(17.76±1.92、14.41±1.27， F＝125.2， P<0.0001)的mRNA的表达。与对照组相比，100 μg/L脂多糖在蛋白水平强烈刺激巨噬细胞TNF-α[(3444±423)ng/L， F＝71.20， P<0.0001]、IL-6[(497.0±41.2)ng/L， F＝63.50， P<0.0001]等炎症因子的高表达；与脂多糖单独刺激相比，给予WISP2联合处理进一步显著上调趋化因子 Mcp1(106.8±8.7、118.7±4.6， F＝251.5， P<0.0001)和 Ccl3(35.3±12.5、116.4±4.5， F＝160.1， P<0.0001)的mRNA的表达。 结论:脂肪因子WISP2能在棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中促进巨噬细胞向M1型极化，并且在不同炎症反应条件下其对巨噬细胞极化的调节作用不同。

目的:探讨高糖环境下基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对巨噬细胞生物学功能的影响及其机制。方法:体外建立RAW264.7巨噬细胞系，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SDF-1对巨噬细胞的毒性。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测高糖(22.5 mmol/L)和正常糖(5.5 mmol/L)对巨噬细胞相关蛋白表达的影响。实验分组：A组(对照)、B组(SDF-1)、C组(磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路抑制剂：LY294002)、D组(SDF-1+ LY294002)，Transwell实验检测巨噬细胞的迁移能力，Western blot检测各组相关蛋白的表达变化。两组间比较采用非配对 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:CCK-8实验结果显示，各组间比较差异无统计学意义( F＝0.464， P>0.05)。高糖组巨噬细胞SDF-1、血管内皮生长因子(VEGF)、SDF-1的特异受体(CXCR4)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达低于正常糖组(SDF-1、VEGF、CXCR4、MMP-9组间比较， t＝50.510、11.020、27.660、55.350，均 P<0.05)。Transwell实验中，A、B、C、D组迁移巨噬细胞数分别为(86.630±4.096)、(144.300±5.044)、(59.000±2.646)、(65.670±4.256)个。与A组比较，B组及C组差异有统计学意义( t＝21.460、5.574，均 P<0.05)。此外，SDF-1可以增加巨噬细胞CXCR4、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、MMP-9、VEGF的表达，而LY294002可以减少上述蛋白的表达(Western blot检测各蛋白，B组：CXCR4、PI3K、Akt、MMP-9、VEGF组间比较， t＝44.690、5.393、4.640、13.250、8.551，均 P<0.05；C组：PI3K、Akt、MMP-9、VEGF组间比较， t＝13.430、5.287、4.381、45.510,均 P<0.05)。 结论:高糖环境可以影响巨噬细胞SDF-1、VEGF、CXCR4及MMP-9的表达，SDF-1可能通过上调PI3K/Akt通路促进巨噬细胞分泌MMP-9及VEGF。

目的:探讨基于二氢卟吩e6（chlorin e6，Ce6）的光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）联合抗生素替硝唑（tinidazole，TNZ）对牙周炎大鼠的体内外抑制作用。方法:采用正畸钢丝结扎法对18只SD大鼠建立牙周炎模型，建模成功后按随机数字表法随机分为以下6组（每组3只）：阳性对照组、Ce6 组、TNZ 组、混合物Ce6/TNZ 组、Ce6加光照（Ce6+L）组、Ce6/TNZ加光照（Ce6/TNZ+L）组；采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）实验考察Ce6（质量浓度为0~20 mg/L）、TNZ（质量浓度为0~16.6 mg/L）及其混合物Ce6/TNZ对成纤维细胞L929的毒性；采用荧光探针法检测Ce6、TNZ和Ce6/TNZ及结合635 nm激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min）对牙周炎大鼠牙菌斑生物膜中活性氧生成的触发效应，评价Ce6的光动力性能；采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验和活菌/死菌染色法考察各种治疗的体外抗菌性能，并计算Ce6介导的PDT联合TNZ的合用指数（combination index，CI）。采用凋亡试剂盒流式检测各种治疗对鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的诱导效应。各组大鼠局部给药后行激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min），治疗结束后用显微CT评价PDT联合TNZ对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的抑制效应。 结果:Ce6、TNZ、Ce6/TNZ在预设浓度范围内L929细胞存活率均在90%以上。激光照射后，Ce6与Ce6/TNZ的牙菌斑生物膜中呈现出非常显著的绿色荧光，触发了菌斑内活性氧大量生成；但在不同浓度下，Ce6/TNZ的牙菌斑存活率分别为（85.4±5.5）%、（76.0±8.9）%、（61.7±0.6）%、（56.3±2.6）%、（43.5±0.6）%，均显著低于Ce6和TNZ组（ P<0.01），且各药物浓度点对应的CI<1.0，具有显著的协同效应。Ce6+L与Ce6/TNZ+L具有显著强于Ce6与Ce6/TNZ的细胞凋亡诱导活性（ P<0.01）。牙周炎大鼠体内，Ce6/TNZ联合激光照射能有效抑制牙槽骨的吸收，牙槽骨体积、骨体积分数分别为（1.49±0.07）mm 3和（47.08±0.71）%，颊、腭侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶距离分别减小至（2.13±0.07）和（1.94±0.10）mm。 结论:基于Ce6的PDT联合抗生素TNZ对牙周炎大鼠有协同治疗作用，能有效杀伤牙菌斑，诱导巨噬细胞凋亡，抑制牙槽骨吸收。

目的:观察肌球蛋白10(Myo 10)对破骨细胞的分化及功能的影响，并探讨其机制。方法:采用核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落生长因子(M-CSF)诱导RAW264.7细胞(中国科学院上海细胞生物研究所)向破骨细胞分化，随机分为抗Myo 10组和对照组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定并定量TRAP＋破骨样细胞的数量。使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测破骨细胞分化及功能特异性基因的转录水平变化。将C57BL/6小鼠随机分为Myo 10 KO组和对照组，通过组织学染色苏木精-伊红(HE)和MicroCT评估Myo 10抑制对骨量的影响。两组间比较采用 t检验。 结果:TRAP染色显示Myo 10抑制将促进破骨细胞的分化效率，TRAP＋破骨细胞的数量在抗Myo 10组为(65.6±8.4)个，高于对照组的(41.3±6.2)个，差异有统计学意义( t＝4.013， P<0.05)；RT-PCR结果提示Myo 10抑制反而提高了基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化T-细胞核因子1(NFATc1)及组织蛋白酶K(CtsK)的表达，分别为对照组表达值的(2.2±0.3)、(1.9±0.2)和(1.5±0.2)倍，差异有统计学意义( t＝5.410、6.086、3.602， P<0.05)；在体实验则提示Myo 10抑制后将增强骨吸收功能，出现骨质疏松样改变。 结论:Myo 10的抑制能促进NFATc1的表达，促进破骨细胞分化和骨吸收功能，导致骨量减少。