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肌球蛋白10对骨吸收过程中破骨细胞分化及功能的影响
编辑人员丨4天前
目的:观察肌球蛋白10(Myo 10)对破骨细胞的分化及功能的影响,并探讨其机制。方法:采用核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落生长因子(M-CSF)诱导RAW264.7细胞(中国科学院上海细胞生物研究所)向破骨细胞分化,随机分为抗Myo 10组和对照组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定并定量TRAP+破骨样细胞的数量。使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测破骨细胞分化及功能特异性基因的转录水平变化。将C57BL/6小鼠随机分为Myo 10 KO组和对照组,通过组织学染色苏木精-伊红(HE)和MicroCT评估Myo 10抑制对骨量的影响。两组间比较采用 t检验。 结果:TRAP染色显示Myo 10抑制将促进破骨细胞的分化效率,TRAP+破骨细胞的数量在抗Myo 10组为(65.6±8.4)个,高于对照组的(41.3±6.2)个,差异有统计学意义( t=4.013, P<0.05);RT-PCR结果提示Myo 10抑制反而提高了基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化T-细胞核因子1(NFATc1)及组织蛋白酶K(CtsK)的表达,分别为对照组表达值的(2.2±0.3)、(1.9±0.2)和(1.5±0.2)倍,差异有统计学意义( t=5.410、6.086、3.602, P<0.05);在体实验则提示Myo 10抑制后将增强骨吸收功能,出现骨质疏松样改变。 结论:Myo 10的抑制能促进NFATc1的表达,促进破骨细胞分化和骨吸收功能,导致骨量减少。
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编辑人员丨4天前
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利用包载骨形态发生蛋白-4腺病毒异位成骨移植修补骨缺损的研究
编辑人员丨4天前
目的:构建包载骨形态发生蛋白(BMP)-4的腺病毒并利用其骨骼肌内异位成骨特性,探索移植异位形成的自体骨进行骨缺损修补的体内效果。方法:2018年6月至2020年3月,将BMP-4基因构建入AAV载体内,纯化出AAV-BMP-4。将AAV-BMP-4吸附于明胶海绵(Gelfoam)上并植入郑州大学实验动物中心SPF饲养室饲养的SCID小鼠的股肌袋内,4周后进行AAV-BMP-4的活性测定。在小鼠背部皮下应用AAV-BMP-4,观察骨骼肌肉诱导异位成骨,待骨组织形成稳定后,取出这些骨组织移植入事先制备好的小鼠的颅骨缺损模型中,观察其骨缺损修复效果。结果:成功构建出纯化后浓度达5×10 12 vp/ml的AAV-BMP-4病毒颗粒。病毒颗粒植入小鼠的股肌袋内可成功诱导异位骨组织的形成,小鼠背部皮下植入AAV-BMP-4+Gelfoam复合体后4周出现了少量的新生骨组织,骨量达1 cm×2 cm×2 cm。X线和MicroCT的检查均证实了小鼠的背部皮下骨组织形成。经修剪移植入小鼠颅骨缺损模型处的骨组织在植入缺损处后,没有出现异常增生的现象,而是不断地随着时间的推移进行着外形的轻微改建,颅骨缺损得到了良好的修复。 结论:体外构建的AAV-BMP-4具有良好的生物学活性,AAV-BMP-4+Gelfoam在骨骼肌肉中可有效诱导成骨,利用新生骨组织可以成功地修复颅骨缺损的动物模型。移植的骨组织植入颅骨缺损后未出现过度生长的现象,且与宿主骨结合良好。
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编辑人员丨4天前
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连接蛋白-43在大鼠激素性股骨头坏死组织和成骨细胞中的表达变化及调控机制
编辑人员丨4天前
目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在大鼠激素性股骨头坏死组织和成骨细胞中的表达变化及调控机制。方法:建立大鼠股骨头坏死模型,分别采用MicroCT和HE染色观察骨小梁破坏程度和空骨陷窝发生率;采用RT-PCT和Western blot检测模型组和对照组中Cx43和PI3K/Akt信号通路相关分子及成骨相关蛋白的表达水平;进一步分离大鼠成骨细胞进行体外培养,在地塞米松(dexamethasone,Dex)作用下,采用Western blot法和免疫荧光检测Dex对成骨细胞中Cx43表达的影响;采用Western blot法检测GCs对PI3K/Akt/β-catenin信号通路相关分子表达的影响,并采用Akt激活剂(SC79)和PI3K抑制剂(LY294002)研究Dex对成骨细胞中Cx43表达调控的分子机制;采用免疫共沉淀和siRNA技术研究β-catenin与Cx43之间的调控关系。结果:成功建立大鼠激素性股骨头坏死(GC-ONFH)模型,证明Cx43在GC-ONFH模型组中的表达水平显著低于对照组,且Cx43表达水平与PI3K/Akt信号通路相关分子及成骨相关蛋白Runx2、ALP和Collagen I type(COL)表达呈正相关;此外,分离大鼠成骨细胞体外培养,在Dex作用下,随作用时间的延长,成骨细胞中Cx43的表达与p-PI3K、p-Akt和β-catenin表达逐渐下降,且在SC79预处理下,能够显著逆转GCs对Cx43表达的抑制作用,而LY294002能够显著增强GCs对Cx43的抑制作用;且免疫共沉淀结果表明β-catenin表达与Cx43表达之间存在紧密联系,进一步研究表明β-catenin-siRNA能够明显下调Cx43的表达。结论:在激素作用下,Cx43在骨组织和成骨细胞中的表达水平显著下降,其可能的机制是GCs通过抑制PI3K/Akt/β-catenin信号通路进而抑制Cx43的表达,为进一步研究Cx43在激素性股骨头坏死发病过程中的作用奠定新的理论基础。
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编辑人员丨4天前
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金黄色葡萄球菌感染所致骨量丢失的分子机制研究
编辑人员丨4天前
目的:探讨金黄色葡萄球菌感染所致骨量丢失的分子机制。方法:将30只雄性8周龄C57BL/6小鼠随机分为3组( n=10):对照组、感染组及感染+JAK抑制剂(JAKi)组。造模2周后于股骨和胫骨处取材。通过Micro-CT重建并分析骨小梁体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间距(Tb.Sp)以检测骨量改变;骨钙素免疫组化、Goldner三色染色用于定量成骨细胞;抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色用于定量破骨细胞;下载并分析GSE166522数据集探索金黄色葡萄球菌感染与骨细胞衰老及JAK/STAT通路的关系;Senescence β-Galactosidase、Osterix和P16免疫荧光共定位用于观察细胞衰老。 结果:MicroCT结果显示感染组目标区域松质骨的骨量较对照组显著丢失,骨钙素免疫组化、Goldner三色染色结果提示感染组的成骨细胞数量较对照组显著降低,以上比较差异均有统计学意义( P<0.05)。TRAP染色提示感染组与对照组的破骨细胞数量变化差异无统计学意义( P>0.05)。生物信息学分析发现金黄色葡萄球菌感染会引起骨细胞衰老且在感染条件下JAK/STAT通路被激活。Senescence β-Galactosidase染色提示感染组骨组织衰老细胞较对照组显著增多,Osterix和P16免疫荧光共定位提示感染组衰老的骨祖细胞数量较对照组显著增多,以上比较差异均有统计学意义( P<0.05)。与感染组相比,感染+JAKi组衰老的骨祖细胞数量明显减少且骨量丢失得到了部分逆转。 结论:金黄色葡萄球菌通过JAK/STAT通路诱导骨祖细胞衰老并最终导致骨量丢失。
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编辑人员丨4天前
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长链非编码RNA Crnde通过调节Wnt/β-连环蛋白信号通路影响小鼠成骨细胞增殖的研究
编辑人员丨4天前
目的:观察长链非编码RNA Crnde通过调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对小鼠成骨细胞增殖的影响。方法:培养MC3T3-E1成骨细胞,随后诱导分化3周,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Crnde表达,应用CRISPR-Cas9方法构建Crnde基因敲除小鼠模型,同时以野生型小鼠作为对照,分为Crnde基因敲除小鼠组( n=25)和野生型小鼠组( n=25),小鼠处死前12 h腹腔注射BrdU进行染色观察成骨细胞增殖,检测血清1型前胶原N末端(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-Ⅰ)表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织Wnt和β-catenin蛋白表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,分别运用Osteomeasure系统和MicroCT分析进行骨组织形态计量分析,双荧光素酶报告基因验证Crnde与Wnt蛋白的靶向调节关系。组间比较采用 t检验。 结果:成骨细胞分化过程Crnde表达情况为在诱导的3周时间内,随着时间延长,Crnde表达明显增加,在第3周表达最高( P>0.05);Wnt和β-catenin在Crnde -/-小鼠和正常小鼠中表达情况中,蛋白质印迹法(Western blot)结果显示,Crnde -/-组中Wnt和β-catenin蛋白表达低于WT小鼠组( P<0.05);BrdU免疫荧光染色结果显示,正常对照组小鼠胫骨存在大量BrdU阳性细胞,而Crnde -/-小鼠细胞显著减少;TUNEL染色显示正常对照组小鼠与Crnde -/-小鼠小鼠凋亡成骨细胞数量差异无统计学意义( P>0.05);μCT和Osteomeasure系统结果显示,椎骨的组织形态分析BV/TV,WT组[(19.43±1.53)%],Crnde -/-组[(20.14±1.56)%],Crnde -/-鼠的小梁和皮质骨均显示出低骨量表型,Crnde -/-小鼠的骨形成参数均与野生型小鼠差异有统计学意义( P<0.05);Crnde -/-小鼠血清P1NP和CTX-I分别为(15.62±1.23) μg/L和(12.36±1.12) μg/L,WT小鼠血清P1NP和CTX-I分别为(22.81±1.56) μg/L和16.21±1.21) μg/L,Crnde -/-小鼠组均比WT小鼠组明显下降( P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示Crnde模拟物显著降低了野生型组荧光素酶活性( P<0.05),而对突变组荧光素酶活性基本无影响( P>0.05)。 结论:Crnde通过Wnt/β-catenin信号传导调节骨形成。
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编辑人员丨4天前
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血友病性关节炎和骨关节炎软骨下骨的组织形态学分析
编辑人员丨4天前
目的:分析血友病性关节炎(hemophiliac arthritis,HA)与骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者软骨下骨组织形态学的差异,探讨HA软骨下骨异常骨重塑的机制。方法:选取2021年1月至2023年6月于安徽医科大学第二附属医院因HA行初次全膝关节置换术的15例男性患者,年龄(32.60±7.58)岁(范围22~45岁),均为A型血友病且凝血因子Ⅷ抗体为阴性;选取同期因OA行初次全膝关节置换术的15例男性患者,年龄(75.67±5.09)岁(范围71~87岁)。获取术中截去的胫骨平台骨组织,以MicroCT扫描评估两组胫骨平台标本软骨下骨的形态学参数,HE和蕃红"O"固绿染色评估两组软骨下骨板(subchondral bone plate,SBP)和骨小梁组织结构变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色评估软骨下骨破骨细胞分化水平,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-A和Osterix免疫组化染色评估软骨下骨血管生成和成骨细胞分化水平。结果:MicroCT扫描结果显示:HA组骨体积分数(bonevolume fraction,BV/TV)内侧平台为25.14%±0.70%、外侧平台为22.31%±0.53%;骨小梁连接密度(connectivity density,Conn.D.)内侧平台为(4.20±0.10)1/mm 3、外侧平台为(3.27±0.08)1/mm 3;骨密度(bone mineral density,BMD)内侧平台为(0.288±0.006)g/cm 3、外侧平台为(0.285±0.004)g/cm 3;骨小梁厚度(trabecularthichness,Tb.Th)内侧平台为(0.257±0.008)mm、外侧平台为(0.206±0.008)mm;骨小梁数量(trabecularnumber,Tb.N)内侧平台为(0.984±0.043)1/mm、外侧平台为(0.908±0.026)1/mm;骨小梁间距(trabecularseparation,Tb.Sp)内侧平台为(0.683±0.008)mm、外侧平台为(0.808±0.010)mm;HA组内、外侧平台除Tb.Sp高于OA组,BV/TV、Conn.D.、BMD、Tb.Th和Tb.N均低于OA组,差异均有统计学意义( P<0.05)。HE和蕃红"O"固绿染色结果显示:HA组SBP厚度内侧平台为(177.43±6.42)μm,高于外侧平台的(117.96±5.08)μm,差异有统计学意义( P<0.05)。TRAP染色结果显示:HA组内侧平台软骨下骨TRAP阳性破骨细胞数为33.4%±3.1%,高于外侧平台的25.1%±2.3%,差异有统计学意义( P<0.05)。免疫组化染色结果显示:HA组内侧平台软骨下骨VEGFA阳性细胞数为34.1%±5.9%,高于外侧平台的25.9%±3.7%;内侧平台软骨下骨Osterix阳性细胞数为14.6%±1.4%,高于外侧平台的5.8%±1.1%,HA组内、外侧平台软骨下骨VEGFA阳性细胞数较OA组多,Osterix阳性细胞数较OA组少,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:与OA组相比,HA组软骨下骨的骨破坏程度更高、骨小梁更稀疏,潮线基本消失,破骨细胞分化和血管生成水平更高,成骨细胞分化水平更低,表现出更严重的骨质疏松,但SBP却增厚。结果提示可以通过干预HA软骨下骨异常骨重塑和血管生成达到延缓HA进展和治疗的作用。
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编辑人员丨4天前
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瘦素受体过表达状态对双足直立小鼠脊柱侧凸发生发展的影响
编辑人员丨4天前
目的:探究瘦素受体过表达状态对双足直立小鼠脊柱侧凸发生发展的影响。方法:选取30只购自维通利华的3周龄雌性C3H小鼠,分为A、B、C 3组,每组10只,A组:对照慢病毒正常小鼠;B组:瘦素受体过表达正常小鼠;C组:瘦素受体过表达双足直立小鼠,C组小鼠麻醉后将小鼠双前肢截肢,并切除鼠尾。术后3 d,3组小鼠分别颅内注射对应的慢病毒,随后每周注射两次。20周后,取3组小鼠脑脊液及血清,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其中瘦素、可溶性瘦素受体及甲状腺素(T4)水平;行X线检查,观察各组小鼠脊柱侧凸发生率及严重程度;行MicroCT检查,检测各组小鼠骨量丢失程度。组间计量数据采用 t检验。 结果:ELISA结果表明,瘦素受体过表达后小鼠脑脊液中可溶性瘦素受体(3 543±502、3 542±777)、甲状腺素(21.940±4.387、16.120±2.930)、瘦素(2 644.0±271.8、2 148.0±372.3)含量高于A组(2 260.000±67.230、7.633±2.901、809.300±552.000, t=4.385、2.847、4.710、3.564、8.435、5.110, P<0.05)。血清中可溶性瘦素受体(2 444±594、2 214±453)、甲状腺素(2.365±0.696、2.444±0.316)含量明显高于A组(742.700±438.100、1.059±0.190, t=3.992、4.043、3.135、6.513, P<0.05)。X线结果显示B组小鼠(14.100±5.672)及C组(26.600±4.651)小鼠平均Cobb角明显大于A组(1.400±0.656, t=3.853、9.293, P<0.05)。且C组小鼠脊柱侧凸发生率高于B组,平均Cobb角高于B组(26.600±4.651比14.100±5.672, t=2.952、 P<0.05)。MicroCT结果表明,C组小鼠骨体积分数降低(0.250±0.026比0.337±0.038, t=-3.250, P<0.05)。 结论:瘦素受体过表达会导致小鼠脊柱侧凸发生率及严重程度上升。
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编辑人员丨4天前
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凝聚层黏接剂用于湿环境下骨黏接及促骨修复的实验研究
编辑人员丨2024/7/13
目的 使用聚乙烯醇、单宁酸、羟基磷灰石,制备具有湿环境下骨黏接能力及促骨修复能力的新型凝聚层黏接剂并验证其效果.方法 以氰基丙烯酸酯黏接剂为对照组,制备两款新型凝聚层黏接剂,使用红外光谱进行表征,并测量3种黏接剂在湿环境下的骨黏接效果.使用CCK-8法和活死染色评估3种黏接剂浸提液对MC3T3-E1细胞的影响.将3种黏接剂植入兔股骨缺损,使用显微CT对其骨修复能力进行体内实验验证.结果 成功构建了PVA@TA、PVA@TA@HA两种凝聚层黏接剂,红外光谱分析结果确定了合成的有效性.两种凝聚层黏接剂在湿环境下的水下黏接强度[(70.2±2.1)kPa、(63.3±2.6)kPa]高于氰基丙烯酸酯的[(22.6±3.8)kPa],差异有统计学意义(P<0.01).CCK-8 法及活死染色均证明了PVA@TA、PVA@TA@HA黏接剂浸提液培养条件下MC3T3-E1细胞的增殖情况好于氰基丙烯酸酯黏接剂浸提液.显微CT定量分析证明了PVA@TA@HA黏接剂植入骨缺损后,新生骨生长情况优于其他两组,体现出更优异的促骨修复能力.结论 成功构建了以聚乙烯醇、单宁酸、羟基磷灰石为基础的凝聚层黏接剂,相比于传统的氰基丙烯酸酯黏接剂,具有更优异的湿环境下骨黏接性能及促骨修复效果.
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编辑人员丨2024/7/13
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碘乙酸钠诱导大鼠颞下颌关节骨关节炎动物模型的建立
编辑人员丨2024/7/13
目的 通过对碘乙酸钠(monosodium iodoacetate,MIA)刺激的大鼠颞下颌关节骨关节炎的病理表现及结构变化的研究,寻找可诱发大鼠颞下颌关节骨关节炎的适宜药物浓度及作用时间.方法 选取6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠24只,随机分为4组.1组关节内注射0.9%的生理盐水,为空白组.其余3组按照0.5 mg,1.0 mg,2.0 mg三种不同浓度MIA进行颞下颌关节上腔注射,单个关节腔注射体积为50 μL.观察4周后,处死大鼠,取颞下颌关节髁突进行分析.采用苏木精-伊红(HE)染色,番红O-固绿染色,TRAP染色,CD31免疫荧光染色及显微CT(micro computed tomography,MicroCT)扫描髁突.染色标本用改良Mankin评分法评估颞下颌关节骨组织的病理改变.结果 HE和番红O-固绿染色结果显示,注射MIA1.0mg/50uL,2.0 mg/50uL组髁突软骨厚度减少,软骨细胞层数减少,排列紊乱,骨髓腔变大.0.5 mg/50uL组,未见明显变化;CD31免疫荧光染色显示1.0 mg/50 uL,2.0 mg/50 uL组可见软骨和软骨下骨连接处有新生血管,TRAP染色三组均未见破骨细胞活化.MicroCT髁突扫描显示仅2.0 mg/50 uL组可见髁突骨皮质及骨松质的破坏影像.结论 1.0 mg/50 uL是MIA诱导大鼠TMJ典型OA样病变开始出现病理学改变的最小有效剂量,可以作为早期颞下颌关节器质性病变的预防性治疗的动物模型.2.0 mg/50 uL或更高浓度的药物注射可能会得到影像学中典型的OA样改变,可以用于长期观察以及OA治疗的动物模型.
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编辑人员丨2024/7/13
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番茄红素、叶黄素和植物甾醇联合应用对绝经后骨质疏松症小鼠肠道菌群的影响
编辑人员丨2024/5/11
目的:探索番茄红素、叶黄素和植物甾醇联合应用对绝经后骨质疏松症小鼠肠道菌群的影响.方法:采用双侧去卵巢(OVX)法建立绝经后骨质疏松模型,将60只12周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(sham组),OVX组,番茄红素、叶黄素和植物甾醇联合干预低剂量(L)、中剂量(M)、高剂量(H)组,戊酸雌二醇组(E2组),每天1次灌胃给药,持续12周.Mi-cro-CT扫描分析小鼠股骨骨密度(BMD)和骨微结构变化;苏木精—伊红(HE)染色观察各组股骨组织病理学改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨中骨钙素(BGP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)的表达;16S rDNA扩增子测序检测分析粪便中V3~V4区菌群基因.结果:HE结果显示,OVX组小鼠骨松质结构改变,骨小梁稀疏松散、粗细不匀,大量断裂,骨髓腔间距宽;M组、H组的骨结构改善,且H组接近于sham组;Micro-CT结果显示,与sham组相比,OVX组的BMD、小梁体积百分比(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数(Tb.N)和连接密度(Conn.Dn)显著降低,骨表面积/组织体积(BS/TV)、骨小梁空隙(Tb.SP)、结构模型指数(SMI)显著增加;与OVX组相比,M组和H组BMD、BV/TV、BS/TV、Tb.N、Conn.Dn显著增加,H组Tb.Sp、SMI显著降低;ELISA结果显示,与OVX组相比,M组、H组的BGP显著升高,TRAP5b显著降低.16S rDNA扩增子测序结果显示,在门水平上,H组的疣微菌门相对丰度较OVX组明显增加,拟杆菌门相对丰度较OVX组降低;在属水平上,H组艾克曼菌属、毛螺菌科_NK4A136菌属、双歧杆菌属、回肠杆菌属和毛螺旋菌属的相对丰度较OVX组升高,杜氏杆菌属、乳酸杆菌属、螺杆菌属和另枝菌属的相对丰度较OVX组降低;线性判别分析效应(LEf Se)分析结果显示,H组中的放线菌门、放线菌门未确定菌纲、双歧杆菌目、双歧杆菌属、双歧杆菌科、Ileibacterium valens和回肠杆菌属丰度富集.结论:番茄红素、叶黄素和植物甾醇联合应用可以明显改善OVX小鼠骨微结构,缓解骨丢失,其机制可能与调控肠道菌群结构和丰度相关.
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编辑人员丨2024/5/11
