目的:探讨巴西苏木素对膀胱癌细胞的抑制作用及其机制。方法:采用化学合成法制备巴西苏木素。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测合成的巴西苏木素对膀胱癌T24细胞和BIU87细胞增殖的抑制作用，采用蛋白质组学技术检测巴西苏木素对两种细胞蛋白表达水平的影响，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及蛋白质印迹法验证巴西苏木素对两种细胞的细胞质分裂调控蛋白1（PRC1）基因水平和蛋白水平表达的影响。结果:MTT法检测显示，巴西苏木素可明显抑制膀胱癌T24和BIU87细胞的增殖，其对T24细胞和BIU87细胞的半抑制浓度（ IC50）分别为9.9 μg/ml和5.1 μg/ml；蛋白质组学检测结果显示，巴西苏木素可下调两种细胞中PRC1蛋白的表达，并经qRT-PCR及蛋白质印迹法得到了验证。 结论:巴西苏木素可能通过下调PRC1表达抑制膀胱癌细胞的增殖。

目的 探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路.方法 建立MRSAATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN8、16和32 μg/mL组及对照组;通过结晶紫法测定BN对MRSA生物膜的抑制作用;刚果红平板法、硫酸-苯酚法检测BN对细胞间多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)合成的影响;使用real-time PCR(qRT-PCR)方法验证胞间黏附素操纵子icaA和icaD转录水平;分析高通量转录组测序可能存在的生物膜抑制基因;通过qRT-PCR、Western blot方法对相关基因及蛋白加以验证;通过皮下埋植静脉导管建立MRSA生物膜感染小鼠模型进一步验证BN疗效.结果 与对照组相比,不同浓度的BN组均能显著减少MRSA生物膜及PIA生成,其中在最低剂量8 μg/mLBN作用下,MRSA生物膜形成量下降40.17％(P＜0.01)、PIA减少55.56％(P＜0.01);通过qRT-PCR验证不同浓度的BN组均能显著抑制icaA和icaD基因的表达,其中在8 μg/mL浓度下,icaA和icaD基因的表达量分别比对照组降低了59.03％(P＜0.01)、48.33％(P＜0.05);高通量测序显示sarA下调-1.458 log2;qRT-PCR、Western blot结果显示,BN能显著抑制sarA转录及其蛋白表达;通过体内实验显示,BN能有效抑制小鼠体内MRSA生物膜的形成.结论 BN通过抑制SarA的表达,减少PIA的合成,进而干预生物膜的形成.

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是心肌梗死患者进行血运重建时的严重并发症.核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路在MIRI病理进程中具有重要意义.目前研究发现,中药对缺血再灌注引起的心肌损伤具有很好的效果.本文基于Nrf2/HO-1信号通路总结中药复方和单体干预MIRI的作用机制,发现中药复方(益心方、温阳通脉方、定心方Ⅰ号方)以及中药单体萜类(银杏内酯、黄芪甲苷、人参皂苷等)、酚类(巴西苏木素、苏木酮A、白藜芦醇等)、醌类(芦荟素、大黄素)等均可通过激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制氧化应激、炎症反应等,从而减轻MIRI.

目的:测定巴西苏木素和原苏木素B在马钱子配伍苏木(马苏)不同比例水煎剂中的含量变化.方法:制备马苏煎液1:6组、1:8组、1:12组以及1:24组,采用高效液相色谱法(HPLC)检测巴西苏木素和原苏木素B含量的变化.色谱柱为Agilent SBC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%醋酸,梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为285nm.结果:经检测马苏煎液中两种化学成分的线性范围保持在0.025~1.50mg/mL,两者的相对保留值是0.9997.结论:证明了不同比例的马苏水煎液中巴西苏木素与原苏木素B的含量均保持在梯度式升高的趋势上.

目的:通过研究巴西苏木素在大鼠体内的代谢产物,探析其代谢途径.方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对灌胃巴西苏木素(30 mg·kg-1)后大鼠的生物样品(粪便、尿液、血浆、胆汁)进行分析,流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL min-1,电喷雾离子源,负离子模式,信息依赖性采集模式进行检测,离子喷雾电压-4.5 kV,离子源温度500℃,碰撞电压100 eV,碰撞能量-35 eV,锥孔气流50 L·h-1,m/z100 ～1 100,使用PeakView 1.2软件进行数据处理,提取给药样品的总离子流图谱与空白生物样品对比,通过保留时间、精确相对分子质量及二级质谱的比较与分析,筛选并鉴定其可能的代谢产物.结果:共检测出23个代谢产物,这23个代谢产物是巴西苏木素在大鼠体内甲基化、脱氧、缩氢、羧酸化、水合作用、硫酸化、葡糖糖醛酸化后产生的,其中以硫酸化、葡糖糖醛酸化为主.结论:本实验首次对巴西苏木素在大鼠体内的代谢情况进行研究,能够为该药物的药效学和药理学研究提供一定的物质基础.

目的:建立蒙药苏木六味汤散的质量标准.方法:采用薄层色谱(TLC)定性鉴别制剂中苏木,木香,槟榔,高良姜等;以高效液相色谱法(HPLC)测定苏木中巴西苏木素和原苏木素B的含量:色谱柱Topsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(11:89),检测波长为285 nm,流速1 mL/min,柱温30 ℃,进样量为10 μL.结果:苏木,木香,槟榔,高良姜TLC图斑点清晰、专属性强;巴西苏木素与原苏木素B的进样量分别在112.875~564.375 ng、71.975~359.875 ng范围内与各自峰面积呈良好的线性关系(r分别为0.9997和0.9999).精密度、稳定性、重复性实验RSD%均小2.0%,加样回收率分别为99.24%、98.06%,RSD分别为0.12%、0.93%.结论:所建立的定性鉴别方法专属性强、重复性好、定量方法简便、准确、可靠,可用于传统蒙药苏木六味汤散的质量控制.

苏复宁洗液是我院针对膀胱癌术后高复发率而自主研发的术后灌注中药制剂,是以中药材苏木的水提物制备而来的,其抗癌有效成分是巴西木素,与其他的化疗药物比较,其优点是:疗效确切,毒副作用小,安全性高[1].近年来研究结果表明,巴西木素对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用[2],本研究以人肝癌HepG2细胞为靶细胞, 观察离体条件下苏复宁洗液在不同浓度下对靶细胞的抑制活性,以探讨苏复宁洗液的抗肿瘤活性.

目的 探讨巴西苏木素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制,为临床用药提供理论依据.方法 用MTT法检测巴西苏木素对Tca8113细胞的增殖作用;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;Annexin V/PI双染色检测巴西苏木素对Tca8113细胞凋亡程度的影响;Western blot法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase3及自噬相关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B、p62的表达;使用AMPK通路抑制剂与巴西苏木素共同作用于Tca8113细胞,并检测通路相关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B的表达.结果 MTT结果表明,巴西苏木素能明显抑制Tca8113细胞的增殖,24 h时IC50为31.17μmol/L;Hoechst33342染色结果显示,巴西苏木素能使Tca8113细胞发生凋亡形态学改变,且与浓度正相关;Annexin V/PI染色结果显示,不同浓度巴西苏木素作用24 h后,细胞凋亡数和凋亡率均高于空白对照组;Western blot检测相关蛋白表达结果表明,巴西苏木素可抑制抗凋亡蛋白bcl-2,促进凋亡关键蛋白bax和cleaved-caspase3的表达,同时增加LC3B和p-AMPK的表达,降低p62和p-mTOR表达.在与抑制剂合用后,p-AMPK与LC3B表达量虽仍略高于空白对照组,但与单纯使用巴西苏木素相比均明显降低,而p-mTOR的表达较巴西苏木素组则明显升高(P<0.05).结论 巴西苏木素能抑制Tca8113细胞增殖并促进其凋亡,同时可通过AMPK/mTOR通路诱导细胞发生自噬.

目的:建立同时测定糖足酊剂中巴西苏木素、原苏木素B、儿茶素、表儿茶素、芒柄花素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、当药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的一测多评法,验证该方法在控制糖足酊剂质量标准中应用的可行性和科学性.方法:采用HPLC法,以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为内参物(ZS),建立该成分与巴西苏木素、原苏木素B、儿茶素、表儿茶素、芒柄花素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和当药苷等成分的相对校正因子(RCFs),采用相对校正因子计算各成分的质量分数,同时以外标法(ESM)测定上述10种化学成分的质量分数,将糖足酊剂一测多评法的计算结果与外标法的测定值进行对比,通过两者的余弦相似度评价一测多评法用于糖足酊剂质量控制的准确性与科学性.结果:各相对校正因子的RSD值均＜2％,一测多评法的计算结果与外标法的测定值的余弦相似度均为1.000 0.结论:以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为内标物同时测定巴西苏木素、原苏木素B、儿茶素、表儿茶素、芒柄花素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和当药苷含量的一测多评法准确可行,可用于糖足酊剂的质量控制.

目的 建立一测多评法同时测定竭红跌打酊中羟基红花黄色素A、儿茶素、表儿茶素、巴西苏木素和(±)原苏木素B的含量.方法 采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.2％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:403 nm(检测羟基红花黄色素A)和280nm[检测儿茶素、表儿茶素、巴西苏木素和(±)原苏木素B];流速:0.9 ml/min;柱温:35℃.以儿茶素为内标,建立竭红跌打酊中该成分与羟基红花黄色素A、表儿茶素、巴西苏木素和(±)原苏木素B的相对校正因子,计算其含量.通过外标法测定结果和一测多评法计算结果进行对比,验证所建立方法的可行性.结果 羟基红花黄色素A、儿茶素、表儿茶素、巴西苏木素和(±)原苏木素B分别在6.98 ～ 139.60、10.12 ～202.40、5.76～ 115.2、3.82 ～ 76.40、2.18～43.60 μg/ml范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.26％、100.09％、97.79％、97.25％、96.96％,RSD分别为0.88％、0.71％、1.29％、o.85％、1.43％.一测多评法计算结果与外标法测定结果无显著差异.结论 一测多评法可以用于竭红跌打酊中5个成分含量的同时测定及质量控制.