目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植修复大鼠脊髓损伤过程中外源性和内源性凋亡通路的作用。方法:分离并扩增SD大鼠的BMSCs,以携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒转染BMSCs。采用Allen法构建脊髓损伤大鼠模型，并将30只脊髓损伤SD大鼠按照随机数字表法分为两组，每组15只。实验组：将携带GFP基因的BMSCs注入大鼠脊髓损伤区域附近。对照组：以无菌生理盐水注射于大鼠脊髓损伤区域附近。BMSCs移植1，2，3周后通过荧光显微镜观察携带GFP基因BMSCs的增殖情况，通过BBB评分观察大鼠行为能力变化，并采用TUNEL法观察脊髓损伤区域神经元凋亡状况。RT-PCR对B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、CD95特异性配体(FasL)、天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)基因的表达进行分析。Western blot检测caspase-8蛋白的表达情况。结果:携带GFP基因的BMSCs在脊髓损伤区域增殖。实验组BBB评分第2，3周时分别为(9.3±1.2)分、(12.5±2.2)分，较对照组高[分别为(5.2±1.1)分、(5.6±1.1)分]( P<0.05或0.01)；实验组1，2，3周的BBB评分逐渐升高( P<0.01)。实验组凋亡神经元数目在第2，3周时分别为(23.9±1.7)个、(10.5±1.9)个，均显著低于对照组[分别为(40.3±2.0)个、(37.2±2.6)个]( P<0.01)；实验组凋亡神经元在1，2，3周逐渐减少( P<0.01)。RT-PCR结果表明，实验组在第2，3周时Bcl-2的表达水平分别为0.50±0.02、0.71±0.04，均显著高于对照组(分别为0.23±0.02、0.21±0.01)( P<0.01)；实验组Bcl-2的表达水平在第1，2，3周逐渐升高( P<0.01)。实验组第2，3周时Bax的表达水平分别为0.31±0.02、0.33±0.03，低于对照组(分别为0.52±0.06、0.78±0.04)( P<0.05或0.01)；实验组Bax的表达在第1，2，3周差异无统计学意义( P>0.05)，对照组第1，2，3周的Bax的表达水平逐渐升高( P<0.05)。实验组第2，3周Bcl-2/Bax的比值分别为1.62±0.06、2.16±0.27，显著高于对照组(分别为0.44±0.03、0.28±0.02)( P<0.01)。实验组第2，3周FasL的表达水平分别为0.42±0.04、0.27±0.02，低于对照组(分别为0.62±0.04、0.60±0.04)( P<0.05)；实验组第1，2，3周FasL的表达水平逐渐降低( P<0.05)。实验组第2，3周时caspase-8基因的表达水平分别为0.38±0.01、0.16±0.02，低于对照组(分别为0.57±0.02、0.28±0.02)( P<0.05或0.01)。Western blot结果表明，实验组第2，3周时caspase-8蛋白的表达水平分别为0.28±0.06、0.26±0.05，低于对照组(分别为0.47±0.08、0.86±0.09)( P<0.05或0.01)；实验组caspase-8蛋白的表达在第1，2，3周差异无统计学意义( P>0.05)，对照组caspase-8蛋白的表达在1，2，3周逐渐升高( P<0.01)。 结论:BMSCs移植至脊髓损伤区后可显著改善脊髓损伤大鼠的行为能力，而这与其增强受损脊髓组织Bcl-2的表达，下调Bax、FasL、caspase-8的表达，抑制外源性和内源性凋亡程序从而减少神经凋亡有关。

目的:探讨SPAG6基因沉默和地西他滨在体内外对SKM-1细胞凋亡和PTEN启动子甲基化的作用。方法:慢病毒载体转染SKM-1细胞沉默SPAG6基因的表达，地西他滨处理细胞后CCK-8检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot和甲基化特异性PCR检测PTEN的蛋白表达和甲基化情况，并构建非肥胖糖尿病/重度联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠异体移植瘤模型，TUNEL法观察肿瘤组织凋亡，免疫组化检测PTEN在组织中表达情况。结果:慢病毒转染后SPAG6干扰组SPAG6基因被成功沉默；CCK-8检测结果提示地西他滨处理能够降低SKM-1细胞的存活率，同时流式细胞术检测显示地西他滨处理组的细胞凋亡率[（17.35±3.37）%]高于未处理组[（5.09±2.06）%]，且SPAG6基因沉默联合地西他滨处理组的凋亡率最高[（36.34±4.00）%]；地西他滨处理后DNMT1的表达降低而PTEN表达升高，同时PTEN启动子甲基化程度降低，而经地西他滨处理后的SPAG6干扰组的PTEN去甲基化引起的蛋白表达升高效果最明显；NOD/SCID小鼠异体瘤移植模型中地西他滨组的肿瘤体积明显小于生理盐水组，而地西他滨处理SPAG6干扰组的小鼠肿瘤体积最小，且经TUNEL检测发现其凋亡程度最高（阳性比值为3.57±0.48）。结论:SPAG6基因沉默在SKM-1细胞中能增强地西他滨诱导的凋亡和PTEN去甲基化作用，并且在NOD/SCID异体瘤移植模型小鼠中能够增强地西他滨的抗肿瘤特性。

目的:观察靶向CD22的抗体奥加伊妥珠单抗两剂疗法对于多线治疗后特别是嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）治疗后复发/难治急性B淋巴细胞白血病（R/R B-ALL）的疗效。方法:回顾性分析了2020年3月至2022年9月在北京高博博仁医院血液科接受两剂CD22单抗治疗并评估了疗效的R/R B-ALL患者（包括成人和儿童）。所有患者治疗前均经流式细胞术检测证实表达CD22抗原（>80%白血病细胞表达CD22）。所用CD22单抗为注射用奥加伊妥珠单抗，剂型为1 mg/瓶。成人每剂1 mg，儿童每剂不超过1 mg，最大剂量0.85 mg/m 2；每例患者用两剂，总剂量均小于标准剂量1.8 mg/m 2。 结果:共纳入21例R/R B-ALL患者，5例儿童（<18岁）和16例成人。17例患者骨髓/外周血白血病细胞比例为5.0%~99.0%或伴有髓外病变，4例仅骨髓微小残留病（MRD）阳性。14例患者接受过CD19和CD22 CAR-T细胞治疗，4例接受过CD19 CAR-T细胞治疗，3例接受过CD3/CD19双特异性抗体治疗。11例为异基因造血干细胞移植后患者。经CD22单抗治疗后，14例（66.7%）患者获得完全缓解（CR，其中1例为MRD阳性CR），4例仅有骨髓MRD阳性者均转为MRD阴性。6例CD22 CAR-T细胞治疗失败者中，4例经随后的CD22单抗治疗达到CR。7例（33.3%）患者治疗无效。5例（23.8%）患者在抗体治疗过程中发生Ⅰ~Ⅲ级肝毒性，1例无效患儿在挽救性移植过程中发生肝静脉闭塞病（HVOD），经治疗后痊愈。结论:对于多线治疗（包括移植及CD19/CD22 CAR-T细胞）后的R/R B-ALL患者，两剂CD22抗体方案疗效好、费用低，肝毒性和HVOD发生率低。

目的:探讨骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对肾损伤大鼠体内细胞焦亡的影响及其机制。方法:体外分离培养4~5周龄清洁级雌性SD大鼠的BMSC，取第3代细胞用于后续实验。采用成组设计，随机将15只6周龄清洁级雌性SD大鼠分为对照组、肾损伤模型组和BMSC组，每组5只。采用经尾静脉注射脂多糖（LPS）1 mg/kg构建肾损伤模型；对照组以相同途径给予等量生理盐水。BMSC组于制模后2 h经尾静脉注射BMSC 0.5 mL（含BMSC 2×10 6个）；肾损伤模型组和对照组给予等量生理盐水。于术后3 d取各组大鼠腹主动脉血，采用苦味酸法检测血肌酐（SCr）水平，采用二乙酰一肟法检测血尿素氮（BUN）水平，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血胱抑素C（Cys C）和白细胞介素（IL-1β、IL-18）水平。处死大鼠取肾组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测大鼠肾组织NOD样受体蛋白3（NLRP3）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测大鼠肾组织NLRP3、caspase-1的蛋白表达。 结果:体外培养显示，骨髓细胞悬液培养24 h后出现大量圆形贴壁细胞和悬浮细胞，培养4~5 d后有大量长梭形细胞聚集性贴壁生长，仍可见明显的杂质细胞，经胰酶消化并传代至第3代以长梭形贴壁细胞为主，基本纯化为BMSC。体内实验显示，与对照组比较，肾损伤模型组大鼠SCr、BUN、Cys C、IL-1β、IL-18水平均明显升高〔SCr（μmol/L）：85.22±2.29比21.80±0.59，BUN（mmol/L）：11.50±0.64比5.86±0.83，Cys C（mg/L）：0.13±0.01比0.11±0.02，IL-1β（ng/L）：31.49±1.42比4.74±0.49，IL-18（ng/L）：29.01±1.95比1.52±0.03，均 P<0.05〕，NLRP3及caspase-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高〔NLRP3 mRNA（2 -ΔΔCt）：3.635±0.296比1.000±0.002，caspase-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：4.020±0.228比1.001±0.003；NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin）：1.560±0.868比0.902±0.036，caspase-1蛋白（caspase-1/β-actin）：1.392±0.097比0.895±0.046，均 P<0.05〕。与肾损伤模型组比较，BMSC组大鼠SCr、BUN、IL-1β、IL-18水平均明显下降〔SCr（μmol/L）：51.64±3.84比85.22±2.29，BUN（mmol/L）：9.90±0.46比11.50±0.64，IL-1β（ng/L）：24.20±1.45比31.49±1.42，IL-18（ng/L）：12.97±1.25比29.01±1.95，均 P<0.05〕，NLRP3及caspase-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显下降〔NLRP3 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.488±0.136比3.635±0.296，caspase-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.643±0.143比4.020±0.228；NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin）：1.227±0.053比1.560±0.868，caspase-1蛋白（caspase-1/β-actin）：1.159±0.107比1.392±0.097，均 P<0.05〕。 结论:在体内，BMSC可以减轻LPS所致肾损伤大鼠的细胞焦亡。

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)合并坏疽性脓皮病(PG)患者的临床特点、诊断、治疗经过及预后。方法:选择2020年3月14日因"确诊AML2 +个月，发热伴全身多处皮肤红肿水疱20 + d"于安徽省立医院血液科就诊的1例31岁男性AML合并PG患者为研究对象。对本例患者进行相关实验室检查、骨髓细胞形态学检查及白血病微小残留病(MRD)、皮损活组织病理学检查等，并且依据既往病史、检查结果及对药物的治疗反应对其进行诊断和治疗。回顾性分析本例患者临床特点、诊断、治疗过程及预后。以"急性髓细胞白血病""坏疽性脓皮病""acute myeloid leukemia"和"pyoderma gangrenosum"为中、英文关键词，在中国知网数据库、万方数据知识服务平台、PubMed数据库中，检索AML合并PG研究的相关文献。文献检索时间设定为数据库建库至2022年5月25日。分析并总结纳入文献报道的AML合并PG的临床表现、治疗及预后。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。 结果:①根据患者既往病史、临床表现、骨髓细胞形态学检查、免疫分型、染色体核型分析及融合基因检测、皮损活组织病理学等检查结果，患者被诊断为AML合并PG。②该患者予索拉非尼+地西他滨+HAG(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷+粒细胞集落刺激因子)方案行再诱导化疗，复查骨髓细胞形态学结果显示，骨髓增生活跃，原始细胞占有核细胞4%。患者获得完全缓解(CR)。后期予索拉非尼+地西他滨+HAG巩固1个疗程及索拉菲尼+地西他滨+中剂量阿糖胞苷巩固2个疗程，患者病情均呈持续CR状态。③患者明确诊断后针对PG系统性治疗采用甲泼尼龙联合沙利度胺，局部采用创面换药及外用他克莫司软膏。治疗1周后，患者皮疹明显好转，表面结痂且无新发皮疹。④患者于2020年12月16行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)，移植过程顺利，未发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)。随访至2022年5月25日，患者AML病情持续缓解且未再出现PG症状。⑤文献复习结果：根据本研究设定的文献检索策略进行文献检索，共计纳入筛选出13篇AML合并PG相关文献，纳入13例患者，加上本例患者共计14例。其中，PG发生于AML诊断前、后及同时发生患者分别为4、8、2例；接受糖皮质激素、化疗、抗感染治疗者分别为7、2和1例。9例获得长期随访结果的患者中，6例患者死亡。3例接受allo-HSCT患者中，2例获得长期生存。结论:AML合并PG患者临床较为少见，其临床表现具有非特异性，治疗效果不佳，远期预后较差。allo-HSCT可能对控制AML和PG均有一定效果。

目的:探讨增加强度预处理单倍体造血干细胞移植（haplo-HSCT）对于HLA供者特异性抗体（DSA）强阳性血液病患者的疗效。方法:纳入2019年5月1日至2022年9月1日在上海闸新中西医结合医院血液科接受增加强度预处理haplo-HSCT的DSA平均荧光强度（MFI值）≥10 000的10例血液病患者，对其临床资料进行回顾性分析。结果:①10例患者中男3例、女7例，中位年龄为53.5（36~64）岁；急性髓系白血病（AML） 3例，骨髓增生异常综合征（MDS）2例，慢性粒-单核细胞白血病（CMML）2例，慢性髓性白血病加速期（CML-AP）2例，原发性骨髓纤维化（PMF）1例。②接受氟达拉滨（Flu）/白消安（Bu）为主联合全身放射治疗（TBI）/环磷酰胺（CTX）预处理方案。③移植前DSA中位MFI值为15 999（10 210~23 417），移植后第7天DSA中位MFI值为10 787（0~22 720）。④8例患者获得粒细胞和血小板植入，中位粒细胞植入时间为14（10~16）d，中位血小板植入时间为18（14~20）d。中位随访12.5（1.5~27）个月，原发植入失败、移植物植入功能不良患者各1例，7例患者DSA转为阴性且处于无进展生存状态。结论:增加强度预处理haplo-HSCT能够有效降低DSA强阳性血液病患者DSA强度，获得较好的近期疗效。

患者，女性，13岁，因"确诊慢性粒细胞性白血病4年，发热2周"于2021年4月24日收入温州医科大学附属第一医院血液内科。患者既往于2018年5月开始服用伊马替尼400 mg/d，后自行不规则服用并于2020年5月停药。2020年7月患者确诊为慢性粒细胞性白血病转变成急性淋巴白血病，无激酶区基因突变，改服用氟马替尼600 mg/d，半年后复查血液学缓解，BCR-ABL融合基因表达为138%，建议行异基因造血干细胞移植，患者家属拒绝。后患者自行不规则服用氟马替尼，于2021年4月复查骨髓提示复发。患者既往于2020年7月查血液、脑脊液确诊梅毒，使用长效青霉素治疗后于2021年4月复查血液梅毒TRUST、梅毒特异性抗体阴性。患者既往于2020年7月24日至2020年10月29日期间输注悬浮红细胞24 U。

目的:探讨抑制腺苷激酶表达的间充质干细胞(ADK －-MSCs)脑内移植对氯化锂-匹罗卡品模型癫痫发作和海马神经元损伤的影响。 方法:利用包含抑制腺苷激酶表达的慢病毒载体转染小鼠骨髓间充质干细胞，制作抑制腺苷激酶表达的间充质干细胞(ADK －-MSCs)，检测其腺苷分泌量，将其移植入准备进行氯化锂-匹罗卡品造模的小鼠海马区。实验分组对照组，氯化锂-匹罗卡品造模组TLE组，和ADK －-MSCs移植后氯化锂-匹罗卡品造模组ADK －-MSCs组。造模28 d后，使用视频脑电图监测造模后自发性癫痫发作。使用尼氏染色和活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3免疫组织化学评估海马神经元的损伤和凋亡。造模45 d后，观察移植ADK －-MSCs细胞的存活情况。两组间比较采用 t检验。 结果:1×10 5个ADK －-MSCs细胞上清中的腺苷浓度为12.1 ng/ml。ADK －-MSCs组自发性癫痫发作频率为(8.20±2.38)次/周，明显低于TLE组[(16.40±3.20)次/周， t＝4.584， P<0.01]。尼氏染色显示400倍放大视野中ADK －-MSCs组CA1区存活神经元为(91.00±6.51)个，明显高于TLE组[(71.80±5.06)个， t＝5.199， P<0.001]；CA3区存活神经元ADK －-MSCs组[(64.20±7.98)个]明显高于TLE组[(45.75±7.63)个， t＝3.511， P<0.01]。活性Caspase-3免疫染色显示ADK －-MSCs组海马锥体神经元阳性细胞明显低于TLE组，蛋白质印迹法(Western blot)分析证实ADK －-MSCs组活性Caspase-3蛋白表达明显低于TLE组( n＝3， t＝4.302， P<0.05)。造模45 d后，通过荧光显微镜可观察到海马区存活的绿色荧光蛋白(GFP)阳性绿色荧光ADK －-MSCs细胞。 结论:抑制ADK表达的间充质干细胞脑内移植在氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型中具有抗癫痫发作和减轻神经损伤的作用。

目的:分析在第二代嵌合抗原受体(CAR)的基础上设计的同时分泌白细胞介素7(IL7)和趋化因子19(CCL19)的第四代嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)，在多发性骨髓瘤微环境中增殖、趋化、清除肿瘤细胞和持久性等方面的能力。方法:通过2A自剪切肽技术构建第四代CAR载体质粒，采用第三代慢病毒包装系统制备高滴度慢病毒，通过流式细胞术检测慢病毒转导效率和CAR-T细胞亚型的变化；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CAR-T细胞中IL7和CCL19的分泌情况；手工计数法分析CAR-T细胞在培养过程中的增殖活性；Transwell迁移实验验证CAR-T细胞趋化能力；荧光素酶生物发光法检测CAR-T细胞特异性杀伤活性；小鼠异体移植模型验证CAR-T细胞体内抗骨髓瘤活性和安全性。结果:流式细胞术结果显示，抗CS1 CAR-T和抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞CAR的表达率分别为(91.50±0.29)%和(46.70±0.12)%，表明CAR-T细胞构建成功。亚型分析显示，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞中T记忆干细胞(TSCM)的比例为(67.58±0.59)%，高于抗CS1 CAR-T[(50.74±1.01)%， P＝0.000 1]，具有更强的免疫记忆功能，持久性更佳。抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞较对照组(MOCK-T)和抗CS1 CAR-T组能够持续分泌IL7和CCL19( P<0.000 1)。抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞在慢病毒转导后的第9天细胞数达到(22.77±0.79)×10 6个，高于抗CS1 CAR-T细胞[(9.40±0.79)×10 6个， P＝0.000 1]，具有更强的增殖能力。Transwell迁移实验中，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞对于反应T细胞的趋化细胞数为(109.00±4.04)个/视野，高于对照组和抗CS1 CAR-T组[分别为(9.33±1.20)个/视野和(7.33±0.88)个/视野，均 P<0.000 1]，具有更强的趋化能力。杀伤实验结果显示，与对照组细胞比较，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T和抗CS1 CAR-T均具有特异性的杀伤效能( P<0.000 1)。动物实验表明，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞降低了荷瘤小鼠的肿瘤负担( P<0.000 1)，并延长了总生存时间( P＝0.006 1)。 结论:第四代抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞在不影响体内外抗骨髓瘤活性的情况下，有着更强的增殖活性、趋化能力和持久性，为克服传统CAR-T细胞存活率低下、持久性差以及受肿瘤微环境抑制等缺陷提供了策略，为第四代CAR-T细胞的临床应用提供了前期实验依据。

多发性骨髓瘤（MM）是一种以克隆性浆细胞恶性增殖为特征的疾病，发病率在血液系统恶性肿瘤中排名第二位，目前仍无法治愈 [1]。近年来，随着免疫调节药物、蛋白酶体抑制剂、CD38单抗等新药及自体造血干细胞移植（ASCT）技术的应用，MM的完全缓解（CR）率不断提高，但几乎所有病例仍会复发 [2,3,4,5]。2016年，国际骨髓瘤工作组（IMWG）将微小残留病（MRD）列入疗效评估 [6]。MRD是治疗后或治疗期间持续存在少数恶性细胞的状态，被认为是复发的根源，故亟需更敏感的检测技术评估深层缓解程度。目前MRD检测技术主要包括二代流式细胞术（NGF）、二代测序（NGS）、等位基因特异性寡核苷酸聚合酶链反应技术（ASO-PCR）、体液活检及影像学技术等。这些技术各有其优点和局限性，尚无统一的检测方法与评价标准。