目的 研究构建合适的动物模型用于胰母细胞瘤(PBL)的化疗药物筛选及新药评估.方法 将手术切除的PBL肿瘤组织碎块移植到免疫缺陷的小鼠皮下组织,待移植瘤生长至1 500 mm3 时进行瘤体传代及保存.使用HE染色、免疫组织化学及PCR法对成功建立的PBL患儿起源的异种移植(PDX)模型进行人源性鉴定.结果 HE染色显示小鼠PDX中的肿瘤组织及细胞和患儿肿瘤细胞形态基本相同,免疫组化结果显示β-连环蛋白(β-Catenin)、细胞角蛋白7(CK7)和细胞角蛋白19(CK19)在PDX模型组织与人属源性肿瘤组织中有相同的免疫学特征.PCR分析显示PDX组织和原发肿瘤组织具有相同的个体来源.结论 所建立胰母细胞瘤来源PDX高度保留了原发胰母细胞瘤的生长模式及蛋白表达特性,为胰母细胞瘤患者的基础研究和临床用药指导提供了重要的实验模型工具,给推动疾病机制探索及制定个性化治疗方案提供了科学依据.

目的 探究脑靶向肽Angiopep2包载si-WDR4对胶质母细胞瘤的影响及其潜在机制.方法 制备Angiopep2/si-RNA,并检测其包封率和摄取率;在体外,分别对U87细胞进行磷酸盐缓冲液(PBS),Angiopep2/si-NC,si-WDR4和Angiopep2/si-WDR4处理,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测WDR4的mRNA含量,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测WDR4、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测U87细胞活力,通过5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测U87细胞的增殖;在体内,通过U87-Luc细胞构建异种原位移植瘤模型,7 d后,分别通过尾静脉注射PBS、Angiopep2/si-NC、si-WDR4和Angiopep2/si-WDR4.第28天,通过小动物活体成像检测肿瘤双荧光素酶活性,通过苏木精-伊红(HE)染色检测肿瘤大小.计量资料比较采用t检验.结果 Angiopep2对si-WDR4具有良好的结合能力,在N/P比为3∶1时形成完整复合物,并能够促进肿瘤细胞对si-RNA的摄取;在体外,与Angiopep2/si-NC 比较,Angiopep2/si-WDR4 处理能降低 U87 细胞内 WDR4 的 mRNA(0.21±0.14,t=4.13,P＜0.05)和蛋白水平(0.42±0.17,t=3.53,P＜0.05),减少 PI3K(0.34±0.19,t=5.17,P＜0.05)和 Akt(0.24±0.17,4.26,P＜0.05)的表达,降低 U87 细胞活性(52.00±11.33,t=4.59,P＜0.05),减少 EdU 阳性细胞数(23.00±7.28,t=12.12,P＜0.05);在体内,Angiopep2/si-WDR4 处理后裸鼠脑组织双荧光素酶活性降低(10.02±2.06,t=6.14,P＜0.05),肿瘤相对体积减小(0.38±0.17,t=7.42,P＜0.05).结论 Angiopep2/si-WDR4能促进肿瘤细胞对si-WDR4的摄取,抑制胶质母细胞瘤的增殖.

目的:探究膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响.方法:通过电转法构建膜表达IL-21的K562稳转细胞系,细胞灭活后与NK细胞共培养,观察NK细胞增殖情况.通过乳酸脱氢酶(LDH)和干扰素-γ(IFN-γ)释放实验检测扩增获得的NK细胞体外杀伤功能.构建NOD/SCID小鼠异种移植肠癌肿瘤模型,设置空白对照组、NK细胞组和扩增NK细胞组,检测扩增NK细胞体内肿瘤杀伤功能.结果:通过电转法成功构建了膜表达IL-21的K562细胞.与膜表达IL-21的K562细胞共培养17 d后,NK细胞的扩增倍数可达700倍,与对照组相比扩增能力明显增强(P＜0.001).体外肿瘤细胞杀伤实验检测结果显示,NK细胞和扩增后的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用无明显差异,对小鼠体内肿瘤的杀伤效果也无明显差异.结论:膜表达IL-21的K562细胞可显著增强NK细胞的体外扩增能力,但不影响NK细胞的体内外杀伤功能,可用于后续NK细胞的体外规模化扩增.

胰腺癌是一种恶性程度极高,发病隐匿,预后极差的恶性肿瘤,目前以化疗为代表的全身综合治疗仍是改善胰腺癌患者术后预后的主要手段.但胰腺癌耐药机制复杂,可选择的化疗方案较多,患者对每种化疗方案的敏感性不同,疗效也不同,因此需要一种临床前模型检测每种化疗药物的有效性,为患者筛选出最合适的药物.人源性肿瘤异种移植(PDX)通过将患者肿瘤组织植入到免疫缺陷鼠体内从而获得个体化肿瘤模型,指导患者临床用药.本文将在回顾胰腺癌PDX模型建立方法的基础上,对PDX模型在胰腺癌治疗领域的应用进展进行综述,旨在为胰腺癌的个体化治疗提供新的方向.

异种移植的发展有望缓解供体器官短缺的状况。目前，基因编辑猪被认为是临床异种移植的理想供体器官来源。在相关技术的推动下，异种移植临床前研究取得了实质性成果，这为开启早期临床试验创造了良好条件。特别是近两年，国外该领域的临床研究取得了突破性进展。本文简要概述了国内外异种移植的临床应用进展，从供体猪基因编辑、受试者全程管理原则、伦理和社会心理学三方面讨论异种移植临床试验的关键问题。相信在多学科交叉融合的背景下，未来异种移植将逐步转入临床应用，更好地造福人类。

胰腺癌是一种恶性程度非常高的消化系统肿瘤，发病隐匿、早期诊断率低、进展快、预后差，胰腺癌的周围神经浸润(PNI)被认为是导致胰腺癌预后不良的重要因素。胰腺癌神经浸润模型可以在复杂的肿瘤微环境下模拟胰腺癌神经浸润的发生、发展过程，是研究胰腺癌PNI的分子机制、早期诊断和改良治疗方法的重要载体。PNI模型可以大致分为体内模型和体外模型，体内模型又可以分为异位模型和原位模型。近年来，在体外模型和体内模型基础上，又出现了基因工程小鼠模型、人源化肿瘤异种移植模型。文章分析了常用的胰腺癌神经浸润体外及体内模型的制备方法、临床用途和局限性。

胰岛移植在近20年发展迅速，已逐渐成为1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus，T1DM)临床治疗的理想方案之一。越来越多的临床证据证实，胰岛移植在胰岛素脱离或减量、低血糖发作的防治和糖尿病并发症的预防等方面均有显著疗效。然而临床胰岛移植目前仍面临供体资源紧缺、胰岛移植物早期定植、存活困难和排斥反应等亟待解决的难题。未来应在提高捐献胰腺数量及有效利用率的基础上，积极推进异种胰岛移植和干细胞来源胰岛移植的临床探索，有效解决胰岛来源不足的问题。同时通过不断研发新材料、新技术，优化胰岛移植部位，提高胰岛移植物定植与存活，并逐步摆脱对免疫抑制剂的依赖。此外，应积极推进胰岛移植后移植物监测手段的研发和应用，进一步保障胰岛移植后移植物的长期存活，让更多糖尿病患者从中受益。

目的:利用人骨髓瘤细胞系ARP1、MM.1S和NCI-H929建立异种移植模型，并对三种细胞移植后生长周期、肿瘤负荷和生物学特点进行比较。方法:将ARP1、MM.1S和NCI-H929细胞分别由皮下或尾静脉植入经 137Cs照射后的NOD/SCID小鼠，每周观察小鼠的生存情况，监测肿瘤负荷。应用流式细胞术检测小鼠肿瘤组织或骨髓中CD138 +细胞的比例。采用免疫荧光检测肿瘤组织细胞的CD138和免疫球蛋白轻链表达。ELISA法检测骨髓和外周血中的免疫球蛋白轻链，micro-CT评价骨病变。 结果:皮下移植ARP1、MM.1S和NCI-H929细胞的小鼠在两周内均可形成局部肿瘤，免疫荧光检测支持浆细胞肿瘤。尾静脉移植后第20天时可在ARP1组小鼠外周血中检测出κ轻链[（8.2±1.0）ng/ml]。尾静脉移植6周左右，ARP1组小鼠出现体重下降、精神萎靡、下肢逐渐瘫痪等表现，骨髓中能检测到人CD138 +CD38 +细胞群，予硼替佐米治疗可显著降低肿瘤负荷[（5.7±0.2）%对（21.3±2.1）%， P<0.01]。MM.1S和NCI-H929组小鼠骨髓中未检测到人CD138 +CD38 +细胞群。 结论:ARP1、MM.1S和NCI-H929细胞系构建的小鼠模型可作为MM发病机制及临床研究的良好模型。

随着各种诊断技术的不断发展和人们生活水平的提高，神经内分泌肿瘤的检出率不断增加，越来越受到人们的重视，神经内分泌肿瘤的临床研究进展显著，治疗手段丰富。但是,由于神经内分泌肿瘤的异质性，复发转移依然是困扰临床医生的难题，疗效仍有待提高，亟需对其生物学行为展开深入研究。近年来，随着分子生物学的发展，神经内分泌肿瘤的基础与转化研究均取得了一定进展。本文围绕神经内分泌肿瘤的多组学（体细胞拷贝数变异、基因组学、转录组学等）、肿瘤微环境（免疫微环境、肿瘤微血管、肿瘤相关成纤维细胞等）、临床前研究模型构建（细胞系、类器官、人源性异种移植模型、基因工程小鼠）等前沿热点进行综述，并对具有临床转化意义的部分进行阐述。

目的:通过 68Ga-成纤维细胞激活蛋白抑制剂(FAPI)-04 PET显像探索胰腺癌对FAPI的摄取，为胰腺癌成纤维细胞激活蛋白(FAP)靶向显像提供依据。 方法:构建胰腺癌-人源肿瘤异种移植(PDX)荷瘤裸鼠模型( n＝8)，分别行 68Ga-FAPI-04和 18F-脱氧葡萄糖(FDG) microPET/CT显像(每组各4只)，采用两独立样本 t检验比较2种显像剂在肿瘤中的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。对5例胰腺癌患者[男4例、女1例，年龄46~74(63.0±11.9)岁]分别行 68Ga-FAPI-04与 18F-FDG PET/CT显像，采用配对 t检验比较2种显像剂在胰腺癌原发灶的最大标准摄取值(SUV max)及肝转移灶与正常肝组织的SUV max比值。 结果:MicroPET/CT显像示， 68Ga-FAPI-04在胰腺癌-PDX荷瘤裸鼠肿瘤组织中各个时间点均有显像，注射后60 min， 68Ga-FAPI-04在胰腺癌-PDX荷瘤裸鼠肿瘤组织中的摄取显著高于 18F-FDG [(6.58±0.44)和(4.29±0.13) %ID/g； t＝4.152， P＝0.008 9]。5例胰腺癌患者 68Ga-FAPI-04在胰腺癌原发灶的SUV max显著高于 18F-FDG(16.82±3.08和5.14±2.20； t＝6.893， P＝0.000 1); 68Ga-FAPI-04的胰腺癌肝转移灶与正常肝组织的SUV max比值也显著高于 18F-FDG(4.57±1.47和1.30±0.16； t＝3.803， P＝0.019 1)。 结论:胰腺癌可高度摄取 68Ga-FAPI-04，提示FAP有望作为胰腺癌良好的分子靶点，用于胰腺癌PET/CT显像。