目的:探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞；在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型，胃癌MKN-45细胞分为3组：miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组，miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control，NC)，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系；在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮，分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力，细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力；通过免疫组织化学方法验证FZD2基因的蛋白表达水平。各组间比较采用 t检验。 结果:qPCR实验结果显示FZD2 mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.62±0.02比1.01±0.13， t＝5.042， P<0.01)，c-myc mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.46±0.07比1.01±0.15， t＝5.805， P<0.01)，Western blot实验结果显示，FZD2蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(1 181 347.00±39.27比206 382.00±8.33， t＝1 080.000， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(996 269.00±54.50比1 168 775.00±99.80， t＝1 104.000， P<0.01)，c-myc蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(3 307 840.00±81.00比253 663.00±33.29， t＝1 072.000， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(138 137.00±131.68比205 780.00±77.69， t＝766.300， P<0.01)；双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中FZD2基因活性显著低于对照组(1.02±0.14比0.59±0.06， t＝99.638， P<0.01)；CCK-8结果显示转染48 h后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞增殖能力低于miR-30a-5p inhibitor组(93.09±4.18比146.42±5.80， t＝12.920， P<0.01)。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个， t＝4.440， P<0.05]。免疫组织化学结果显示基因FZD2蛋白在miR-30a-5p低表达[miR-30a-5p/β-肌动蛋白(β-actin)<0.05]的胃癌组织中表达增强(评分≥5分)，与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:在胃癌中miR-30a-5p可直接靶向FZD2，通过抑制FZD2的表达，降低Wnt信号通路的活性，从而抑制胃癌的发生与发展。

目的:探讨2型糖尿病心肌病(T2DCM)患者血清长链非编码核糖核酸KCNQ1OT1(LncRNAKCNQ1OT1)、微小核糖核酸-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及其与左心功能的相关性.方法:选择2021年6月至2023年6月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的T2DCM患者80例作为T2DCM组,单纯2型糖尿病(T2DM)患者80例作为T2DM组,另选取同期体检健康者80例作为健康对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测并比较三组血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-181a-5p表达水平.Pearson相关性分析法分析血清LncRNAKCNQ1OT1、miR-181a-5p表达与左心功能相关指标[二尖瓣早期血流速度峰值/左侧壁二尖瓣环早期峰值速度均值(E/e')、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、Tei指数、左心室收缩末期内径(LVESD)、二尖瓣早期血流速度峰值/晚期血流速度峰值(E/A)]的相关性.结果:T2DCM组体质指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、B型脑肽钠(BNP)、肌酸激酶(CK)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbAlc)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于健康对照组(P＜0.05);T2DCM 组 BNP、CK、TC、LDL-C 高于 T2DM 组(P＜0.05)o T2DCM组血清miR-181a-5p表达水平低于T2DM组、健康对照组(P＜0.05);T2DCM组血清LncRNA KCNQ1OT1表达水平高于T2DM组、健康对照组(P＜0.05).T2DCM组LVEDD、LVESD、E/e'、Tei指数高于T2DM组、健康对照组(P＜0.05),LVEF、E/A低于T2DM组、健康对照组(P＜0.05)o T2DCM患者血清LncRNA KCNQ1OT1与LVEDD、LVESD、E/e'、Tei指数呈正相关(P＜0.05),与 E/A、LVEF、miR-181a-5p 呈负相关(P＜0.05);血清 miR-181a-5p 与 LVEDD、LVESD、E/e'、Tei 指数呈负相关(P＜0.05),与E/A、LVEF呈正相关(P＜0.05).结论:T2DCM患者血清LncRNA KCNQ1OT1表达水平升高,miR-181a-5p表达水平降低,可能参与左心功能损伤过程.

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子 6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义.方法:选择 49 例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择 49 例增生期子宫内膜组织作为对照组.应用实时荧光定量 PCR 法检测术后组织中 miR-181c-5p 的表达,应用免疫组化方法检测KLF6 的表达.应用线性相关分析观察 miR-181c-5p 和 KLF6 的关系,应用 K-M 生存分析观察 miR-181c-5p 和KLF6 与术后生存时间的关系.结果:观察组 miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6 的阳性率明显低于对照组(P<0.05).观察组 miR-181c-5p与KLF6 表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均 P<0.05).结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6 均异常表达且具有正相关性,联合检测 miR-181c-5p和KLF6 的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值.

目的 研究长链非编码 RNA(linc-ROR)及微小 RNA(miR)-181c-5p 在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及临床意义.方法 选取 2018 年 2 月至 2019 年 2 月无锡市妇幼保健院诊治的97 例EOC患者作为研究对象,另纳入同期同一医院诊治的 60 例经病理学检查明确诊断为良性卵巢囊肿患者的正常卵巢组织作为对照.应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测组织中 linc-ROR、miR-181c-5p水平;分析linc-ROR与miR-181c-5p表达的相关性,比较不同临床特征EOC患者linc-ROR及miR-181c-5p表达差异;分析影响EOC患者预后的因素.结果 EOC组织中linc-ROR的相对表达量高于正常卵巢组织(P＜0.05),而miR-181c-5p的相对表达量低于正常卵巢组织(P＜0.05).EOC癌组织中linc-ROR与miR-181c-5p的表达呈显著负相关(r =-0.619,P＜0.05).不同肿瘤国际妇产科联盟(FIGO)分期、有无淋巴结转移EOC 癌组织中linc-ROR、miR-181c-5p 比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).linc-ROR高表达组3 年累计生存率低于linc-ROR低表达组(P＜0.05),miR-181c-5p低表达组 3年累计生存率低于miR-181c-5p高表达组(P＜0.05).EOC癌组织中linc-ROR升高、miR-181c-5p降低、肿瘤FIGO分期Ⅲ期及淋巴结转移是EC患者不良预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 卵巢癌组织中linc-ROR表达升高,miR-181c-5p表达降低,两者表达与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移及预后有关.

急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)是儿童时期最常见的血液系统恶性肿瘤,随着治疗技术的不断改进,疗效已经取得明显的进展,但仍有20％左右的病例复发难治,发生机制尚未完全阐明.微小RNA (miRNA)是一类通过抑制或降解mRNA的含有18～24个核苷酸的非编码小RNA分子,参与生物体生长、发育和疾病发生过程中相关基因表达.至今为止已经发现了3000多个miRNA,其中大部分在动物体内起着关键性的调控作用.研究人员对发现的microRNA制定了以下命名规则:(1) miRNA简写成miR,再根据其被克隆的先后顺序加上阿拉伯数字,如miR-21;(2)高度同源的miRNA在数字后加上英文小写字母(a、b、c),如miR-181a和miR-34b;(3)由不同染色体上的DNA序列转录加工而成的具有相同成熟体序列的miRNA,则在后面加上阿拉伯数字以区分,如miR-199a-1和miR-199a-2;(4)如果一个前体的2个臂分别加工产生miRNA,在表达水平较低的miRNA后面加“*”,如miR-199a和miR-199a*,或进行如下命名,miR-142-5p(也可命名为miR-142-s,表示从5端的臂加工而来)和miR-142-3p(也可命名为miR-142-as,表示从3端的臂加工而来);(5)将物种缩写置于miRNA之前,如hsa-miR-195;(6)确定命名规则之前发现的miRNA,如let-7,则保留原来名字.

目的 探讨微小RNA-214(miR-214)和miR-181c在胃癌组织中的表达水平及对预后的影响.方法 选取2014年1月至2015年1月于川北医学院附属医院收治的68例胃癌患者为研究对象,均接受手术治疗,出院后随访1～60个月.利用实时荧光定量PCR技术检测患者癌组织和癌旁组织miR-214、miR-181c相对表达量;利用Kaplan-Meier曲线进行生存分析;Cox多因素回归分析影响胃癌患者预后的独立危险因素.结果 胃癌组织中miR-214、miR-181c表达水平均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).根据miR-214、miR-181c表达均值将患者分为高表达组和低表达组,miR-214、miR-181c表达水平与年龄、性别、淋巴结是否转移无关,与TNM分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05).患者总生存率为44.12％,miR-214低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.71％、57.69％,两组间比较差异有统计学意义(P=0.035);miR-181c低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.55％、60.87％,差异有统计学意义(P=0.024).Cox多因素回归分析结果显示,TNM分期高(HR=1.569,95％CI:1.029～2.391,P=0.036)、miR-214低表达(HR=1.643,95％CI:1.294～2.087,P<0.001)及miR-181c低表达(HR=1.327,95％CI:1.045～1.685,P=0.021)是影响胃癌患者预后的独立危险因素.结论 miR-214、miR-181c在胃癌组织中表达显著下调,与胃癌患者临床病理参数及不良预后有关,参与胃癌的发生发展过程.

目的 探讨MicroRNA-181c-5p(miR-181c-5p)对压力超负荷诱导(TAC)的心力衰竭的作用机制.方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、TAC组和TAC+miR-181c-5p组.采用主动脉弓缩窄诱导小鼠心力衰竭动物模型,造模过程中,对模型组小鼠心肌多点注射给予5× 106U/10μL过表达miR-181c-5p慢病毒载体,实验第4周处死所有小鼠,收集心脏组织标本.采用HE染色观察组病理学改变;Masson染色观察胶原纤维沉积;TUNEL检测观察心肌组织凋亡;实时定量PCR和Western blot技术检测心肌组织miR-181c-5p表达及凋亡蛋白表达.结果 miR-181c-5p在TAC诱导的心力衰竭心肌组织中表达下调.miR-181c-5p过表达减轻心肌炎症细胞浸润和纤维化、降低心肌细胞凋亡和靶向抑制Bcl-2家族的促凋亡基因Bc12Ll1/Bim的mRNA和蛋白表达.结论 miR-181c-5p通过抑制Bcl2L11/Bim表达减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭.

目的 采用生物信息学方法分析术后认知功能障碍(POCD)小鼠海马组织中差异表达miRNA(DEMs)及其靶基因(DEGs),并构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA的调控网络图,探讨其机制.方法 在GEO数据库中搜索下载POCD小鼠海马组织与正常小鼠海马组织基因表达谱芯片数据GSE95070,采用R软件lim?ma函数包筛选出差异表达的miRNA,即DEMs.将DEMs分别输入到miRTarBase、TargetScan、miRDB数据库中,三个数据库中皆存在的靶基因为差异表达的DEMs靶基因,即DEGs.使用R软件中的ggplot2、enrichplot函数包对DEGs进行了基因本体(GO)功能富集分析和KEGG信号通路分析.通过STRING在线工具构建DEGs蛋白互作网络(PPI),将蛋白间相互作用得分>0.4的节点输入到可视化工具Cytoscape软件中,利用cytoHubba插件筛选出节点度值排名前10的节点,即为可能参与小鼠POCD发生发展的枢纽基因.选取枢纽基因及其相应的DEMs,利用Cyto?scape软件构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图.结果 共筛选出19个显著差异表达的DEMs,得到448个DEGs.GO功能富集分析结果显示,DEGs在DNA结合的转录因子激活活性、特异性RNA聚合酶Ⅱ、微小GTP酶结合等分子功能中显著富集,在树突的形成以及调节、促进神经胶质细胞的增殖等生物学过程中显著富集,在突触膜的有机组成成分、细胞边缘以及囊泡运输等细胞组分中显著富集.KEGG信号通路分析结果显示,DEGs在Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路、Hepatitis C信号通路、Apelin信号通路等通路中显著富集.小鼠POCD发生发展的10个枢纽基因分别为Gsk3β、Igf1、Cd34、Ubxn7、Smad2、Smarca4、Stat1、Grb2、Sin3a、Ncam1,相应的6个DEMs分别为mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p、mmu-miR-592-3p、mmu-miR-28a-3p、mmu-miR-181c-5p、mmu-miR-351-5p,成功构建了POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图,其中mmu-miR-362-3p调控Gsk3β的关系对、mmu-miR-3065-5p调控Igf1的关系对在调控网络中节点度最高.结论 与正常小鼠海马组织相比,POCD小鼠海马组织中有19个差异表达的DEMs和448个DEGs;DEGs与树突的形成以及调节等有关,参与介导Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路等.mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p等差异表达的miRNA可能是通过调节Gsk3β、Igf1等靶基因的表达,影响POCD的发生发展.

目的 研究线粒体来源多肽MOTS-c对去卵巢(OVX)小鼠肝脂代谢的改善作用及其可能的作用机制.方法 按照体重将小鼠随机分为3组:假手术组、模型组和实验组.实验组每日腹腔注射MOTS-c 10 mg·kg-1,连续8周.8周后检测血清游离脂肪酸和三酰甘油;用实时定量荧光聚合酶链反应检测肝组织微小RNA-181c-5p(mmu-miR-181c-5p)基因表达(2-△CT值),蛋白质印迹法检测肝组织中过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα)蛋白的相对表达量,双荧光素酶报告基因实验验证PPARα 是mmu-miR-181c-5p靶基因.结果 假手术组、模型组、实验组的游离脂肪酸分别为(0.06±0.01),(0.15±0.04)和(0.12±0.03)mmol·L-1;这3组的三酰甘油分别为(0.17±0.05),(0.34±0.05)和(0.30±0.08)mmol·L-1;这3组的mmu-miR-181c-5p相对表达量分别为(1.70±0.10)×10-2,(2.10±0.40)×10-2和(1.70±0.20)×10-2;这3组的PPARα 蛋白相对表达量分别为0.27±0.04,0.06±0.02和0.25±0.04.模型组的上述指标与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);PPARα是mmu-miR-181c-5p靶基因.结论 MOTS-c通过miR-181c-5p/PPARα可以改善去卵巢小鼠肝脂代谢.

目的 探讨脑梗死病人血清微小RNA(miR)-181水平与神经功能转归的关系及其靶向调控的细胞因子.方法 选择2017年1月—2018年12月我院收治的130例急性脑梗死病人,根据治疗后30 d改良Rankin量表(mRS)评分将病人分为预后良好组(mRS评分0～4分)与预后不良组(mRS评分5～6分);另选取同期体检的60名健康志愿者作为对照组.收集病人临床特征及实验室指标数据,检测血清miR-181及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)含量.结果 脑梗死病人血清miR-181、VEGF、bFGF水平均明显高于对照组,血清IGF-1、BDNF水平均明显低于对照组(P<0.05);预后良好组基线美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、血清miR-181水平、合并糖尿病比例、同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)水平明显低于预后不良组,VEGF、bFGF、IGF-1、BDNF水平均明显高于预后不良组(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,合并糖尿病、Hcy及miR-181升高、VEGF及BDNF水平降低是脑梗死病人神经功能预后不良的危险因素.结论 急性脑梗死病人血清miR-181水平降低与神经功能预后不良有关.