目的:探讨血清腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）联合全血微小RNA（microRNA，miR）-197-3p在人布鲁氏菌病（简称布病）诊断中的临床价值。方法:2020年1月至2023年9月，在济宁医学院附属医院（简称本院）呼吸与危重症医学科选取布病患者120例，设为布病组，其中急性期组89例、慢性期组19例、隐匿感染组12例。另于同期在本院体检人群中选取畜牧业从业健康志愿者60例，设为对照组；在本院呼吸与危重症医学科选取社区获得性肺炎重症患者60例，设为感染对照组。布病组和感染对照组患者均予以规范治疗。布病、感染对照组患者分别于治疗前后、对照组受试者于入组时采集清晨空腹肘静脉血，检测血清ADA及全血miR-197-3p水平。采用多因素logistic回归分析探讨影响布病发生的危险因素，采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估ADA、miR-197-3p及二者联合对布病的诊断效能。结果:治疗前，对照、感染对照、急性期、慢性期、隐匿感染组血清ADA（U/L：12.35 ± 2.89、18.33 ± 4.57、29.75 ± 6.46、22.20 ± 4.78、14.15 ± 3.03）及全血miR-197-3p水平（1.09 ± 0.33、2.25 ± 0.41、2.68 ± 0.59、2.43 ± 0.51、1.18 ± 0.40）比较，差异均有统计学意义（ F = 4.38、4.02， P = 0.014、0.019）。与对照组比较，其余4组血清ADA和全血miR-197-3p水平均较高（均 P < 0.05）。与感染对照组比较，急性期、慢性期组血清ADA水平均较高，隐匿感染组血清ADA水平较低（均 P < 0.05）；急性期组全血miR-197-3p水平较高，隐匿感染组全血miR-197-3p水平较低（均 P < 0.05）。与治疗前比较，治疗后感染对照、急性期、慢性期组血清ADA及全血miR-197-3p水平均较低（均 P < 0.05）。多因素logistic回归分析显示，血清ADA和全血miR-197-3p水平升高是布病发生的危险因素[比值比（odds ratio， OR） = 2.235、3.404，95%置信区间（confidence intervals， CI）：1.491 ～ 3.362、1.623 ～ 7.605，均 P < 0.001]。ROC曲线结果显示，血清ADA和全血miR-197-3p对布病诊断均具有辅助意义（均 P < 0.001）。血清ADA联合全血miR-197-3p的ROC曲线下面积（area under curve，AUC）为0.933，优于单独血清ADA、全血miR-197-3p的诊断效能（AUC = 0.823、0.840）。 结论:血清ADA联合全血miR-197-3p在人布病诊断中具有较高的临床价值，可为布病的临床诊断与疗效评价提供重要的参考依据。

目的:探讨单采血小板体外储存过程中其微小RNA(miRNA)的表达水平。方法:选择2022年3月至2023年5月成都市血液中心采集的15份单采血小板为研究对象。15份单采血小板采集自15例健康状况良好，符合《血站技术操作规程》(2019版)采集要求的单采血小板献血者。血小板捐献者的中位年龄为30岁(22，40岁)；男性捐献者为8例，女性为7例。将单采血小板置于恒温震荡保存箱中，温度(22±2)℃，振荡频率60 Hz条件下储存，分别于储存第1天(采集当天)、第5天和第7天的上午10点留取血小板标本3～5 mL。应用血细胞分析仪检测血小板常规指标，实验室pH计测定血小板pH值，流式细胞术(FCM)测定血小板CD62P表达水平，实时荧光定量PCR法测定miRNA-126、-145、-150、-197、-223的相对表达水平。血小板标本存储1、5、7 d时各项指标比较采用重复测量方差分析；采用Spearman相关性分析血小板miRNA表达水平与储存时间的相关性。本研究遵循的程序符合成都市血液中心伦理委员会要求[批准文号：伦审(研)2020年第04号]，并且于血小板捐献前与所有捐献者签署《献血者知情同意书》。结果:①随着储存时间延长，本组15份单采血小板标本的血小板压积(PCT)增大[储存1、5、7 d时分别为(0.68±0.21)%、(0.89±0.13)%、(0.99±0.17)%]，大血小板比例(P-LCR)上升[储存1、5、7 d时分别为(20.5±6.0)%、(26.0±3.4)%、(30.4±2.8)%]；pH值下降[储存1、5、7 d时分别为(7.2±0.1)、(7.1±0.2)、(7.0±0.2)]，并且差异均有统计学意义( F＝5.60， P＝0.007； F＝9.12， P＝0.001； F＝5.44， P＝0.004)；其余指标分别比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。②单采血小板标本储存1、5、7 d时，其CD62P表达水平分别为(6.3±2.9)%、(22.0±7.3)%和(38.4±12.1)%。随着储存时间延长，血小板标本的CD62P表达水平升高，并且差异均有统计学意义( F＝36.16， P<0.001)。③本组血小板标本随着储存时间的延长，其miRNA-126、-150、-197相对表达水平增加，而miRNA-145和-223相对表达水平下降；并且差异均有统计学意义( F＝88.58、32.64、33.59、35.42、22.91，均 P<0.001)。④本组单采血小板标本的储存时间与其miRNA-126、-150和-197的表达水平呈正相关( r＝0.811、0.812、0.856，均 P<0.001)，而与miRNA-145和-223的表达水平呈负相关( r＝－0.720、－0.767，均 P<0.001)。 结论:单采血小板在体外储存过程中，其miRNA-126、-145、-150、-197和-223表达水平发生明显变化，尤其是miRNA197。

目的:鉴定非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者和健康对照组人血清外泌体微小RNAs（microRNAs）差异表达谱，探索miRNAs在NAFLD发病、诊断及治疗中的价值。方法:各取4例人口学特征、个人史相近的S2~3级NAFLD患者和健康对照者进行血清外泌体miRNAs高通量测序，对差异表达最显著的4条miRNAs按S1组、S2~3组、对照（Control）组每组各20例行qRT-PCR验证，并进行靶基因预测，对靶基因进行GO和KEGG富集分析。正态分布的计量资料使用 t检验或方差分析，等级资料和非正态分布资料使用秩和检验，计数资料使用Pearson χ2检验或Fisher精确检验。 结果:初步鉴定出差异有统计学意义（ P < 0.05）且差异表达在2倍以上的血清外泌体miRNAs共19条，hsa-miR-122-5p、hsa-miR-146b-5p、hsa-miR-197-3P的相对表达关系为：S2~3组>S1组>Control组，hsa-miR-483-3p的相对表达关系为：NAFLD组（S1或S2~3）>Control组。GO分析显示靶基因在分子功能、细胞组分、生物过程均有广泛的注释，靶基因显著富集的通路共84条，从20条与NAFLD最密切的通路中筛选出与至少10条通路都相关的靶基因共5个，即PIK3R2、AKT2、AKT3、MAPK1、NFKB1。 结论:初步分析了NAFLD患者和健康对照组血清外泌体miRNAs差异表达谱，研究了4条miRNAs对于判断肝脂肪变性程度的价值，预测了数以千计的靶基因及其参与的复杂信号通路，为寻找无创诊断NAFLD的生物标志物和特异性治疗的新靶点提供了新的参考。

目的:采用高通量测序检测卵巢子宫内膜异位症微小RNA(microRNA，miRNA)及mRNA的表达，分析miRNA-mRNA调控网络关系，探索卵巢子宫内膜异位症的发生机制。方法:回顾性分析2017年3月至2018年3月在中南大学湘雅医院因卵巢子宫内膜异位症行手术的患者20例，取异位内膜及配对在位内膜组织，提取总RNA，分别进行miRNA测序及mRNA测序，获得差异miRNA及mRNA表达谱。运用Targetscan、miRDB数据库预测差异miRNA可能结合的mRNA，并与差异mRNA取交集，获得候选mRNA，采用Cytoscape软件进行miRNA-mRNA调控网络分析，采用DAVID数据库进行基因功能富集(GO)分析和信号通路(pathway)分析。结果:与在位内膜比较，异位内膜差异表达的miRNA有369个(197个上调，172个下调)，差异表达的mRNA 3 765个(1 975个上调，1 790个下调)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)证实miR-202-5p、miR-514a-5p在异位内膜表达高于在位内膜( P<0.05)，而miR-375-3p、miR-449b-5p在异位内膜表达低于在位内膜( P<0.05)，与测序结果相符合。生物信息学发现与这4个miRNA相关的候选mRNA主要富集于核内甾体激素受体结合、跨膜受体及蛋白激酶激活等生物学过程。KEGG通路富集显示其参与了多种信号通路，如TGFβ信号通路、细胞黏附分子信号通路、Wnt信号通路、Rap1信号通路。 结论:miRNA及mRNA在子宫内膜异位症差异表达，二者相互作用通过多种通路参与子宫内膜异位症的发生发展。

目的:探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞；在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型，胃癌MKN-45细胞分为3组：miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组，miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC)，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系；在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮，分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组及miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力，细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力。各组间比较采用 t检验。 结果:qPCR实验结果显示过表达miR-30a-5p能够显著抑制CCND1在mRNA的表达(0.58±0.05， t＝11.39， P<0.01)，Western blot实验结果显示，CCND1蛋白水平，miR-30a-5p inhibitor组较NC组明显上升(284 437±2 127比215 273±4 097， t＝25.95， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组较NC组明显下降(85 586±309比197 661±948， t＝194.70， P<0.01)；双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中WNT信号通路活性较对照组显著降低(0.39±0.03， t＝13.96， P<0.01)；CCK-8结果显示2 d后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p inhibitor组[(93.09±4.18)%比(146.42±5.80)%， t＝12.92， P<0.01]；miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(53.80±3.54)%比(100.00±2.18)%， t＝19.25， P<0.01]。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个， t＝4.44， P<0.05]；miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(19.33±6.66)个比(45.00±4.58)个， t＝5.50， P<0.01]。 结论:miR-30a-5p可以调控Wnt/β-catenin信号通路，过表达miR-30a-5p后可抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胃癌细胞中Cyclin D1(CCND1)的表达，进一步影响胃癌的增殖与侵袭。

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-338在肺腺癌细胞株及肺腺癌组织中的表达,及其抑制肺癌转移的机制.方法 使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺腺癌细胞株A549、115例肺腺癌组织、癌旁正常肺组织中miR-338的表达.构建miR-338过表达肺癌细胞株,探讨miR-338在肺癌细胞增殖、侵袭、转移中的功能.检测miR-338过表达肺癌细胞株中整合素β3的表达,研究miR-338抑制肺癌转移的靶向作用机制.结果 (1)肺腺癌细胞株与肺腺癌组织中miR-338表达下调(1.00比0.15 ±0.01,P=0.035;0.00比-2.99±3.69,P=0.001).miR-338表达与肿瘤栓子、肿瘤复发、TNM分期相关(P =0.005、0.004、0.025).低表达组的5年总生存率显著低于高表达组(中位生存时间44个月比53个月,P =0.001).(2)上调miR-338的表达可以抑制肺癌细胞增殖、迁移[平均细胞计数(347±41)个比(190±8)个,P=0.029]及侵袭[平均细胞计数(197±12)个比(68±14)个,P=0.008].裸鼠异种移植肿瘤模型实验表明,miR-338高表达能有效抑制移植瘤生长[平均肿瘤克隆数(20±7)个比(4±2)个,P =0.004].(3) miR-338过表达肺腺癌细胞株中的整合素β3表达较对照细胞明显降低(1.00比0.35±0.04,P =0.001).双荧光素酶活性测定显示,miR-338过表达组的荧光素酶活性降低(1.00比0.75 ±0.08,P =0.030).结论 (1)miR-338对肺癌细胞的增殖、侵袭及转移起抑制作用;(2)miR-338作用于靶基因整合素β3 mRNA 3'端非编码区(3'UTR)区对其进行转录后负调控.整合素β3是一种新的miR-338肺癌靶基因.

长链非编码RNA (lncRNA)与微小RNA(miRNA,miR)结合已成为癌症治疗的新潜在目标[1].本研究旨在探讨LncRNALINC00312与miR-197-3p之间的关系,以及其对膀胱癌的影响.一、资料与方法110例膀胱癌组织标本取自于2010年1月至2015年12月在本院进行膀胱全切或部分切除术的患者.入选患者均经病理检查证实为膀胱尿路上皮癌.

目的 探讨微小RNA-378a(miR-378a)对皮肤鳞癌(CSCC)细胞侵袭、迁移和CD226表达的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测CSCC细胞A431和人角质形成细胞HaCaT的miR-378a水平;将体外常规培养的A431细胞进行转染,根据转染物不同分为增强转染组(转染miR-378a mimics)、抑制转染组(转染miR-378a inhibitor)和空白转染组(无转染).采用QPCR、活细胞计数( CCK)-8、Annexin V-FITC／PI 双染流式细胞术、 Transwell 细胞迁移和侵袭实验以及Western blotting检测miR-378a水平、增殖活力、凋亡率、穿膜细胞数和CD226水平;构建荧光素酶报告质粒psiCHECK-2,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-378a与CD226基因的靶向关系.结果 与HaCaT细胞(1. 089±0. 197)相比,A431细胞的miR-378a水平升高至4. 435±0. 807(P＜0. 05).与空白转染组的1. 031± 0. 173相比,增强转染组的miR-378a水平升高至11. 846±2. 179,而抑制转染组则降低至0. 162±0. 040;与空白转染组相比,增强转染组转染48、72 h后的增殖活力升高,而抑制转染组则降低;与空白转染组的(7. 464±1. 281)%相比,增强转染组的凋亡率降低至(3. 799±1. 279)%,而抑制转染组则升高至(15. 435±2. 112)%;细胞侵袭实验中,与空白转染组的(62. 704±5. 639)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(89. 401± 6. 358)个,而抑制转染组则降低至(17. 346±2. 954)个;细胞迁移实验中,与空白转染组的(84. 227±5. 478)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(102. 139±7. 930)个,而抑制转染组则降低至(54. 448±13. 068)个;与空白转染组的0. 428±0. 033相比,增强转染组的CD226水平降低至0. 173±0. 056,而抑制转染组则升高至0. 695±0. 020.以上组间差异均有统计学意义( P＜0. 05). miR-378a mimics和携带CD226野生型3'端非翻译区(3'UTR)质粒共转染时,荧光素酶活性显著下降( P＜0. 05);而当miR-378a mimics与携带CD226突变型3'UTR质粒共转染时,荧光素酶活性无显著变化( P＞0. 05).结论 CSCC细胞中miR-378a高表达并发挥促癌作用,下调该miRNA水平可抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力并诱导凋亡,可能通过靶向CD226来发挥促癌作用,在CSCC靶向治疗中有一定的应用前景.

目的 探究血清中微小RNA-146a-3p(miR-146a-3p)水平与经皮冠状动脉介入术(PCI)后冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)动脉支架内再狭窄(ISR)的相关性.方法 2017年6月至2019年6月于安阳市第六人民医院接受院内PCI的197例冠心病患者为研究对象,所有患者随访3个月～18个月,均行冠状动脉(冠脉)造影,其中ISR(狭窄直径≥50％)患者76例(ISR组),无ISR患者121例(无ISR组).收集患者一般资料,包括:年龄、性别、体质指数(BMI)、高血压史、卒中史、吸烟史、饮酒史;所有患者术后2 h取静脉血5 ml,检测空腹血糖(FBG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高敏C反应蛋白(hs-CRP),并比较;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-146a-3p水平;Logistic分析影响PCI后冠心病动脉ISR的因素;受试者工作特性(ROC)曲线分析血清中miR-146a-3p水平对PCI后冠心病动脉ISR的诊断价值.结果 与无ISR组相比,ISR组血清中FBG、LDL-C、hs-CRP、miR-146a-3p水平升高(P<0.05).Logistic分析发现,miR-146a-3p是PCI后冠心病患者发生ISR的危险因素(P<0.05).ROC曲线显示,血清中miR-146a-3p预测PCI后冠心病患者发生ISR的曲线下面积为0.836,截断值为1.256,此时的敏感度为77.60％、特异度为81.80％.结论 PCI后冠心病动脉ISR患者血清中miR-146a-3p水平升高,是发生ISR的危险因素,具有一定诊断价值,临床上应予以重视.

目的 探究微小RNA-150-5p(miR-150-5p)、miR-197-3p、miR-145-3p、miR-27b四种miRNA在布鲁氏杆菌感染致脊柱炎(BS)以及脊柱结核(TS)患者诊治中应用价值.方法 以焦作市人民医院2016年7月-2019年7月收治的30例BS与32例TS作为研究对象,分别为BS组与TS组,同时选择同期于医院进行体检的健康者35名作为对照组.测定并比较外周血miR-150-5p、miR-197-3p、miR-145-3p、miR-27b四种miRNA表达水平及其在患者诊断治疗中临床意义.结果 三组外周血miR-150-5p、miR-145-3p、miR-27b表达水平为TS组BS组>对照组(P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-197-3p、miR-145-3p、miR-27b用于诊断脊柱结核曲线下面积(AUC)分别为0.938、0.880、0.729、0.528;BS组患者miR-150-5p、miR-197-3p、miR-145-3p、miR-27b水平与C-反应蛋白、红细胞沉降率、虎红平板凝集试验阳性、试管凝集试验滴度有关(P<0.05);BS组与TS组患者治疗后1年四种miRNA水平较治疗前改善(P<0.05),且治疗后1年两组患者上述四种miRNA水平与对照组比较差异无统计学意义.结论 BS与TS患者体内miR-150-5p、miR-197-3p、miR-145-3p、miR-27b表达水平异常,可用于两者病情诊断以及治疗疗效评价.