目的:探讨玻璃体腔注射雷珠单抗治疗湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)的临床疗效，及其对患者血浆中微小RNA(miRNA)-126、血管内皮生长因子(VEGF)-A的表达水平的影响。方法:前瞻性研究。纳入2018年6月—2019年6月蚌埠医学院第一附属医院眼科收治40例(40只眼)wAMD患者为wAMD组，其中男17例、女23例，年龄50～86岁。纳入同期在蚌埠医学院第一附属医院体检中心进行健康体检的中老年人为对照组(40人)，其中男18人、女22人，年龄53～81岁。wAMD组患者均接受单次玻璃体腔注射雷珠单抗0.05 mL治疗。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测对照组和wAMD组治疗前及治疗后1个月血浆miRNA-126相对表达水平，酶联免疫吸附试验检测血浆中VEGF-A水平。(1)比较对照组、wAMD组治疗前miRNA-126及VEGF-A的表达水平。(2)比较wAMD组治疗前、治疗后1个月血浆miRNA-126、VEGF-A表达水平，以及最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中央区视网膜厚度(CMT)、脉络膜新生血管(CNV)面积的变化情况。(3)分析wAMD组患者治疗前、治疗后1个月血浆miRNA-126的相对表达量与VEGF-A水平、CMT、CNV面积的相关性。结果:(1)wAMD组患者的miRNA-126相对表达量(0.86±0.11)低于对照组(1.04±0.10)，VEGF-A水平(329.09±17.58)pg/mL高于对照组(295.74±14.80)pg/mL，差异均有统计学意义( t＝8.010、9.179， P值均<0.01)。(2)wAMD组治疗后1个月miRNA-126相对表达量(1.47±0.27)较治疗前(0.86±0.11)增加，VEGF-A水平(315.36±15.44)pg/mL较治疗前(329.09±17.58)pg/mL降低，差异均有统计学意义( t＝19.410、8.048， P值均<0.01)；BCVA(0.45±0.11)较治疗前(0.83±0.16)增加，CMT与CNV面积分别为(296.53±21.52)μm，(0.58±0.18)mm 2，较治疗前的(311.88±37.25)μm、(0.70±0.17)mm 2均降低，差异均有统计学意义( t＝12.667、3.602、4.906， P值均<0.01)。(3)wAMD组患者治疗前及治疗后1个月血浆miRNA-126相对表达水平与VEGF-A、CMT、CNV面积均呈显著负相关( r治疗前＝－0.706、－0.723、－0.552， r治疗后1个月＝－0.783、－0.709、－0.620, P值均<0.01)。治疗前拟合VEGF-A、CMT、CNV面积与miRNA-126相对表达量之间的线性回归方程分别为： ?VEGF-A＝－112 XmiRNA－126＋426, ?CMT＝－243 XmiRNA-126＋522, ?CNV＝－0.84 XmiRNA-126＋1.42；治疗后线性回归方程分别为： ?VEGF-A＝－45.64 XmiRNA-126＋382， ?CMT＝－57.53 XmiRNA-126＋381， ?CNV＝－0.41 XmiRNA-126＋1.18。 结论:雷珠单抗可通过降低VEGF-A的表达，减少CMT及CNV面积，有效改善BCVA。雷珠单抗在取得临床疗效的同时，可能通过增强miRNA-126基因表达活性而延缓wAMD的进展。

目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:观察长链非编码RNA Linc00472(LncRNA Linc00472)靶向调控微小RNA-381(miR-381)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法:收集2017年3月至2018年5月郑州大学第一附属医院收治的骨肉瘤患者29例为研究对象，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨肉瘤组织和瘤旁组织中Linc00472的表达。将骨肉瘤U2OS细胞分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Linc00472组、pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组、pcDNA3.1-Linc00472＋miR-381组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。双荧光素酶报告实验鉴定Linc00472与miR-381的靶向关系。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:Linc00472在骨肉瘤组织中的表达水平低于瘤旁组织(0.31±0.03比1.03±0.10， t＝37.138， P<0.05)，差异有统计学意义；与pcDNA3.1组比较，pcDNA3.1-Linc00472组细胞存活率[(100.29±10.12)%比(53.29±5.44)%]低于pcDNA3.1组( t＝12.272， P<0.05)，差异有统计学意义，迁移细胞数[(266.00±23.61)个比(124.00±12.01)个]与侵袭细胞数[(131.00±13.06)个比(62.00±6.24)个]少于pcDNA3.1组( t＝16.082， P<0.05； t＝14.301， P<0.05)，差异有统计学意义，而细胞凋亡率[(8.58±0.91)%比(26.61±2.64)%]高于pcDNA3.1组( t＝19.370， P<0.05)，差异有统计学意义；miR-381过表达可抑制野生型载体WT-Linc00472细胞的荧光素酶活性( t＝19.827， P<0.05)，差异有统计学意义；与pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组比较，pcDNA3.1-Linc00472＋miR-381组可增强细胞增殖[(53.17±5.33)%比(85.26±8.62)%]、迁移[(122.00±12.31)个比(223.00±22.18)个]及侵袭[(64.00±6.36)个比(104.00±10.20)个]能力高于pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组( t＝9.499， P<0.05； t＝11.945， P<0.05； t＝9.983， P<0.05)，细胞凋亡率[(26.11±2.62)%比(13.11±1.34)%]低于pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组( t＝13.253， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:LncRNA Linc00472通过靶向调控miR-381可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭并诱导细胞凋亡。

目的 观察微小RNA(miR)-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的调控作用,并基于甲基转移酶SETDB1基因调控探讨相关机制.方法 采用RT-PCR法检测口腔癌细胞系CAL-27和正常口腔黏膜上皮细胞系ATCC中的miR-381-3p.培养CAL-27细胞,分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组和阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和miR-381-3p阴性对照,未转染组不进行转染;采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力.采用TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_80/)预测miR-381-3p与SETDB1结合位点,应用双荧光素酶报告基因分析进行验证;采用RT-PCR法检测CAL-27细胞和ATCC细胞中的SETDB1 mRNA,Western blotting法检测SETDB1蛋白;将CAL-27细胞分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组、阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和阴性对照,未转染组不进行转染,采用RT-PCR法检测SETDB1 mRNA.结果 CAL-27细胞中miR-381-3p表达低于ATCC细胞(P<0.05).模拟物组在培养12、24、36、48 h时细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).模拟物组细胞迁移距离、穿膜细胞数均低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).SETDB1存在连续的、可以与miR-381-3p互补的核苷酸序列;共转染SETDB1-WT和miR-381-3p质粒的CAL-27细胞相对荧光素酶活性低于其他组细胞(P均<0.05);CAL-27细胞中SETDB1 mRNA和蛋白表达高于ATCC细胞(P均<0.05);模拟物组SETDB1 mRNA表达低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).结论 miR-381-3p能够抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节SETDB1表达有关.

目的 探讨微小RNA-381-3p(MicroRNA-381-3p,miR-381-3p)对脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)大鼠继发性损伤的修复机制以及其对肿瘤抑制蛋白基因(Tumor protein p53,TP53)表达水平的调控机制.方法 双荧光素酶以及蛋白质免疫共沉淀检测miR-381-3p和TP53的作用;用改良Allen's重物垂直撞击法复制大鼠SCI模型;实验动物分为假手术(Sham)组、SCI组、miR-381-3p-mimic(mimic)组、mimic+pc DNA3.1 TP53(mimic+pc)组,每组各 10 只;mimic 组大鼠尾静脉注射 miR-318-3p mimic;mimic+pc 组大鼠尾静脉注射 miR-318-3p mimic 和 pc DNA3.1 TP53;Sham 组和 SCI 组大鼠尾静脉注射 miR-318-3p mimic-NC和pc DNA3.1 TP53-NC;检测各组大鼠的运动功能评分(Basso beattie bresnahan,BBB)评分;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记试剂盒(Terminal-deoxynucleoitidyl transferase-mediated nick end labeling,TUNEL)检测各组大鼠脊髓组织的细胞凋亡;超氧化物阴离子二氢乙啶(Dihydroethidium,DHE)荧光探针检测脊髓组织中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)自由基的水平;免疫荧光检测各组大鼠脊髓组织中小胶质细胞的表型转换;酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、白细胞介素-1β(Interleukin-1 β,IL-1β),IL-6,IL-4和IL-10的水平;彗星实验检测各组脊髓组织中的DNA损伤;Western blot实验检测各组大鼠脊髓组织中肿瘤抑制蛋白基因(Tumor protein p53,TP53)、核转录因子(Nuclear factor κB,NF-κB)、磷酸化组蛋白(γ-Histone family 2A variant,γ-H2AX)、B 淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和 Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl2-associated × protein,Bax)水平.结果 双荧光素酶以及蛋白质免疫共沉淀显示miR-381-3p调控TP53的表达水平.与Sham组比较,SCI组、mimic组、mimic+pc组大鼠的BBB评分、血清中SOD的活性、脊髓组织中M2型细胞的比例、Bcl-2的表达水平明显降低,脊髓组织中的细胞凋亡率、ROS的水平,血清中MDA,IL-1β,IL-6,IL-4和IL-1 0的水平,脊髓组织中M1型细胞的比例、DNA的Olive尾矩、TP53,NF-κB,γH2AX和Bax的表达水平明显升高(P均＜0.05);与SCI组比较,mimic组、mimic+pc组大鼠的BBB评分、血清中SOD的活性以及IL-4和IL-10的水平、脊髓组织中M2型细胞的比例、Bcl-2的表达水平明显升高,脊髓组织中的细胞凋亡率、ROS的水平,血清中MDA,IL-1β,IL-6的水平,脊髓组织中M,型细胞的比例、DNA的Olive尾矩、TP53,NF-κB,yH2AX和Bax的表达水平明显降低(P均＜0.05);与mimic组比较,mimic+pc组大鼠的BBB评分、血清中SOD的活性以及IL-4和IL-10的水平、脊髓组织中M2型细胞的比例、Bcl-2的表达水平明显降低,脊髓组织中的细胞凋亡率、ROS的水平、血清中MDA,IL-1β,IL-6的水平,脊髓组织中M1型细胞的比例、DNA的Olive尾矩、TP53,NF-κB,γH2AX和Bax的表达水平明显升高(P均＜0.05).结论 SCI大鼠模型miR-318-3p的表达水平明显降低,TP53的表达水平明显升高,miR-318-3p靶向TP53的表达水平,过表达miR-318-3p后能明显抑制实验动物脊髓组织中的氧化和炎症应激,减轻细胞的DNA损伤,降低脊髓组织中的细胞凋亡率,缓解动物脊髓组织的病理损伤.

目的:探讨微小RNA(miR)-381-3p对抑郁症大鼠海马区神经元损伤的影响及可能的调控机制.方法:通过皮质酮(CORT)皮下注射制备大鼠抑郁症模型并予以氟西汀治疗,通过测定大鼠体重、旷场试验和生化指标判定氟西汀的治疗效果,检测海马区miR-381-3p、脑源性神经营养因子(BNDF)、Bcl-2和Bax的表达.新生大鼠海马神经元预转染miR-381-3p inhibitor后,用CORT培养细胞,评估细胞存活率,检测细胞中miR-381-3p、BNDF、Bcl-2和Bax的表达.利用萤光素酶报告基因法验证miR-381-3p对BNDF的靶向调控作用.结果:与抑郁症模型大鼠相比,氟西汀治疗可增加大鼠的体重,增加跨场水平活动次数,提高去甲肾上腺素含量,抑制海马区miR-381-3p表达,并促进海马区BNDF的表达.沉默miR-381-3p可逆转CORT的效应,提高海马神经元的存活率,促进BD-NF和Bcl-2的表达,抑制Bax的表达.miR-381-3p靶向调控BNDF表达.结论:沉默miR-381-3p可减轻大鼠海马神经元CORT损伤,其机制可能与上调BNDF表达有关.

目的 探讨miR-381对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制.方法 实时定量 PCR(qRT-PCR)检测人正常胰腺导管上皮细胞系 HPDE6-C7及胰腺癌细胞系PANC-1、AsPC-1、Capan-1、BxPC-3中miR-381的表达量,将PANC-1细胞系分成miR-381模拟物组和阴性对照组,采用Lipofectamine 2000分别转染miR-381 mimics和scramble序列,转染24 h后,qRT-PCR测定两组细胞中miR-381的表达水平,CCK-8法测定细胞的增殖能力,细胞划痕实验和 Tr-answell实验检测两组细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot测定两组细胞肝受体类似物1(liver receptor homolog-1,LRH-1)mRNA和蛋白质的表达水平.结果 miR-381在胰腺癌细胞系PANC-1、AsPC-1、Capan-1及BxPC-3中的表达量显著低于 HPDE6-C7(均 P<0.05).转染24 h后,miRNA-381模拟物组miR-381的表达水平显著高于阴性对照组(P<0.01).CCK-8实验示:miR-381模拟物组在转染后3、4 d,A450 nm值显著低于阴性对照组.miR-381模拟物组划痕愈合率显著低于阴性对照组[(32.8 ± 2.3)% vs.(61.9 ± 5.6)%,P<0.05];miR-381模拟物组侵袭细胞数显著少于阴性对照组[(85.1 ± 3.9)vs.(215.3 ± 5.1),P<0.01].miR-381模拟物组LRH-1 mRNA相对表达量显著低于阴性对照组[(0.43 ± 0.04)vs.1.0,P<0.01];miR-381模拟物组LRH-1蛋白相对表达量显著低于阴性对照组(P<0.05).结论 miR-381在胰腺癌细胞系中低表达,miR-381过表达可抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调LRH-1表达有关.

目的 探究微小RNA-381(miR-381)调控高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞生长、侵袭及迁移的影响.方法 购置甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞及正常甲状腺细胞Nthy-ori-3各1株,取第3代细胞培养48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-381和HMGB1在甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞和正常甲状腺Nthy-ori-3细胞中的表达水平.利用Lipofectamine 2000转染miR-381 mimic后,检测IHH-4细胞中miR-381和HMGB1的表达水平.生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系.每孔按2×105/mL细胞密度接种IHH-4细胞,分为IHH-4组(甲状腺乳头状瘤细胞IHH-4组)、miR-381 mimic组(miR-381 mimic转染组)、pc-HMGB1组(HMGB1过表达转染组)、mimic+pc-HMGB1组(miR-381 mimic和pc-HMGB1共同转染组),每组设3个复孔,采用CCK8法检测各组IHH-4细胞活性,Transwell及划痕实验分别检测IHH-4细胞侵袭及迁移能力,免疫印迹法检测IHH-4细胞中Ki67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达水平.结果 与Nthy-ori-3细胞比较,IHH-4细胞中miR-381 mRNA水平降低,HMGB1 mRNA水平升高,差异有统计学意义(P<0.01).与IHH-4组相比,miR-381 mimic组miR-381表达增加(P<0.01).miR-381和HMGB1存在靶向关系.与IHH-4组相比,miR-381 mimic组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE表达均降低(P均<0.01),pc-HMGB1组上述指标均升高(P均<0.01);与miR-381 mimic组相比,mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE水平也明显上升(P均<0.01).结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制IHH-4细胞增殖、侵袭和迁移.

目的 探讨长链非编码RNA FLVCR1-AS1(lncRNA FLVCR1-AS1)调控微小RNA-381-3p(miR-381-3p)表达影响结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡的作用及机制.方法 取正常结肠上皮细胞FHC及CRC细胞SW480、DLD-1、HCT116,采用qRT-PCR法检测细胞中的FLVCR1-AS1与miR-381-3p.将FLVCR1-AS1表达最高的CRC细胞随机分为7组:NC组不处理,si-FLVCR1-AS1组、si-con组分别转染FLVCR1-AS1小干扰RNA及乱序无意义序列,miR-381-3p组、miR-con组分别转染miR-381-3p模拟物(mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-con),si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组分别共转染si-FLVCR1-AS1与miR-381-3p特异性寡核苷酸抑制剂及其阴性对照;采用MTT法测算细胞存活率,流式细胞术测算细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-Caspase-3).先用Starbase对FLVCR1-AS1和miR-381-3p结合进行预测,再以双荧光素酶报告基因检测FLVCR1-AS1与miR-381-3p的相互作用.结果 与FHC比较,SW480、DLD-1、HCT116中FLVCR1-AS1表达水平均升高而miR-381-3p表达水平均降低(P均<0.05),其中SW480的FLVCR1-AS1表达最高.与NC组、si-con组、miR-con组比较,si-FLVCR1-AS1组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin D1蛋白表达量降低、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量升高(P均<0.05);miR-381-3p组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin D1蛋白表达量降低、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量升高(P均<0.05);NC组、si-con组、miR-con组两两比较,差异均无统计学意义;与si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组细胞存活率升高、细胞凋亡率降低,细胞中Cyclin D1蛋白表达量升高、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量低(P均<0.05).Starbase预测显示,FLVCR1-AS1与miR-381-3p存在靶向结合位点;双荧光素酶报告实验显示,在转染野生型载体WT-FLVCR1-AS1的SW480细胞中,共转染miR-381-3p mimics的荧光素酶活性低于共转染miR-con的细胞(P<0.05).结论 lncRNA FLVCR1-AS1可靶向调节miR-381-3p以促进CRC细胞增殖、抑制细胞凋亡,该作用可能通过上调Cleaved-Caspase-3表达及下调Cyclin D1表达实现.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00598通过调控微小RNA-381-3p(miR-381-3p)表达影响宫颈癌细胞生物学行为的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa、HCC94和人正常宫颈上皮细胞H8中LINC00598的表达.选取LINC00598表达最高的细胞系,分别转染无意义阴性对照序列(对照组)和LINC00598小分子干扰RNA(siRNA组).qRT-PCR检测宫颈癌细胞中LINC00598表达.MTT法和Transwell侵袭实验分别检测宫颈癌细胞增殖情况和侵袭情况.DIANA数据库预测LINC00598的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00598与靶基因的调控关系.qRT-PCR和Western blot法检测LINC00598对靶基因表达的影响.结果 宫颈癌细胞系中LINC00598表达显著高于人正常宫颈上皮细胞H8(P<0.05),LINC00598表达最高的细胞系是HeLa(P<0.01).对照组和siRNA组LINC00598表达分别为1.05±0.19和0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组比较,沉默LINC00598表达可显著抑制HeLa细胞增殖(P<0.05)和侵袭(P<0.01).LINC00598可靶向结合miR-381-3p(P<0.01).与对照组比较,沉默LINC00598表达可显著促进miR-381-3p的表达(P<0.01),抑制成纤维细胞生长因子7(fibroblast growth factor 7,FGF7)基因的表达(P<0.01).结论 LINC00598在宫颈癌细胞系中高表达,沉默LINC00598表达能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能是靶向上调miR-381-3p表达实现的.