目的:探讨SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1（SETDB1）基因在卵巢高级别浆液性癌（HGSOC）组织中的表达，并探讨其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞增殖、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:（1）收集2009年1月至2014年12月在郑州大学第一附属医院接受初次手术治疗且临床病理资料完整的90例HGSOC患者的癌组织标本，以同期收治的30例因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术患者的正常卵巢组织标本为对照。应用荧光定量PCR技术、免疫组化法检测SETDB1 mRNA、蛋白在HGSOC组织、正常卵巢组织中的表达，分析SETDB1蛋白表达与HGSOC患者临床病理特征、预后的关系；（2）荧光定量PCR技术检测卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达。（3）过度表达及沉默SETDB1基因的卵巢癌细胞株的构建及筛选后，活细胞计数法检测转染后卵巢癌细胞的增殖能力，穿膜（transwell）小室实验检测转染后卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。（4）蛋白印迹（western blot）法检测转染后卵巢癌细胞中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路关键分子［包括磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）］及上皮-间质转化（EMT）相关蛋白［包括E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Slug）、波形蛋白（vimentin）］的表达。结果:（1）与正常卵巢组织比较，HGSOC组织中STEDB1 mRNA、蛋白的表达水平均显著增高（ P均<0.01），且STEDB1蛋白表达与HGSOC患者的手术病理分期、淋巴结转移状态均显著有关（ P均<0.05）；Kaplan-Meier法生存分析显示，SETDB1蛋白阳性表达患者的中位总生存时间显著短于SETDB1阴性表达者（分别为31.0、43.4个月， P=0.020）。（2）卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达水平，均显著高于正常卵巢细胞系T29细胞（ P均<0.01）。（3）沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著低于其对照SKOV3-NC细胞（ P均<0.01）；过度表达SETDB1基因的OVCAR3-SETDB1细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著高于其对照OVCAR3-NC细胞（ P均<0.01）。（4）与对照SKOV3-NC细胞比较，沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度均显著降低，E-cadherin蛋白的表达强度均显著增高；与对照OVCAR3-NC细胞比较，过度表达SETDB1基因的OVCAR3-pSETDB1细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度显著增高，E-cadherin蛋白的表达强度显著降低。 结论:SETDB1基因在HGSOC组织和卵巢癌细胞中均呈高表达，过度表达SETDB1基因可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭，其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路及促进肿瘤细胞EMT相关。

目的 观察微小RNA(miR)-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的调控作用,并基于甲基转移酶SETDB1基因调控探讨相关机制.方法 采用RT-PCR法检测口腔癌细胞系CAL-27和正常口腔黏膜上皮细胞系ATCC中的miR-381-3p.培养CAL-27细胞,分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组和阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和miR-381-3p阴性对照,未转染组不进行转染;采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力.采用TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_80/)预测miR-381-3p与SETDB1结合位点,应用双荧光素酶报告基因分析进行验证;采用RT-PCR法检测CAL-27细胞和ATCC细胞中的SETDB1 mRNA,Western blotting法检测SETDB1蛋白;将CAL-27细胞分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组、阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和阴性对照,未转染组不进行转染,采用RT-PCR法检测SETDB1 mRNA.结果 CAL-27细胞中miR-381-3p表达低于ATCC细胞(P<0.05).模拟物组在培养12、24、36、48 h时细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).模拟物组细胞迁移距离、穿膜细胞数均低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).SETDB1存在连续的、可以与miR-381-3p互补的核苷酸序列;共转染SETDB1-WT和miR-381-3p质粒的CAL-27细胞相对荧光素酶活性低于其他组细胞(P均<0.05);CAL-27细胞中SETDB1 mRNA和蛋白表达高于ATCC细胞(P均<0.05);模拟物组SETDB1 mRNA表达低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05).结论 miR-381-3p能够抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节SETDB1表达有关.

目的:研究乳腺癌超声弹性成像定量参数与病灶内癌细胞凋亡、侵袭异常的相关性.方法:选择在本院接受手术切除的乳腺肿瘤患者作为研究对象,根据术后病理检查结果判断病灶性质并分为恶性组、良性组.术前进行超声弹性成像检查并测定弹性量值;术后采集病灶组织并测定凋亡基因及侵袭基因的表达量.结果:恶性组乳腺癌病灶的弹性量值显著高于良性组患者乳腺纤维腺瘤病灶;恶性组乳腺癌病灶内TNFR1、XIAP、Livin、MMP2、Sam68、SETDB1的mRNA表达量显著高于良性组患者乳腺纤维腺瘤病灶,TCEAL7、ARHI、ARID1A、YAP、LAIR1的mRNA表达量均显著低于良性组患者乳腺纤维腺瘤病灶;恶性组中高弹性量值的乳腺癌病灶内 TNFR1、XIAP、Livin、MMP2、Sam68、SETDB1的mRNA表达量显著高于低弹性量值的乳腺癌病灶,TCEAL7、ARHI、ARID1A、YAP、LAIR1的mRNA表达量均显著低于低弹性量值的乳腺癌病灶.结论:乳腺癌超声弹性成像定量参数弹性量值的升高与病灶内癌细胞异常的凋亡、侵袭密切相关.

目的:利用生物信息分析方法对骨关节炎软骨下骨全基因表达谱进行转录因子预测及分析.方法:下载基因芯片实验数据(GSE30322),使用软件包limma packagein R(版本:3.3.1)筛选差异表达基因,筛选差异基因的标准以基因表达上调或下调的倍数≥2为标准(P＜0.05),进一步使用Cytoscape软件(版本:3.4.0)的iRegulon插件预测分析调控这些差异表达基因的转录因子,并分析预测的转录因子所调控的差异表达基因.结果:发现上调的差异表达基因可能相关15个转录因子及其相对应的靶基因:FOXN4,NANOS1,E2F6,RAD21,MECOM,ETS1,MEF2A,POU2F3, BRCA1,GATA3,ZNF706,ZBTB33,SUZ12,DBP,SETDB1等.发现下调的差异表达基因可能相关12个转录因子及其相对应的靶基因:ARID3A,YY1,RDBP,ATF1,CRX,TAF1,XBP1,SOX3,E2F4,PGR,TIMM8A,HOXA2等.结论:预测分析的转录因子可能在骨关节炎软骨下骨致病机制调控中起了重要作用,其有可能成为新的防治骨关节炎的靶点.

目的 检测甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭转移的影响并探讨其机制.方法 应用Western blot、免疫组化以及Real-time PCR等方法检测37例肝癌及对应癌旁组织标本中SETDB2蛋白及mRNA表达情况.将靶向SETDB2的短发卡RNA(sh-SETDB2)和空载体(sh-NC)分别转染至人肝癌MHCC97H细胞构建稳转细胞系,应用Tanswell侵袭实验、细胞划痕实验检测2组细胞的侵袭和迁移能力.通过基因芯片检测敲低SETDB2后表达有变化的基因.敲低SETDB2后,运用Real-time PCR检测PTEN的mRNA的表达变化以及Western blot检测PTEN和组蛋白H3第9位赖氨酸的三甲基化(H3K9me3)的表达变化,CHIP检测H3K9me3在PTEN的启动子区域的变化.在敲低SETDB2的同时敲低PTEN的表达,Tanswell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 (1)Western blot和Real-time PCR的结果均表明肝癌组织中SETDB2蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织;SETDB2表达的高低与肝癌组织学分级和TNM分期有关.(2)转染sh-SETDB2的MHCC97H细胞的侵袭和迁移能力均明显低于sh-NC组.(3)基因芯片、Western blot以及Real-time PCR等实验结果显示敲低SETDB2后PTEN表达上调.(4)在敲低SETDB2后H3K9me3表达下调,PTEN启动子区域的H3K9me3减少.(5)与敲低SETDB1组相比,敲低SETDB2的同时敲低PTEN后细胞的侵袭能力恢复.结论 SETDB2通过下调PTEN的表达促进肝癌细胞的侵袭迁移.

组蛋白甲基转移酶家族是表观遗传调控的关键参与者.SET结构域分支型1(SETDB1)是组蛋白甲基转移酶家族的成员,其在组蛋白H3上甲基化赖氨酸9位点,在涉及转录抑制和常染色体基因沉默的生物网络中显示多重功能.该综述总结了SETDB1的结构和功能,以及相关疾病的发生和发展所涉及的分子机制的最新进展,以期对疾病诊断和临床治疗有所帮助.

目的:探讨KRAS基因突变与SETDB1(set domain bifurcated 1)蛋白表达在结直肠癌中的临床意义及两者间的关系.方法:收集2017年1月至2017年12月于西南医科大学附属医院住院接受诊治的122例结直肠癌患者的组织标本及病例资料,采用二代测序技术(NGS)检测KRAS基因突变情况,免疫组织化学染色检测SETDB1蛋白的表达情况.结果:122例结直肠癌组织中KRAS基因突变率为41.8％,KRAS基因突变状态与肿瘤部位、术前血清CEA水平相关(P<0.05),与年龄、性别、分化程度、肿瘤大小、pT-NM分期、淋巴结转移等无关(P>0.05).KRAS基因突变状态与SETDB1蛋白表达呈正相关(r=0.232,P=0.008).SETDB1蛋白水平与肿瘤分化程度、大小及术前血清CEA水平相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤部位、pTNM分期、淋巴结转移等无关(P>0.05).结论:SETDB1蛋白在KRAS突变型结直肠癌组织中呈现高表达,KRAS基因突变可能影响SETDB1蛋白表达.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HULC通过下调微小RNA?29(miR?29)的表达促进肝细胞癌(HCC)细胞增殖的作用及分子机制.方法 运用实时荧光定量PCR法检测HCC组织和细胞中HULC和miR?29的表达水平,并进行相关性分析. HCC细胞转染HULC过表达质粒或以小干扰RNA(siRNA)敲低HULC的表达,以实时荧光定量PCR检测miR?29和靶基因SET结构域分支1 (SETDB1)的表达水平.通过生物信息学预测HULC序列上存在的miR?29结合位点,构建报告基因质粒与miR?29模拟物、miR?29抑制物共转染HCC细胞,通过双荧光素酶报告基因实验验证HULC靶向调控miR?29的分子机制.以细胞计数盒8(CCK?8)法检测miR?29对HULC的促HCC细胞增殖作用的影响.以实时荧光定量PCR法检测Ki?67的表达.建立Hep3B细胞移植瘤模型,瘤内注射miR?29模拟物、miR?29抑制物、miR?29阴性对照,观察肿瘤体积.采用免疫组化法检测小鼠肿瘤组织中肿瘤增殖抗原Ki?67的表达.结果 与癌旁组织和正常肝细胞比较,HULC在HCC组织和HCC细胞中均呈高表达(P＜0.01),而miR?29均呈低表达( P＜0.01),HULC和miR?29在HCC组织( r＝－0.754, P＜0.01)和HCC细胞(r＝－0.865,P＜0.05)中的表达均呈负相关.与空白对照组比较,过表达HULC组Huh7细胞中 miR?29 表达明显降低,而 miR?29 靶基因 SETDB1 mRNA 的表达升高( P＜0.01), si?HULC组Hep3B细胞中miR?29表达明显升高,而 miR?29靶基因 SETDB1 mRNA的表达降低(P＜0.01). miR?29模拟物可显著抑制转染psi?HULC?WT质粒组但不能抑制转染突变( psi?HULC?Mut)组Hep3B细胞的荧光素酶活性,而miR?29抑制物可拮抗miR?29模拟物对psi?HULC?WT荧光素酶活性的抑制作用(P＜0.01).与对照组比较,miR?29模拟物组Huh7细胞的增殖能力明显减弱.处理24、48和72 h后, HULC过表达组Huh7细胞的增殖率分别为(43.87±3.82)%、(83.45±7.46)%和(123.34± 8.67)%,与对照组[分别为(13.45±1.77)%、(23.54±1.37)%和(38.21±2.09)%]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).处理48和72 h后,转染miR?29模拟物组Huh7细胞的增殖率分别为(57.10±1.94)%和(73.76±3.46)%,与对照组[分别为(83.45± 7.46)%和(123.34± 8.67)%]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).处理48和72 h后,转染 miR?29模拟物+miR?29抑制物组 Huh7细胞的增殖率分别为(76.45±3.24)%和(89.37±4.37)%,与对照组[分别为(57.10±1.94)%和(73.76±3.46)%]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,转染48 h,转染miR?29模拟物Huh7细胞中Ki?67 mRNA的表达明显受到抑制(P＜0.01).转染miR?29抑制物Huh7细胞中Ki?67 mRNA的表达升高(P＜0.01).对照组、miR?29模拟物组和miR?29模拟物+miR?29抑制物组裸鼠移植瘤的肿瘤体积分别为( 504.0 ± 19.6)mm3、(310.0±24.3)mm3 和(483.7±21.2)mm3.与对照组比较,miR?29模拟物组的裸鼠成瘤能力明显降低(P＜0.01).与miR?29模拟物组比较,miR?29模拟物+miR?29抑制物组裸鼠成瘤能力增强(P＜0.01).对照组、miR?29模拟物组、miR?29模拟物+miR?29抑制物组荷瘤鼠肿瘤组织中Ki?67蛋白的吸光度值分别为0.65±0.08、0.36±0.07、0.56±0.06.与对照组比较,miR?29模拟物组Ki?67蛋白表达量明显降低(P＜0.01).与miR?29模拟物组比较,miR?29模拟物+miR?29抑制物组Ki?67蛋白表达量升高(P＜0.01).结论 lncRNA HULC通过分子吸附miR?29、并下调miR?29的表达促进HCC细胞增殖. HULC下调miR?29表达可能是其参与促进HCC生长的新机制.

目的 通过研究三阴性乳腺癌(TNBC)患者中的免疫微环境细胞浸润情况,从免疫微环境层面对TNBC患者的预后进行分析,提出新的TNBC免疫预后相关生物学标志物并描述其在TNBC中的生物学过程,为临床治疗TNBC提供新的治疗靶点.方法 检索GEO TNBC相关公开数据库并下载样本的转录组学信息,通过CIBERSORT分析TNBC患者的免疫细胞成分,再通过无监督聚类对TNBC患者的免疫细胞成分进行聚类,寻找最佳的分类类型.采用差异基因分析探索TNBC中表达量异常的基因;通过lasso-logistic模型进行降维筛选免疫亚型的生物标志物;通过WGCNA进行基因共表达分析,并通过GSEA分析基因模块的主要富集的通路注释其参与的生物学过程.结果 通过整理下载的GSE103091数据,共纳入包含mRNA数据和完整总生存数据TNBC患者100例,其免疫细胞成分可分两类:低免疫浸润组43例,其中转移19例(44.2％);高免疫浸润组57例,其中转移11例(19.3％),两组转移患者比例差异有统计学意义(χ2=6.09,P=0.01).低免疫浸润主要受到正向免疫调节相关通路和细胞刺激因子相关通路的调控,患者总生存较低,预后不良.通过Lasso-Logistic迭代特征选取算法分析发现,FOLH1、WDR18、LINC00638、OAS3、SETDB2可以很好地代表TNBC的免疫亚型,并且发现FOLH1、WDR18、LINC00638、OAS3、SETDB2可以作为预测TNBC患者预后的关键基因.结论 在TNBC患者中FOLH1、WDR18、LINC00638、OAS3、SETDB2是重要的预后相关基因,并且通过T细胞激活等免疫调节相关通路影响患者预后.

目的 探讨沉默组蛋白赖氨酸甲基转移酶SETDB1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响.方法 qRT-PCR方法与Western blot方法检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中SETDB1的表达.采用稳定转染方法筛选出沉默SETDB1基因的SW480细胞,克隆形成实验及流式细胞术检测沉默SETDB1对SW480细胞增殖与凋亡的影响;Transwell实验检测沉默SETDB1对SW480细胞侵袭迁移能力的影响.结果 SETDB1在人结直肠癌细胞SW480中表达显著高于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460.克隆形成实验及流式细胞术检测结果发现,沉默SETDB1基因能够促进SW480细胞凋亡,抑制增殖;Transwell实验检测结果发现,沉默SETDB1基因能够抑制SW480细胞侵袭和迁移.结论 SETDB1在人结直肠癌细胞株SW480中高表达,沉默SETDB1基因能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡.