目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-762对胰腺癌PANC-1细胞株吉西他滨(GEM)耐药性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-762在GEM耐药的胰腺癌细胞株PANC-1/GEM和购自中国科学院上海生科院细胞资源中心的非耐药株PANC-1中的表达。通过Lipofectamine? 2000将miR-762 mimics、miR-762 inhibitors及其scramble序列分别转染PANC-1/GEM细胞。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖及GEM敏感性；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达。应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料采用均值±标准差( Mean± SD)表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验。 结果:miR-762 mRNA在GEM耐药的胰腺癌细胞株PANC-1/GEM中的表达量(2.88±0.37)显著高于非耐药株(1.22±0.32)，差异有统计学意义( t＝7.340， P<0.01)。转染miR-762 mimics后PANC-1/GEM细胞miR-762 mRNA相对表达量(4.96±0.67)与阴性对照组(2.87±0.45)比较显著增高( t＝－4.920， P<0.01)，差异有统计学意义，而转染miR-762 inhibitors后PANC-1/GEM细胞miR-762 mRNA表达量(0.72±0.18)与阴性对照组(2.87±0.45)比较显著降低( t＝8.430， P<0.01)，差异有统计学意义。同时miR-762 mimics组吸光度( A) 450值、半数抑制浓度(IC 50)值及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达量显著增高，细胞凋亡率及bcl-2相关X蛋白(bax)表达量显著降低；而miR-762 inhibitors组 A450值、IC 50值及bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量显著降低，细胞凋亡率及bax蛋白表达量显著增高( P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:miR-762在胰腺癌耐药细胞株中高表达，能够诱导胰腺癌细胞增殖并抑制其凋亡，从而导致胰腺癌细胞对GEM耐药，其机制可能与上调bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β表达、下调bax表达有关。

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 检测微小RNA-762(miR-762)在结直肠癌(CRC)组织和细胞株中的表达情况,并探讨miR-762在CRC中的临床意义及作用机制.方法 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测48例CRC新鲜肿瘤组织及配对癌旁正常黏膜中miR-762的表达情况,同时检测上皮间充质转化(EMT)标志物基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的mRNA表达情况,并记录患者的临床病理资料.分析miR-762与患者临床病理特征的关系;Spearman相关分析探讨miR-762与MMP-9、E-cadherin、Vimentin mRNA的关系.应用miR-762抑制物转染结肠癌细胞株SW620中miR-762的表达;噻唑蓝(MTT)实验检测转染对SW620细胞活性的影响;Transwell小室实验检测转染对SW620细胞侵袭能力的影响;检测MMP-9、E-cadherin、Vimentin基因表达的变化.结果 qRT-PCR结果显示,miR-762在CRC组织中表达高于癌旁正常黏膜(P<0.05);在淋巴结转移阳性、TNM分期较晚的患者肿瘤组织中miR-762表达更高(P<0.05);在CRC组织中miR-762与MMP-9之间存在正相关,miR-762与E-cadherin存在负相关(P<0.05).抑制SW620细胞中miR-762表达后细胞活性下降、侵袭能力减弱,同时MMP-9、Vimentin的mRNA和蛋白表达降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达增高(均P<0.05).结论 miR-762在CRC组织中表达增高且可预测患者的肿瘤侵袭转移,miR-762可能调节CRC细胞的EMT而促进肿瘤进展.

目的 筛选原发性骨性关节炎(OA)膝关节软骨细胞中差异表达的环状RNA(circRNA)及miRNA,并分析其生物学功能、相关代谢通路及相互作用.方法 首先用GeneSpring software V13.0软件筛选出5例OA及5例正常对照的膝关节软骨细胞差异表达的CircRNA,然后对差异表达的CircRNA进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(采用KEGG通路数据库);将OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA原始数据(下载自ArrayExpress,获取号为:E-MTAB-3514)进行对数转换,然后使用Quantile方法对数据进行标准化处理,以P<0.05,OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA差异倍数≥2或≤0.5为筛选条件,用R包limma中的经验贝叶斯模型(eBayes)筛选差异表达的miR-NA;用miRror工具进行差异miRNA的靶基因预测,使用KOBAS软件对找到的靶基因进行GO及代谢通路注释富集分析.用miRanda软件对0A膝软骨细胞差异表达的miRNA进行miRNA-circRNA相互作用预测分析.结果 与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出1380个表达差异的circRNA,其中215个差异circRNA表达上调,1165个表达下调.分子功能层面,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合、钙通道调节剂活性;细胞组成层面,差异表达的circRNA主要影响细胞外基质成分、带状胶原纤维、纤维状胶原蛋白三聚体;生物学过程层面,差异表达的circRNA主要影响细胞成分形态发生、软骨细胞发育和肢体发育.差异表达的circRNA相关代谢通路与糖原生物合成、补体和凝血级联、PDGF信号途径、胶原纤维组装和其他多聚体结构有关.与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出差异表达miRNA 24个,其中上调表达及下调表达的miRNA各12个.生物学过程层面,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止、神经生长和细胞发育.细胞组成层面,主要影响细胞内部分、翻译释放因子复合体、膜结合的细胞器、核转录抑制因子复合物;在细胞组成层面,差异表达的miRNA主要影响有机环状化合物结合、核酸结合和杂环化合物结合;差异表达的miRNA主要与蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移、泛素蛋白酶体途径、基因表达和蛋白质代谢有关.与has-miR-762相关的circRNA有71个,与has-miR-18a-3p相关的circRNA有25个,与has-miR-136-5p相关的cir-cRNA有5个,与has-miR-3131相关的circRNA有17个,与has-miR3-189-3p相关的circRNA有29个.结论 OA膝关节软骨细胞中差异表达的circRNA有1380个,其中215个上调表达,1165个下调表达,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合等分子功能,细胞外基质成分、带状胶原纤维等细胞成分,糖原生物合成、补体和凝血级联等相关代谢通路.OA膝关节软骨细胞差异表达miRNA 24个,其中上、下调表达的miR-NA各12个,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止等分子功能,细胞内部分、翻译释放因子复合体等细胞成分,蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移等相关代谢通路.circRNA和miRNA共同通路有Cell adhesion molecules pathway、Circadian entrainment pathway;circRNA-miRNA相互作用网络中,has-miR-762、has-miR-18a-3p、has-miR-136-5p与circRNA关系最为密切.

目的 探讨血清微小RNA(micro RNA)在预测鼻咽癌患者化疗有效性方面的临床价值.方法 纳入2010年1月—2016年12月我院收治的187例接受顺铂联合化疗的鼻咽癌患者,其中化疗敏感患者123例,化疗抵抗患者64例.检测所有初次化疗前血清中miRNA的表达水平,并以健康体检人群为对照,评估血清miRNA与鼻咽癌患者化疗有效性的关系及其预测价值.结果 鼻咽癌患者血清miR-127水平显著高于健康对照组(4. 3 ± 1. 6 vs. 1. 4 ± 0. 5) (P<0. 001),化疗抵抗患者的血清miR-127水平显著高于化疗敏感患者(4. 5 ± 1. 3 vs. 3. 8 ± 1. 7) (P<0. 001). ROC曲线显示血清miR-127对鼻咽癌患者化疗抵抗的预测价值较好(AUC=0. 702,P<0. 001),最佳阈值为4. 2,灵敏度82. 3% ,特异度76. 3% .与化疗敏感组相比,化疗抵抗组患者的T3-4期、N3 期和TNM Ⅲ~Ⅳ期患者比例均明显升高(P<0. 01),且miR-127≥4. 2的比例也升高(P<0. 001).多因素Logistics回归分析显示TNM分期(OR=1. 655,95% CI:1. 142~2. 584,P=0. 016)和血清miR-127≥4. 2(OR=2. 231,95% CI:1. 762~4. 503,P=0. 001)是影响鼻咽癌患者化疗抵抗的独立危险因素.结论 血清miR-127水平的升高可能是预测鼻咽癌患者化疗抵抗的重要危险因素.

目的 探讨miR-200b-3p通过血管内皮生长因子A(VEGFA)调控胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰腺癌组织和细胞中miR-200b-3p表达水平;胰腺癌细胞PANC-1分为NC组、miR-200b-3p mimic组、si-VEGFA组及si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组.CCK-8和Transwell检测胰腺癌PANC-1细胞增殖活力以及细胞迁移和侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡实验检测PANC-1细胞凋亡;Western blotting和双荧光素酶报告基因验证miR-200b-3p与VEGFA的靶向关系.结果 miR-200b-3p在胰腺癌组织和细胞中低表达.PANC-1细胞过表达miR-200b-3p 48 h后,NC组和miR-200b-3p mimic组细胞增殖活性分别为1.250±0.028、0.983±0.044;迁移细胞数分别为402.700±21.530、158.000±17.620,侵袭细胞数分别为478.300±31.050、170.000±32.470,细胞凋亡百分比为(5.280±0.352)％、(7.430±0.393)％;miR-200b-3p mimic组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均显著低于NC组(t=5.060,P=0.007;t=8.796,P=0.001;t=6.863,P=0.002),细胞凋亡百分比显著高于NC组(t=4.076,P=0.015).VEGFA-WT单独转染细胞荧光强度为1.000±0.027,显著高于VEGFA-WT+miR-200b-3p mimic共转染细胞(0.632±0.048;t=6.637,P=0.003).VEGFA-MUT单独转染细胞荧光强度为1.000±0.049,与VEGFA-MUT+miR-200b-3p mimic共转染细胞差异无统计学意义(0.868±0.047;t=1.944,P=0.124).PANC-1细胞过表达miR-200b-3p 48 h后,NC组和miR-200b-3p mimic组中VEGFA相对表达量分别为1.000±0.058、0.762±0.020,miR-200b-3p mimic组显著低于NC组(t=3.908,P=0.017).PANC-1细胞转染si-VEGFA或同时转染si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor 48 h后,NC组、si-VEGFA组及si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组PANC-1细胞增殖活性分别为1.300±0.058、0.943±0.047、1.143±0.023,迁移细胞数分别为446.000±17.350、206.300±19.360、428.300±30.330,侵袭细胞数分别为510.300±24.550、175.700±24.290、473.700±35.530,组间差异具有统计学意义(F=15.830,P=0.004;F=33.530,P=0.001;F=38.860,P<0.001).si-VEGFA组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均显著低于NC组(P=0.003,P<0.001,P<0.001),而si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力与NC组差异无统计学意义(P=0.107,P=0.854,P=0.671).NC组、si-VEGFA组及si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组细胞凋亡百分比分别为(3.810±0.577)％、(7.373±0.482)％、(3.650±0.514)％,组间差异具有统计学意义(F=16.020,P=0.004),si-VEGFA组细胞凋亡百分比显著高于NC组(P=0.007),而si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组与NC组差异无统计学意义(P=0.975).结论 miR-200b-3p通过靶向下调VEGFA表达,进而抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡.

目的:检测口腔鳞癌微小RNA-762(miR-762)的表达,探讨其与癌细胞增殖和转移的相关性.方法:收集确诊为口腔鳞癌的患者共62例.肿瘤组织作为观察组,距肿物边缘大于2 cm的正常口腔黏膜组织作为对照组.应用实时荧光定量PCR法检测两组中miR-762的表达,并采用免疫组化法和Western blotting法检测观察组中Ki67、MMP-2和MMP-9的表达.结果:观察组miR-762的表达水平明显高于对照组.观察组miR-762的表达在有无脉管累犯、有无淋巴结转移和不同TNM分期间差异均有统计学意义,而在不同性别、年龄和分化程度间差异均无统计学意义.miR-762的表达与生存时间密切相关.相关分析显示,miR-762的表达与肿瘤的最大径、Ki67增殖指数、MMP-2和MMP-9的表达均呈正相关.结论:口腔鳞癌miR-762的表达升高,与病变的形成和进展有关.miR-762对癌细胞增殖有明显的促进作用,对癌细胞转移的调节可能是通过介导MMP-2和MM-9实现的.检测miR-762的表达可预测口腔鳞癌的预后.

目的 探讨微小RNA(microRNA/miR)-34a、miR-155和miR-486的单核苷酸多态性(SNP)与宫颈癌及宫颈上皮内瘤病变(CIN)的相关性.方法 选取2018-05-7-2019-10-28昆明医科大学第三附属医院确诊的762例宫颈癌患者(宫颈癌组)和436例CIN患者(CIN组),并选取同一时期在该医院参加体检的1003名健康女性作为对照组.采用TaqMan探针基因分型的方法对3组人群中miR-34a基因SNP位点rs2666433、miR-155基因SNP位点rs1547354和miR-486基因SNP位点rs565491进行基因分型,并分析上述3个SNP位点与宫颈癌及CIN的关联性.结果 miR-34a基因SNP位点rs2666433的等位基因(χ2=7.932,P=0.005)和基因型(χ2=13.022,P=0.002)在宫颈癌组和对照组之间分布频率差异有统计学意义,该结果表明该位点等位基因A(OR=1.24,95％CI:1.07～1.44)和基因型A/A(OR=1.98,95％CI:1.39～2.82)可能是宫颈癌发生的风险因素;而该位点的等位基因和基因型在CIN组和对照组之间分布频率差异无统计学意义,均P>0.016.miR-155基因SNP位点rs1547354和miR-486基因SNP位点rs565491的等位基因和基因型在宫颈癌组、CIN组和对照组之间的分布频率差异均无统计学意义,均P>0.016.结论 miR-34a基因SNP位点rs2666433可能与宫颈癌的发生风险相关.

目的 探讨微小RNA-762(miRNA-762)表达与大鼠受损心脏中线粒体功能和心脏功能的关系.方法 30只SD大鼠分为A组、B组、C组三组,每组各10只,B组和C组采用结扎左冠状动脉(冠脉)前降支法制备心肌缺血再灌注损伤模型,A组将前室间支分离但不结扎.造模成功后,C组给予50μl miRNA-762 antagomir尾静脉注射,B组和A组给予等量生理盐水尾静脉注射.造模成功后的第14 d,比较各组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、心脏线粒体功能[线粒体膜电位、线粒体过氧化物生成量、线粒体三磷酸腺苷(ATP)生成量]、心脏功能[左室收缩末期内径(LVEDs)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDd)]、心肌组织中miRNA-762表达量.结果 C组和B组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、心脏线粒体过氧化物生成量、LVEDd、LVEDs、miRNA-762表达量显著高于A组(P<0.05);C组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、心脏线粒体过氧化物生成量、LVEDd、LVEDs、miRNA-762表达量显著低于B组(P<0.05);C组和B组大鼠心脏线粒体ATP生成量、线粒体膜电位、LVEF、LVFS显著低于A组(P<0.05);C组大鼠心脏线粒体ATP生成量、线粒体膜电位、LVEF、LVFS显著高于B组(P<0.05).结论 抑制微小RNA-762表达能够促进大鼠受损心脏中线粒体功能和心脏功能恢复,这可为心脏疾病及线粒体相关疾病的治疗提供新的策略.