目的 分析外泌体微小RNA-877-5p(miR-877-5p)通过调控转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)轴诱导铁死亡对肝癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 检测正常肝细胞与肝癌细胞株中miR-877-5p表达量,并对MHCC97H细胞进行转染,分为空白组、miR-877-5p抑制剂组、miR-877-5p模拟物组,检测各组铁死亡相关因子Nrf2、HO-1表达量,观察并分析各组MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡情况.结果 与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞株中HEP3B、HCCLM3、HepG2、MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与肝癌细胞HEP3B、HCCLM3、HepG2相比,肝癌细胞MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与空白组相比,miR-877-5p抑制剂组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率降低(P<0.05),溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量升高(P<0.05),miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量降低(P<0.05);与miR-877-5p抑制剂组相比,miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1的表达量降低(P<0.05).结论 上调外泌体miR-877-5p可抑制Nrf2/HO-1轴的激活,促使铁死亡,抑制肝癌细胞增殖,加快癌细胞的凋亡速度.

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 探讨新生儿急性呼吸窘迫综合征(NARDS)患儿血清微小RNA-877-5p(miR-877-5p)表达变化及其临床意义.方法 选择NARDS患儿95例(观察组),病情严重程度:轻度38例、中度35例、重度22例,28 d内临床结局:死亡21例、存活74例,同期选择健康新生儿40例作为对照组.采集所有研究对象外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-877-5p表达,采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α.采用Spearman相关分析法分析NARDS患儿血清miR-877-5p表达与氧指数和血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平的关系.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-877-5p表达对NARDS诊断和预后的预测价值.结果 观察组血清miR-877-5p表达低于对照组,血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于对照组(P均<0.01).随着病情严重程度增加,NARDS患儿血清miR-877-5p表达逐渐降低,血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平逐渐升高(P均<0.01).Spearman相关分析显示,NARDS患儿血清miR-877-5p表达与氧指数和血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均呈负相关关系(rs分别为-0.785、-0.779、-0.778、-0.788,P均<0.01).NARDS患儿死亡者血清miR-877-5p表达低于其存活者(P<0.01).ROC曲线分析显示,血清miR-877-5p表达诊断NARDS的曲线下面积为0.857(95%CI:0.787～0.911),其最佳截断值为1.23,此时其诊断NARDS的灵敏度和特异度分别为73.68%、95.00%;血清miR-877-5p表达预测NARDS死亡的曲线下面积为0.805(95%CI:0.711～0.879),其最佳截断值为0.97,此时其预测NARDS死亡的灵敏度和特异度分别为80.95%、75.68%.结论 NARDS患儿血清miR-877-5p表达降低,其表达变化与病情严重程度和预后密切相关.

目的:研究微小RNA(miR)-877-5p对YAP1的调控作用及对乳腺癌细胞的增殖、迁移侵袭的影响.方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测miR-877-5p、YAP1 mRNA和YAP1蛋白在乳腺癌组织中的表达.利用LipofectamineTM 2000试剂将miR-877-5p或si-YAP1转染乳腺癌细胞MCF-7.噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验分析miR-877-5p与YAP1的靶向关系.共转染miR-877-5p和pcDNA-YAP1,观察YAP1过表达对miR-877-5p过表达诱导的MCF-7细胞增殖、迁移侵袭的影响.结果:乳腺癌组织中miR-877-5p表达量明显减少,YAP1 mRNA和YAP1蛋白表达量显著增加(P＜0.05).miR-877-5p过表达或抑制YAP1表达明显降低MCF-7细胞的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平,并显著提高p21蛋白表达量(P＜0.05).miR-877-5p靶向调控YAP1的表达.YAP1过表达逆转了miR-877-5p过表达对MCF-7细胞增殖、迁移侵袭、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用,以及对p21蛋白表达的促进作用.结论:miR-877-5p在乳腺癌组织中表达下调,miR-877-5p过表达通过靶向YAP1抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移侵袭.

目的 探讨猫白血病病毒C亚类受体1反义RNA1(FLVCR1-AS1)对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 收集2016年12月至2018年11月在海南医学院第二附属医院行手术治疗的35例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织.体外培养SiHa细胞,按不同转染分为si-NC组、小干扰RNA(si)-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、微小RNA (miR)-877-5p组、si-FLVCR1-AS1 +anti-miR-NC组、si-FLVCR 1-AS1+ anti-miR-877-5p组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达,RT-qPCR检测FLVCR1-AS1和miR-877-5p表达.双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-877-5p的调控关系.结果 宫颈癌组织中FLVCR1-AS1表达量高于癌旁组织(3.82±0.23 vs 1.00±0.08,t=68.510,P＜0.01);而miR-877-5p表达量低于癌旁组织(0.32±0.03 vs 1.00±0.05,t=68.993,P＜0.01).经转染后,si-FLVCR1-AS1组SiHa细胞中FLVCR1-AS1表达较si-NC组显著下调(P＜0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白的表达量均低于si-NC组(P＜0.01).miR-877-5p组SiHa细胞中miR-877-5p表达较miR-NC组显著上调(P＜0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均低于miR-NC组(P＜0.01).与miR-877-5p抑制剂共转染后,si-FLVCR1-AS1+ anti-miR-877-5p组SiHa细胞OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均高于si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组(P＜0.01).结论 FLVCR1-AS1可能通过靶向抑制miR-877-5p的表达促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨微小RNA-877-5p(miR-877-5p)对胃癌细胞活力、凋亡的影响及其分子机制.方法 本研究时间为2020年1—7月.胃癌和正常胃黏膜上皮细胞株购自美国典型培养物保藏中心.实时定量基因扩增荧光检测(qPCR)检测胃癌细胞株HGC-27、SUN-1、AGS和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中miR-877-5p和叉头框转录因子M1(FOXM1)信使核糖核酸(mRNA)表达.建立miR-877-5p过表达或抑制FOXM1表达细胞株,观察其在HGC-27细胞的活力、凋亡中的作用.MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测FOXM1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase 3)蛋白表达.TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-877-5p和FOXM1的靶向关系.共转染miR-877-5p模拟物和FOXM1过表达载体(pcDNA-FOXM1),研究FOXM1过表达对miR-877-5p过表达诱导的HGC-27细胞增殖和凋亡的影响.结果 与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,胃癌细胞HGC-27、SUN-1、AGS中的miR-877-5p表达下调(1.00±0.08比0.34±0.03,0.51±0.05,0.44±0.04,P<0.05),FOXM1 mRNA和蛋白表达上调(1.00±0.09比2.41±0.23,2.58±0.24,2.26±0.23,P<0.05).miR-877-5p过表达显著降低HGC-27细胞48 h、72 h的细胞活力(P<0.05),明显提高细胞凋亡率、p21、p27、Bax、cleaved-caspase3蛋白的水平(P<0.05),显著减少cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05).抑制FOXM1表达显著降低48 h、72 h的细胞活力(P<0.05),提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P<0.05),减少cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05).miR-877-5p靶向调控FOXM1的表达.FOXM1过表达后,miR-877-5p过表达对HGC-27细胞增殖、cyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用被逆转,其对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用也被逆转.结论 过表达miR-877-5p通过靶向调控FOXM1表达抑制胃癌细胞的活力,并诱导细胞凋亡.