目的 探究血清长链非编码RNA a/β水解酶域11反义RNA1(lncRNAs ABHD11-AS1)、微小RNA-1231(miR-1231)表达与胃癌根治术后复发转移及远期预后的相关性.方法 选取2018年7月至2020年7月进行胃癌根治术治疗的147例患者(胃癌组),根据复发转移情况,将患者分为复发转移组48例和未复发转移组99例,根据3年预后情况,分为生存组40例和死亡组107例,选取同期体检的健康人员132例作为对照组,采用实时荧光定量PCR 法测定血清 1 ncRNAs ABHD11-AS1、miR-1231 表达水平,采用 Pearson 法分析血清 lncRNAs ABHDl1-AS1、miR-1231的相关性,采用Logistic回归分析影响胃癌根治术后复发转移的因素.结果 与对照组比较,胃癌组lncRNAs ABHD11-AS1表达水平显著升高(P＜0.05),miR-1231表达水平显著降低(P＜0.05).血清1 ncRNAs ABHD11-AS1和miR-1231表达呈负相关(r=-0.691,P＜0.05).复发转移组肿瘤直径＞5 cm、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低分化、浸润深度T3+T4、有淋巴结转移的患者比例及lncRNAs ABHD11-AS1表达水平显著高于未复发转移组(P＜0.05),miR-1231 表达水平显著低于未复发转移患者,差异有统计学意义(P＜0.05).肿瘤直径、浸润深度、lncRNAs ABHD11-AS1是胃癌根治术后复发转移的独立危险因素,miR-1231是保护因素(P＜0.05).死亡组lncRNAs ABHD11-AS1表达水平显著高于生存组(P＜0.05),miR-1231水平显著低于生存组(P＜0.05).结论 胃癌患者血清中lncRNAs ABHD11-AS1表达水平升高,miR-1231表达水平降低,与胃癌根治术后复发转移及远期预后密切相关,可能作为胃癌根治术后复发转移及远期预后的标志物.

目的:观察高糖下调微小RNA(microRNA, miR)-99a对肝窦内皮细胞功能障碍的影响及二甲双胍的干预作用，探讨糖尿病发生脂肪肝的病理机制与二甲双胍对其可能的保护机制。方法:将人肝窦内皮细胞培养后随机分为正常对照组、高糖模型组、miR-99a过表达组、miR-99a过表达阴性对照组、胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor, IGF-1R)抑制剂组、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)抑制剂组、二甲双胍治疗组。采用实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR, RT-qPCR)法检测miR-99a mRNA的表达水平，Western印迹、免疫荧光法检测IGF-1R、磷酸化(phosphorylated, p-)mTOR、玻连蛋白(vitronectin, VN)的表达水平及定位分布，扫描电镜观察人肝窦内皮细胞超微结构。结果:与正常对照组相比，高糖模型组miR-99a mRNA表达明显下调( P＝0.008)，而IGF-1R、p-mTOR、VN蛋白表达均显著升高，其窗孔直径变小且数量减少；与高糖模型组相比，二甲双胍干预后miR-99a mRNA表达明显上调，而IGF-1R、p-mTOR、VN蛋白表达均明显降低( P＝0.001, P＝0.016, P＝0.005)，miR-99a过表达组、IGF-1R抑制剂组、mTOR抑制剂组和二甲双胍治疗组其窗孔直径变大、数量增多；miR-99a过表达后，IGF-1R、p-mTOR和VN的蛋白表达明显降低( P＝0.007, P＝0.013, P＝0.003)；给予IGF-1R抑制剂后，p-mTOR和VN的蛋白表达明显降低( P＝0.006, P＝0.009)；给予mTOR抑制剂后，VN的蛋白表达明显降低( P＝0.008)，而IGF-1R表达无明显变化( P＝0.553)。 结论:高糖下调miR-99a诱导肝窦功能障碍，其作用机制可能与调控IGF-1R/mTOR信号通路有关；二甲双胍增加miR-99a的表达从而抑制高糖诱导的肝窦功能障碍。

他克莫司治疗窗窄,个体间的药动学/药效学差异较大.以往研究表明临床指标和遗传因素可能是影响他克莫司剂量选择的重要因素,但这对个体差异的解释仍有限.近年来,微小RNA(miRNA)作为一种潜在的生物标志物和特异性治疗靶点受到广泛关注,该文汇总分析了与他克莫司代谢相关的miRNA研究进展,期望能够为该药临床个体化用药研究提供新的思路.目前关于miRNA与他克莫司相关性的研究,以miRNA对CYP3A5的影响居多,涉及miR-29a-3p、miR-99a-5p、miR-532-5p、miR-500a-5p等;与CYP3A4表达相关进而影响他克莫司药动学的miRNA,如miRNA-627-5p;作用于钙调磷酸酶进而影响他克莫司体内作用的miRNA,如miR-582-5p;肾移植患者尿液外泌体中与他克莫司剂量呈正相关的miRNA,如miR-155-5p和miR-223-3p,但这两种miRNA通过何种途径影响他克莫司浓度尚未阐明;可能与他克莫司体内不良反应相关的miRNA,如 miR-26b、miR-145、miR-183、miR-21-5p,miR-199a-5p 和 miR-214-3p、miR33a 有关.研究提示,miRNAs 能够在预测他克莫司疗效和不良反应方面提供新的生物标志物和干预靶点.

目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响.方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较.培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99a in-hibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况.结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06) (P＜0.01).3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P＜0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P＜0.05).miR-99a inhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P＜0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P＞0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P＜0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调.结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/ MMP-2蛋白表达而实现的.

目的:分析唐氏综合征(Down syndrome,DS)患儿与健康儿童外周血单个核细胞miRNA表达谱及其染色体分布特征.方法:采用Illumina测序技术分别对6例DS患儿(DS组)和6例健康儿童(对照组)外周血单个核细胞全基因组miRNA表达谱进行差异表达和染色体分布特征分析,并用Stem-loop qRT-PCR对差异表达miRNA的测序结果进行验证.结果:两样本共表达911个miRNA,编码于738个miRNA基因,在两样本中的染色体分布趋于一致,但表达丰度染色体分布却不同,DS组主要分布于7、13和21号染色体,而对照组主要分布于7和13号染色体.此外,911个miRNA中有114个miRNA在两样本中差异表达显著(差异倍数≥2且P≤0.001),其中DS组有103种高表达,包括21号染色体编码的5个miRNA(miR-99a、let-7c、miR-125b、miR-155和miR-802);11种低表达.结论:DS患儿外周血单个核细胞具有其特定的miRNA表达谱和染色体分布特征,两样本表达丰度差异分布染色体编码miRNA的差异表达可能与DS患者免疫缺陷等相关临床症状的形成有关.

目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-203 mRNA在乳腺浸润性导管癌(IDC)及增生性病变中的表达,探讨在各病变中的作用和临床病理间的关系.方法 应用一步法反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IDC及癌旁组织各60例及99例乳腺增生性病变和22例正常乳腺新鲜标本中miR-203 mRNA表达;并结合临床病理特征分析.结果 miR-203 mRNA表达强度在正常乳腺组织、导管上皮普通性增生(UDH)、导管上皮非典型增生(ADH)和导管原位癌(DCIS)及IDC中分别为1.36、0.98、0.79、0.66和0.42,逐渐减弱且差异有统计学意义(P=0.005).RT-PCR结果显示miR-203 mRNA:(1)在IDC 60例和癌旁组织中的表达水平分别为12％、89％,差异有统计学意义(P =0.003);(2)区域淋巴结转移:表达强度显示阳性组显著低于阴性组,N0＞ N1＞N2期(P=0.000);(3)临床TNM分期:表达强度两两比较显示Ⅰ期＞Ⅲ期(P=0.000);(4)组织学分级中:表达强度Ⅰ级＞Ⅱ级＞Ⅲ级(P=0.000).(5)雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(C-erbB-2)表达的关系:表达强度在ER、PR、C-erbB-2(-)与ER、PR、C-erbB-2(++)、(+++)比较,差异有统计学意义(P =0.003).结论 在IDC和不同乳腺增生性组织中其蛋白表达强度存在差异.miR-203基因异常表达在IDC发生发展过程中起重要的调控作用.

目的 检测miRNA-376c在结直肠癌组织及对应的癌旁正常组织中的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床特征及预后的关系.方法 收集202例结直肠癌患者的结直肠癌组织标本及癌旁正常组织标本.按照有无淋巴结转移,将结直肠癌组织分为A组(n=99)和B组(n=103),将癌旁正常组织分为C组(n=99)和D组(n=103);按照TNM分期将结直肠癌患者分为Ⅰ～Ⅱ期(n=101)、Ⅲ期(n=83)和Ⅳ期(n=18).采用实时荧光定量PCR的方法检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中miRNA-376c的表达水平;分析miRNA-376c与结直肠癌患者临床特征及预后的关系.结果 miRNA-376c在结直肠癌组织中的相对表达量为(-10.918±0.101),明显低于癌旁正常组织的(-9.700±0.103)(P＜0.01).A组中miRNA-376c的相对表达量明显高于B组[(-10.620±0.136)vs(-11.230±0.143),P＜0.01].miRNA-376c在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者结直肠癌组织中的相对表达量逐渐升高,分别为(-11.230±0.143)、(-10.790±0.147)、(-9.848±0.300),差异有统计学意义(F=8.22,P＜ 0.01).高表达的miRNA-376c与结直肠癌患者的不良预后相关.结论 高表达水平的miRNA-376c与结直肠癌患者的低分化、高TNM分期、发生淋巴结转移以及不良预后相关,miRNA-376c有可能作为预测结直肠癌患者术后进展及生存期的潜在标志物.

目的 探讨微小RNA-99a-5p(miR-99a-5p)对肝癌细胞HepG2侵袭和迁移的影响及对胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)的靶向调控作用.方法 收集本院2014年1月至2017年3月经手术切除的90对癌组织及癌旁组织,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中miR-99a-5p及IGF1R mRNA水平;采用脂质体法向HepG2细胞分别转染miR-99a-5p模拟物(过表达组)和miR-99a-5p阴性对照(NC组),采用QPCR法检测转染48 h后各组的miR-99a-5p水平以评价转染效率;分别采用Transwell和划痕实验比较各组的侵袭和迁移情况;QPCR和Western blotting检测各组的IGF1R mRNA和蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p对IGF1R的靶向作用.结果 QPCR检测结果显示,癌组织的miR-99a-5p水平为0.823±0.039,低于癌旁组织的1.016±0.013,而癌组织的IGF1R mRNA水平为1.329±0.024,高于癌旁组织的1.035±0.026,差异均有统计学意义(P＜0.05).过表达组转染48 h后的miR-99a-5p水平为1.487±0.027,均高于对照组的1.021±0.013和NC组的1.019±0.025,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组、NC组和过表达组的愈合率分别为(60.5±2.4)％、(58.4±3.3)％和(42.1±2.9)％,穿膜细胞数分别为(92.1±3.7)个、(95.2±4.9)个和(36.7±4.5)个,过表达组的愈合率和穿膜细胞数均少于其余两组(P＜0.05);过表达组的IGF1R mRNA和蛋白水平均低于其余两组(P＜0.05).双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-99a-5p显著抑制野生型IGF1R-3'-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P＜0.01),但是对突变型IGF 1R-3'-UTR荧光素酶活性无显著影响.结论 miR-99a-5p在肝癌中表达降低,且可抑制肝癌细胞的侵袭迁移过程,可能是通过靶向调控IGF1R来实现,可作为肝癌的潜在治疗靶点.

目的：检测先天性巨结肠（ HSCR）微小 RNA（microRNAs，miRNA）表达谱，并探讨差异表达的miRNAs 在 HSCR 发生中的作用。方法收集27例 HSCR 患儿的狭窄段及扩张段肠管组织，选取其中6例，应用 miRNA 芯片技术筛选 HSCR 的 miRNAs 表达谱。运用生物信息学软件预测 miRNAs 靶基因，采用实时荧光定量（qRT）-PCR 验证 miR-145-3p、miR-4505及 miR-1260a 在27例 HSCR 狭窄段和扩张段组织的表达差异。结果与扩张段肠管组织相比，狭窄段肠管表达上调超过2倍的 miRNAs 有19个，表达下调超过2倍的有7个（P 均﹤0.05）。利用靶基因预测软件找到了 miRNAs 的靶基因，如 SOX10、RET、L1CAM。qRT-PCR 证实不同组间 miR-145-3p（狭窄段1.42±0.42比扩张段0.90±0.31）及 miR-4505（狭窄段1.30±0.30比扩张段0.76±0.22）表达量差异具有统计学意义（P 均﹤0.001），且不同分型之间 miR-145-3p（长段型1.53±0.46比短段型1.16±0.12）及 miR-4505（长段型1.42±0.26比短段型1.00±0.16）的表达量差异均具有统计学意义（P 均﹤0.001），而 miR-1260a（狭窄段1.11±0.25比扩张段0.99±0.21）的表达差异无统计学意义（P =0.064）。结论HSCR 病变段及扩张段肠管存在miRNAs 表达差异，miR-145-3p 和miR-4505可能与HSCR 的发病密切相关。

目的 研究结肠癌组织中微小RNA (miRNA)表达谱的变化.方法 收集5例结肠癌和5例癌旁组织进行miR-NA基因芯片检测,从中筛选出异常表达的miRNA.通过生物信息学分析的方法对差异性表达miRNA所调控的靶基因、富集的生物过程和信号通路进行分析.结果 通过M-fymetrix miRNA4.0芯片检测,共筛选出73个差异性表达的miRNA,并对变化最明显的前13个上调及前13个下调的基因进行总结,其中包括hsa-miR-183-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-99a-5p等新的结肠癌相关基因.此外,生物信息学分析显示了差异性表达miRNA所调控的靶基因以及其所代表的生理意义,如蛋白质修饰过程、Wnt信号通路、癌症相关通路、翻译后蛋白质修饰、RAS信号通路、TP53转录调控等.结论 检测结肠癌组织中miRNA表达谱的变化,对探讨结肠癌发病机制,寻找早期诊断和预后标志物,扩展治疗策略提供新的视野.