目的 本研究旨在建立本中心去白细胞悬浮红细胞容量内部质量控制标准,以指导成分制备,加强内部质控,提高血液制剂的质量.方法 抽取本中心 2023 年 3-8 月使用 2 个厂家去白细胞型塑料血袋采集的全血1 523袋,分别称取过滤前及过滤后的重量,依据公式及测定的比重计算全血采集量、过滤损耗容量及产品容量.依据数据分布特征确定去白悬浮红细胞容量参考范围,分析全血采集量、过滤损耗容量及产品容量在两个厂家之间的差异.比较近一年去白细胞悬浮红细胞质控容量数据及另抽取的 100 袋去白细胞悬浮红细胞与参考区间的差异,验证参考区间的有效性.结果 样本总体全血采集量中位数为 402.0 mL,过滤损耗容量中位数为 41.4 mL;去白悬浮红细胞容量均数为 322.5 mL,其中使用厂家A去白细胞型塑料血袋的全血采集量(A:中位数 404.4 mL;B:中位数397.7 mL,P<0.01)及去白悬浮红细胞产品容量(A:均值 331.4 mL;B:均值 312.0 mL,P<0.01)均更高,且过滤损耗容量更低(A:中位数 39.5 mL;B:中位数 46.6 mL,P<0.01);去白悬浮红细胞容量数据标准差为 19.6,则去白悬浮红细胞容量参考区间为284.1～360.9 mL.验证样本及质控抽检数据均与区间样本无差异(P>0.05).结论 根据实际情况,将本中心去白细胞悬浮红细胞的容量标准确定为 284.1～360.9 mL.

目的 采用群体倍增水平(population doubling level,PDL)评价悬浮培养HEK293细胞的传代稳定性,并进行验证,以期为该细胞工业化生产培养提供实验依据.方法 将工作种子批HEK293细胞连续传代60d,每2d传1代,评价PDL增加至10～60时的细胞稳定性.通过相关研究结果计算获得当HEK293细胞传代培养至2 500L规模时,各代PDL应控制在2±0.2范围内.将工作种子批HEK293细胞经摇瓶(125、500、1 000、3 000 mL,共传4代)、细胞扩增系统(cell expansion system,CES)(25、25及50 L,共传3代)、生物反应器(100、500、500,共传3代)阶段培养,各代PDL均控制在2±0.2范围内,共培养3批,并分析细胞密度、活率、结团率、直径等指标.500 L生物反应器培养HEK293细胞72h,按MOI=5～10接种工作种子批腺病毒,培养2 d,收获病毒培养液,检测病毒颗粒数.结果 工作种子批HEK293细胞连续传代至PDL达60时仍能维持较高的细胞密度和活率.将PDL控制在2±0.2范围内,3批HEK293细胞在摇瓶、CES、生物反应器培养阶段的密度均＞2.0 × 106个/mL,活率均＞96％,细胞直径约为17μm;结团率均＜35％.3批500 L生物反应器培养的HEK293细胞接毒2 d后,病毒颗粒数分别达11.68× 1010、12.55 × 1010和9.38 × 1010vp/mL.结论 采用PDL评价HEK293细胞传代稳定性是可行的,可更科学地反映传代细胞的生长状态.

目的 分析经微柱凝集技术进行交叉配血主侧相合、次侧不合的原因及输血疗效.方法 收集 2021-01 至2023-10 在天津医科大学朱宪彝纪念医院 498 例进行交叉配血患者的数据,分析交叉配血主侧相合、次侧不合的原因,对直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性患者进行DAT分型检测、二磷酸氯喹放散试验,分析阳性原因.结果 498 例患者进行交叉配血累计 1115 次,检测出主侧相合、次侧不合共计 446 次(40%),次侧不合中检测出DAT阳性 433 次,占 97.1%,DAT阳性分型以单纯IgG型为主共 416 次,占96.1%;IgG+C3d混合型15 次,占3.5%,单纯C3d型2 次,占0.4%,二磷酸氯喹放散试验后患者的红细胞放散液抗体筛查试验结果均为阴性,60 例DAT阳性导致的主侧相合、次侧不合患者进行输血治疗选择输注悬浮红细胞,输血后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、血细胞比容(HCT)值均增加且符合理论预期值,总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)均在正常范围,无统计学差异(P>0.05),无溶血性输血反应发生,输注有效.结论 DAT阳性是导致本院输血治疗患者交叉配血主侧相合、次侧不合的主要原因,输注悬浮红细胞安全有效.

目的:探讨骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对肾损伤大鼠体内细胞焦亡的影响及其机制。方法:体外分离培养4~5周龄清洁级雌性SD大鼠的BMSC，取第3代细胞用于后续实验。采用成组设计，随机将15只6周龄清洁级雌性SD大鼠分为对照组、肾损伤模型组和BMSC组，每组5只。采用经尾静脉注射脂多糖（LPS）1 mg/kg构建肾损伤模型；对照组以相同途径给予等量生理盐水。BMSC组于制模后2 h经尾静脉注射BMSC 0.5 mL（含BMSC 2×10 6个）；肾损伤模型组和对照组给予等量生理盐水。于术后3 d取各组大鼠腹主动脉血，采用苦味酸法检测血肌酐（SCr）水平，采用二乙酰一肟法检测血尿素氮（BUN）水平，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血胱抑素C（Cys C）和白细胞介素（IL-1β、IL-18）水平。处死大鼠取肾组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测大鼠肾组织NOD样受体蛋白3（NLRP3）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测大鼠肾组织NLRP3、caspase-1的蛋白表达。 结果:体外培养显示，骨髓细胞悬液培养24 h后出现大量圆形贴壁细胞和悬浮细胞，培养4~5 d后有大量长梭形细胞聚集性贴壁生长，仍可见明显的杂质细胞，经胰酶消化并传代至第3代以长梭形贴壁细胞为主，基本纯化为BMSC。体内实验显示，与对照组比较，肾损伤模型组大鼠SCr、BUN、Cys C、IL-1β、IL-18水平均明显升高〔SCr（μmol/L）：85.22±2.29比21.80±0.59，BUN（mmol/L）：11.50±0.64比5.86±0.83，Cys C（mg/L）：0.13±0.01比0.11±0.02，IL-1β（ng/L）：31.49±1.42比4.74±0.49，IL-18（ng/L）：29.01±1.95比1.52±0.03，均 P<0.05〕，NLRP3及caspase-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高〔NLRP3 mRNA（2 -ΔΔCt）：3.635±0.296比1.000±0.002，caspase-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：4.020±0.228比1.001±0.003；NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin）：1.560±0.868比0.902±0.036，caspase-1蛋白（caspase-1/β-actin）：1.392±0.097比0.895±0.046，均 P<0.05〕。与肾损伤模型组比较，BMSC组大鼠SCr、BUN、IL-1β、IL-18水平均明显下降〔SCr（μmol/L）：51.64±3.84比85.22±2.29，BUN（mmol/L）：9.90±0.46比11.50±0.64，IL-1β（ng/L）：24.20±1.45比31.49±1.42，IL-18（ng/L）：12.97±1.25比29.01±1.95，均 P<0.05〕，NLRP3及caspase-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显下降〔NLRP3 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.488±0.136比3.635±0.296，caspase-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.643±0.143比4.020±0.228；NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin）：1.227±0.053比1.560±0.868，caspase-1蛋白（caspase-1/β-actin）：1.159±0.107比1.392±0.097，均 P<0.05〕。 结论:在体内，BMSC可以减轻LPS所致肾损伤大鼠的细胞焦亡。

回顾性分析2014年1月至2022年12月宁波市医疗中心李惠利医院收治的6例原发性肝脏腺鳞癌患者的临床资料，其中男性1例，女性5例，中位年龄66岁，年龄范围63~72岁。5例白细胞升高，5例轻度贫血，5例C-反应蛋白升高，5例谷氨酰转肽酶升高，5例肿瘤糖类抗原(CA)19-9升高，5例CA125升高，5例白蛋白轻度降低。所有患者术前甲胎蛋白均阴性。5例患者的病灶周边胆管呈不同程度扩张，5例患者的病灶压迫或侵犯门静脉分支，3例患者可见肝门淋巴结增大。手术时长(280±87)min，术中出血量200(88，275)ml，仅1例术中输注悬浮红细胞1.5单位，无围手术期死亡发生。术后6例病理诊断均为低分化原发性肝脏腺鳞癌，3例伴淋巴结转移，3例伴神经侵犯，4例伴肝被膜侵犯。4例患者术后接受辅助治疗。6例患者中位生存时间为14个月，至随访截止时，3例患者死于肿瘤复发，3例患者存活，其中1例为带瘤生存。

目的:分析二次心脏开胸手术后并发症和在院病死率，探讨二次开胸手术的可行性及安全性。方法:回顾性收集2012年11月至2021年11月期间在南京市第一医院实施心脏手术患者的一般资料和临床信息。根据是否行二次开胸手术分为二次手术组和首次手术组，行倾向性评分匹配。匹配后对两组患者的术中指标、术后并发症及在院病死率等进行比较。结果:倾向性评分匹配后两组各纳入146例患者。术中指标方面，二次开胸组体外循环时间[(141.48±47.88)min对(105.31±33.56)min]、主动脉阻断时间[87.0(70.5，113.3)min对71.5(53.0，92.0)min]、ICU停留时间[2(1，4)天对2(1，2)天]、术后胸腔引流量[750.0(460，1300)ml对610(410，840)ml]、术后输悬浮红细胞[0(0，3.5)U对0(0，2)U]明显增加( P<0.05)。术后并发症方面，二次开胸组术后低氧血症[15(10.3%)对6(4.1%)]、急性肾损伤[10(6.8%)对0(0)]、术后感染[24(16.4%)对4(2.7%)]、脑部并发症[7(4.8%)对1(0.7%)]发生率显著增高( P<0.05)。两组间在院病死率[7(4.8%)对4(2.8%)]差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:再次心脏开胸手术时间更长，术后恢复更慢，术后并发症发生率更高，但不提高在院病死率。

目的:探究体外将人诱导多能干细胞(hiPSCs)定向分化成视网膜类器官(ROs)的进程并进行小鼠在体细胞移植。方法:使用定向分化培养基使BC1-eGFP hiPSCs悬浮培养得到神经球，培养第7天时将神经球贴壁培养诱导出神经视网膜上皮结构，然后人工分离类视网膜结构悬浮培养，进一步定向诱导分化得到成熟的ROs。采用实时荧光定量PCR检测培养第0、7、15、21和30周标志基因的表达水平变化，采用免疫荧光染色法检测培养第8天、第15天、第15周、第21周和第30周标志基因的蛋白水平变化来鉴定诱导分化进程及效果。在体移植ROs实验中，首先破坏外界膜，然后将经消化的RO细胞悬液从角巩膜缘注射到 Gnat1-/-小鼠视网膜下腔，细胞移植后5个月进行视网膜切片的免疫荧光染色检测植入细胞的存活情况、与宿主视网膜的整合以及进一步的成熟分化情况。 结果:形态学和免疫荧光染色结果显示，体外诱导hiPSCs早期形成的眼区细胞高表达神经视网膜上皮特异性标志物PAX6和SOX1，随后细胞可以表达视网膜祖细胞特异性标志物LHX2，集落外圈逐渐形成圆形透明马蹄状的类视网膜结构。机械分离并悬浮培养得到的ROs直径约为1 mm，类视网膜组织逐渐增厚并出现类视网膜色素上皮细胞。实时荧光定量PCR结果显示视网膜祖细胞标志基因 VSX2表达在第7周即达峰值并持续高表达( F＝168.30， P<0.01)，视网膜前体细胞标志基因 RCVRN在第7周也开始出现并逐渐高表达( F＝271.60， P<0.01)，感光蛋白基因 RHO在第15周开始表达( F＝95.02， P<0.01)，而成熟感光细胞标志 OPN1LW/ MW的表达在第21周明显升高( F＝40.57， P<0.01)。免疫荧光染色进一步检测到感光蛋白RHO在第30周达高表达状态。RO细胞移植后3周，自身带有绿色荧光的细胞成功在宿主小鼠的视网膜外核层中长期存活，移植后5个月植入细胞表达功能性光信号转导蛋白GNAT1。 结论:体外3D培养诱导hiPSCs生成ROs可成功地模拟人体内视网膜的发育过程，移植的RO细胞能在受体小鼠眼内长期存活，进入外核层并进一步发育成熟为类感光细胞。

目的:探讨内镜下治疗上尿路尿路上皮癌的适应证、疗效和安全性。方法:回顾性分析2014年12月至2019年12月北京清华长庚医院收治的14例上尿路尿路上皮癌患者的临床资料。男5例，女9例。中位年龄75.5(44~84)岁。就诊原因为血尿11例，腰痛2例，无症状1例。5例既往有膀胱癌病史，1例有对侧肾盂癌病史。孤立肾4例，肾功能不全3例，双侧肾盂癌1例，因一般状态差(美国麻醉医生协会评分≥3分)无法耐受肾输尿管全长切除术4例，术前病理诊断为低级别非浸润性尿路上皮癌，要求行保肾治疗者2例。14例共15侧肿瘤，肿瘤主体位置位于肾盂6侧、上盏4侧、中盏3侧、下盏2侧。肿瘤直径中位值2.0(0.8~4.0)cm。患者术前经CT/CTU、MRI以及尿脱落细胞学或病理活检确诊为尿路上皮癌。本组14例共15侧手术。13侧行超声引导下经皮肾穿刺扩张，建立F24标准通道，在肾镜下采用1470半导体激光(60~80W)或铥激光(15~20W)汽化消融肿瘤组织，必要时电凝止血；2侧经尿道置入输尿管软镜，镜下采用200μm钬激光光纤行肿瘤消融，并使用钕激光止血。肿瘤汽化消融范围包括肿瘤周围0.5~1.0 cm正常肾盂黏膜，深至肾窦脂肪层，必要时汽化消融结束后基底部再次取活检。结果:本组15侧手术均顺利完成，中位手术时间51.7(39~115)min，术中出血量20.0(2~50)ml。术后5例发生并发症，1例为发热(体温>38.5℃)；4例为出血需输血(术后血红蛋白<70 g/L)，输2~4 U悬浮红细胞，无需肾动脉栓塞患者。病理诊断均为尿路上皮癌，病理分级为高级别6侧，低级别9侧；病理分期T a期8侧，T 1期5侧，T 2期2侧。中位随访31(11~70)个月，10例术后出现复发，复发中位时间11.3(4~41)个月。4例复发后行保守治疗，包括免疫治疗加放疗1例，全身化疗1例，等待观察2例；3例复发后再次行内镜下治疗，包括经皮肾镜下肿瘤激光消融2例，经尿道膀胱肿瘤切除术1例，术后随访均存活；3例复发后行肾输尿管全长切除术，术后随访2例死亡，1例存活。随访中共6例死亡，死亡中位时间为术后21(11~33)个月，其中5例为肿瘤特异性死亡，1例死于胃穿孔。随访期内中位无瘤生存期为11(4~41)个月，2年肿瘤特异性生存率为78.6%，其中高级别患者为50.0%，低级别患者为100.0%。 结论:对于分期较早(≤T 2期)且不能耐受肾输尿管全长切除术、孤立肾、肾功能不全或双侧上尿路尿路上皮癌的患者，内镜下治疗可作为安全、有效的替代方案，尤其对于低级别非浸润性患者可取得较好效果，但患者必须有良好的依从性，术后需定期行影像学、内镜或尿脱落细胞学随访。

目的:分析超快通道麻醉(ultra-fast track anesthesia，UFTA)管理下的先天性心脏病体外循环(cardiopulmonary bypass，CPB)手术患儿的围手术期资料，探讨影响UFTA的CPB因素。方法:回顾性分析2018年5月至2019年8月行CPB手术的1 034例患儿，根据是否成功实施UFTA分为UFTA组和UFTA失败组。采用倾向性评分匹配法筛选术前基线资料匹配的患儿，两组各纳入346例，先对两组可能的CPB因素进行单因素分析，有统计学意义的因素引入 logistic回归分析。 结果:单因素分析显示，CPB、主动脉阻断、CPB中最低温度及最低红细胞压积、晶体量、悬浮红细胞用量、二次或多次CPB、CPB后动脉血乳酸是影响UFTA的因素。 Logistic回归分析显示，CPB、主动脉阻断、CPB后动脉血乳酸、悬浮红细胞用量、二次或多次CPB是UFTA的独立影响因素。UFTA失败组的术后住院时间、ICU滞留、住院费用均高于UFTA组。 结论:CPB、主动脉阻断、CPB后动脉血乳酸、悬浮红细胞用量、二次或多次CPB是影响UFTA的独立危险因素。UFTA有利于缩短术后住院时间、ICU滞留及住院费用。

目的:分析少白细胞悬浮红细胞和普通悬浮红细胞输注对再生障碍性贫血患者红细胞免疫功能及凝血的影响。方法:选取2017年12月至2019年01月连云港市第一人民医院需要输血的再生障碍性贫血患者114例，随机分为少白细胞悬浮红细胞组(简称少白组，57例)和普通悬浮红细胞组(简称普通组，57例)。两组患者均予以环孢素和康力龙治疗，并输注血浆、血小板等血液制剂。在此基础上，少白组均加以少白细胞悬浮红细胞输注，普通组均加以普通悬浮红细胞输注。对比两组患者治疗前后的细胞免疫功能[红细胞C3b受体花环率(red blood cell-C 3b receptor garland rate，RBC-C 3bRR)、红细胞免疫复合物(red blood cell-circulation immune complex，RBC-CIC)以及红细胞超氧化物歧化酶(red blood cell-superoxide dismutase，RBC-SOD)]和凝血指标[凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血酶原时间(activated partial thromboplastin time，APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)和凝血酶时间(thrombin time，TT)]，并对比两组输血反应发生率。 结果:治疗前少白组和普通组红细胞免疫功能与凝血指标差异均无统计学意义( P>0.05)；治疗后两组患者RBC-C 3bRR、RBC-CIC和RBC-SOD水平均较治疗前明显升高[少白组：(18.36±2.44)%比(13.67±1.98)%，(14.36±2.26)%比(8.38±2.11)%，(70.34±12.68)μg/mg比(50.77±7.69)μg/mg， t值分别为11.268、14.602和9.963， P值均<0.05；普通组：(15.72±2.67)%比(13.39±2.14)%，(11.25±2.38)%比(8.42±2.04)%，(65.95±9.42)μg/mg比(51.08±8.61)μg/mg， t值分别为5.141、6.816和8.797， P值均<0.05]，差异具有统计学意义。另外，少白组RBC-C 3bRR, RBC-CIC，RBC-SOD和FIB均高于普通组[(18.36±2.44)%比(15.72±2.67)%，(14.36±2.26)%比(11.25±2.38)%，(70.34±12.68)μg/mg比(65.95±9.42)μg/mg，(3.48±0.37)g/L比(2.83±0.41)g/L， t值分别为5.511、7.154、2.098和8.886， P值均<0.05]，差异具有统计学意义。治疗后两组PT、APTT、TT均较治疗前明显缩短[少白组：(14.31±2.49)s比(18.25±2.36)s，(35.64±5.15)s比(42.39±4.16)s，(16.65±2.34)s比(19.46±2.66)s， t值分别为8.671、7.698和5.988， P值均<0.05；普通组：(16.86±2.57)s比(18.67±2.62)s，(38.61±5.34)s比(41.54±4.31)s，(17.97±2.15)s比(19.35±2.96)s， t值分别为3.723、3.224和2.848， P值均<0.05]，且治疗后少白组PT、APTT、TT均短于普通组[(14.31±2.49)s比(16.86±2.57)s，(35.64±5.15)s比(38.61±5.34)s，(16.65±2.34)s比(17.97±2.15)s， t值分别为3.155、3.022和3.136， P值均<0.05]；少白组输血反应发生率低于普通组[(1.75%比7.02%)， χ2＝2.837， P<0.05]，差异具有统计学意义。 结论:对再生障碍性贫血患者采用少白红细胞输注，较普通悬浮红细胞输注可以更好调节免疫功能，改善凝血功能，且输血反应发生率更低。