目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子 1α(PGC-1α)在人根尖牙乳头干细胞(hSCAPs)定向分化中的作用.方法:hSCAPs矿化诱导 0、3、7 d,实时荧光定量PCR检测PGC-1α的基因表达水平.转染小干扰RNA(siRNA)构建稳定低表达PGC-1α的hSCAPs,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测PGC-1α的表达水平,采用碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色分别检测ALP活性和矿化水平的变化,Western blot和实时荧光定量PCR检测成牙/骨向分化相关蛋白和基因的变化.结果:PGC-1α的基因表达水平在hSCAPs定向分化过程中逐渐上调.与对照组相比,低表达PGC-1α的hSCAPs其ALP表达量下降,矿化结节减少,牙本质涎磷蛋白(DSPP)、ALP、Runt相关转录因子 2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)等成牙/骨向分化相关指标表达水平下调(P＜0.05).结论:沉默PGC-1α表达可抑制hSCAPs定向分化.

目的:探讨雌激素缺乏对大鼠根尖牙乳头干细胞(SCAPs)增殖及牙向/骨向分化能力的影响.方法:选取 20 只 8 周龄雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组和卵巢去势(OVX)组,每组各 10 只.全麻下OVX组摘除双侧卵巢,Sham组行相同切口保留双侧卵巢,术前、术后 1 个月分别检测两组大鼠血清雌二醇水平.1 个月后每组各处死 5 只大鼠,分离切牙根尖牙乳头组织,酶消化法分离培养两组SCAPs,采用MTT、碱性磷酸酶(ALP)活性检测、实时荧光定量PCR、Western blot检测雌激素缺乏对大鼠SCAPs增殖及成牙/成骨向分化能力的影响.将两组SCAPs细胞以明胶海绵为载体分别植入对应组别大鼠肾被膜下,8 周后取出植入组织,使用数字化X线牙片机对取出团块曝光成像及HE染色观察其矿化能力.结果:OVX组大鼠去势1 个月后血清雌二醇水平显著低于术前(P＜0.001),Sham组大鼠血清雌二醇水平术前、术后差异无统计学意义(P＞0.05).MTT结果显示,OVX组SCAPs增殖能力显著下降(P＜0.001).ALP活性检测结果显示,OVX组SCAPs的ALP活性低于Sham组(P＜0.001).实时荧光定量PCR和Western blot结果均表明OVX组SCAPs的牙本质涎磷蛋白(DSPP)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)、骨钙素(OCN)等成牙/成骨相关基因和蛋白表达低于Sham组(P＜0.01).体内移植结果显示,Sham组形成密度较高的较规则牙髓-牙本质复合体,而OVX组形成不规则结构.结论:雌激素缺乏减弱大鼠SCAPs的增殖及牙向/骨向分化能力.

目的 探讨脂多糖(LPS)诱导分泌的外泌体对人牙髓干细胞(HDPSC)牙源性分化的影响及机制.方法 提取、分离及培养HDPSC,采用流式细胞术及Western blot鉴定细胞,观察成牙/成骨、成脂诱导HDPSC多向分化,筛选最适浓度LPS诱导HDPSC分泌外泌体、并提取外泌体,将HDPSC分为阴性对照组(PBS)、正常外泌体HDPSC组(N-HDPSC exo)及LPS诱导HDPSCs分泌的外泌体组(L-HDPSC exo),采用细胞增殖检测(MTT)法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况,碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组HDPSC成骨分化表达,采用实时荧光定量PCR检测各组HDPSCs中ALP、重组人牙本质基质蛋白 1(DMP-1)、牙本质涎蛋白(DSP)及核心结合蛋白因子2(RUNX2)成骨标志基因的表达,采用Western blot检测各组HDPSCs中转化生长因子-β(TGFβ1)、转化生长因子β受体(TGFβR1)、磷酸化SMAD家族成员2/3(p-SMAD2/3)、SMAD蛋白家族成员 2/3(SMAD2/3)及SMAD蛋白家族成员4(SMAD4)蛋白的表达.结果 成功分离培养并鉴定的牙髓干细胞,成脂诱导可见红色发亮脂滴,成骨诱导可见钙化结节;LPS诱导HDPSC分泌的外泌体符合其结构特征并且可被HDPSC所摄取;L-HDPSC exo组较N-HDPSC exo组和PBS组细胞增殖能力增加、凋亡水平下降、ALP染色程度增加(P＜0.05),ALP、DMP-1、DSP及RUNX2 表达增加(P＜0.05),TGFβ1、TGFβR1、p-SMAD2/3、SMAD2/3 及SMAD4 表达增加(P＜0.05).结论 LPS诱导HDPSC分泌的外泌体可促进HDPSC增殖及细胞活力,并可促进其向成牙/成骨向分化,机制可能与调控TGFβ1/SMADs信号通路、参与诱导正常牙髓干细胞牙源性分化有关.

目的:探讨高血糖大鼠牙髓干细胞(DPSCs)增殖及成牙/成骨分化能力.方法:选取3个月龄糖尿病模型动物GK大鼠及正常对照Wistar大鼠,测定尾静脉血糖值,待血糖稳定1周后,通过酶消化法分离培养两组大鼠DPSCs,通过MTT法测定两组大鼠DPSCs生长曲线,实时定量RT-PCR及Western blot检测两组大鼠DPSCs牙本质基质蛋白1(DMP1)、Osterix(Osx)、骨钙素(OCN)等成牙/成骨向分化指标的表达.结果:GK大鼠餐后2小时尾静脉血糖值稳定在20.1~22.3 mmol/L,Wistar大鼠为5.8~6.3 mmol/L.MTT结果显示,GK大鼠DPSCs增殖能力从培养第3天到第7天均较Wistar大鼠DPSCs低(P<0.05).实时定量RT-PCR及Western blot检测结果显示GK大鼠DPSCs成牙/成骨向分化指标的表达明显较正常对照Wistar大鼠低.结论:高血糖大鼠DPSCs增殖能力及成牙/成骨向分化能力均较正常大鼠低.

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, FGF-2)对3D培养的牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙分化的影响.方法:体外分离和培养DPSCs,通过成牙/成骨和成脂诱导,鉴定其多向分化的潜能;构建纳米纤维微球,将 DPSCs 与纳米纤维微球复合3D 培养,FGF -2 (20 ng/mL)刺激DPSCs 7 d,常规培养7 d,诱导培养7 d后,实时定量PCR和免疫荧光染色分别测定DPSCs成牙分化相关基因和蛋白的表达变化.结果:体外成功培养的DPSCs,具有成牙/成骨和成脂方向分化的潜能;FGF-2刺激3D培养的DPSCs后,成牙分化相关基因ALP、DMP1、OCN、DSPP以及成牙分化相关蛋白在2周时显著升高(P＜0.05).结论:FGF-2可效促进DPSCs向成牙本质样细胞分化.

目的 探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响.方法 利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化.通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分化相关基因的表达研究 SHEDs 体外成骨/成牙分化能力.Western Blot检测AKT信号分子的表达.结果 50mg/ml的丹参注射液促进SHEDs细胞ALP活性,体外矿化能力及成骨/成牙分化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达.50mg/ml的丹参注射液促进磷酸化AKT的表达.结论 50mg/ml的丹参注射液具有促进SHEDs细胞体外成骨/成牙分化的潜能,其作用可能与激活AKT信号通路相关.

背景:牙髓干细胞作为特殊的干细胞来源,具有高度增殖和自我更新能力,能在特定条件诱导下分化成多种组织细胞,为组织工程领域的发展寻觅了一条新的途径.目的:对牙髓干细胞的生物学特征、来源、分离方法及其在组织工程学中的应用和研究等方面作一综述.方法:由第一作者以"dental pulp stem cell,differentiation,regenerative medicine,tissue engineering"为英文关键词,以"牙髓干细胞,分化,再生医学,组织工程"为中文关键词,检索2005至2017年期间收录在PubMed,Medline,中国知网,万方等数据库中与牙髓干细胞和组织工程医学相关的文献,排除与文章研究目的无关及重复性的文献,纳入符合标准的66篇文献进行综述.结果与结论:随着组织工程医学和再生医学应用的不断发展,牙髓干细胞和组织工程支架的有效结合得以实现,目前研究的重点不仅仅关注于牙髓干细胞的成牙、成骨特性,其在神经修复、血管构建、角膜重建、软骨形成等方面也得到广泛应用.

目的:探讨重组人甲状旁腺素(1?34)[rhPTH(1?34)]对人根尖牙乳头干细胞(SCAPs)增殖和成牙成骨分化潜能的影响.方法:酶消化法原代培养SCAPs,分别用完全培养基、1×10-12、1×10-11、1×10-10、1×10-9、1×10-8 mol/L rhPTH(1?34)条件培养液间断性刺激SCAPs,碱性磷酸酶(ALP)检测法筛选最佳诱导浓度,CCK8法检测rhPTH(1?34)对SCAPs增殖的影响,实时定量RT?PCR检测rhPTH(1?34)作用于SCAPs后其成牙/成骨分化指标的变化.结果:1×10-8 mol/L rhPTH(1?34)间断性刺激能显著提高SCAPs的ALP活性;CCK8结果显示rhPTH(1?34)间断性作用于SCAPs后,其增殖能力无明显改变(P>0.05);rhPTH(1?34)间断性刺激可增强SCAPs中骨钙素(OCN)、Osterix、Runt相关转录因子2(RUNX2)、牙本质涎蛋白(DSP)等基因的表达(P<0.05).结论:rhPTH(1?34)间断刺激对人SCAPs的增殖无明显影响,但可促进其成牙/成骨向分化.

目的:检测釉基质蛋白(EMD)诱导乳牙生理性根吸收不同时期的牙周膜干细胞(PDLSCs)向成牙骨质细胞方向分化的能力及矿化相关蛋白表达水平的变化.方法:选取根吸收早期(E组)、中晚期(M组)的乳牙和恒前磨牙(P组)作为组织来源,并分离培养其PDLSCs;然后再将各组PDLSCs分为2个亚组:实验组用含100 mg/mL EMD的DMEM诱导培养,对照组用DMEM培养;并于诱导7 d后检测各组细胞中CAP、CEMP-1及BSP、OCN、ALP、COL-1表达水平的差异.结果:各组细胞经EMD诱导培养7 d后,实时定量PCR检测结果显示,与对照组相比,各实验组PDLSCs中BSP、ALP、COL-1的表达水平均显著上调(P<0.05),升高幅度为P组>E组>M组;P、E、M各实验组PDLSCs中CAP、CEMP-1 mRNA的表达水平为P组>E、M组(P<0.05),E组与M组间无统计学差异(P>0.05);BSP、OCN的表达水平均为P组>E组>M组(P<0.05);ALP的表达水平为P组>E、M组(P<0.05),E组和M组间无统计学差异(P>0.05);COL-1的表达水平在各实验组间相比无统计学差异(P>0.05).免疫组化染色结果显示,P、E、M各实验组PDLSCs中BSP、OCN、ALP、COL-1均呈阳性表达,对照组则显示染色不显著.结论:EMD可诱导乳牙PDLSCs向成牙骨质细胞方向分化.随着乳牙生理性根吸收的进行,乳牙PDLSCs向成牙骨质细胞方向分化的能力及矿化相关蛋白的表达水平均逐渐降低.

目的 探讨三碘甲腺原氨酸(3,5,3′?triiodothyronine,T3)对根尖牙乳头干细胞(stem cell from apical papilla,SCAPs)成骨向分化的影响.方法 酶消化法分离培养SCAPs.制备含不同浓度T3的条件培养基,培养5 d,检测各组碱性磷酸酶表达和活性,选取差异最显著的浓度作为实验浓度.CCK?8法检测增殖能力,real?time RT?PCR、Western Blot、碱性磷酸酶染色检测牙/骨向分化能力.Western Blot检测MAPK通路相关蛋白表达情况.结果 1×10-9 mol/L组ALP活性最高,选作最佳刺激浓度进行后续实验.CCK?8结果显示实验组对增殖能力没有显著影响.此外,real?time RT?PCR、Western Blot、碱性磷酸酶染色结果表明1×10-9 mol/L T3诱导促进SCAPs成牙/骨向分化.Western Blot结果表明1×10-9 mol/L T3激活了ERK通路.U0126抑制牙/骨向分化相关蛋白表达.结论 1×10-9 mol/L T3促进SCAPs成牙/骨向分化,这个过程与ERK通路有密切关联.