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长链非编码RNA LINC01133通过调控线粒体功能影响人牙周膜干细胞成牙骨质分化潜能的研究
编辑人员丨5天前
目的:探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC01133对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSC)成牙骨质分化潜能的影响及其作用机制。方法:收集2021年9月至2022年1月第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科17~30岁10例就诊患者因正畸需要或因阻生拔除的牙齿共12颗,从离体牙上提取hPDLSC,分别转染靶向LINC01133小干扰RNA(small interfering RNA-LINC01133,si-LINC01133)或阴性对照小干扰RNA(small interfering RNA-negative control,si-NC),以转染si-LINC01133为实验组,转染si-NC为阴性对照组。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测si-LINC01133的沉默效率;通过蛋白质印迹法检测hPDLSC成牙骨质分化相关蛋白包括骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)、牙骨质蛋白1(cementum protein-1,CEMP-1)的表达;利用流式细胞术和线粒体超氧化物指示剂MitoSOX检测细胞线粒体活性氧产量;通过JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位水平;利用蛋白质印迹法检测线粒体呼吸链复合体蛋白包括NADH脱氢酶[泛醌]1β亚单位8(NADH dehydrogenase[ubiquinone]1 beta subcomplex subunit 8,NDUFB8)、琥珀酸脱氢酶亚单位A(succinate dehydrogenase complex flavoprotein subunit A,SDHA)、泛醌-细胞色素c还原酶核心蛋白1(ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1,UQCR1)、细胞色素c氧化酶亚单位4亚型1(cytochrome c oxidase subunit 4 isoform 1,COXⅣ)、ATP合成酶F1亚单位α(ATP synthase F1 subunit alpha,ATP5A)的表达水平。结果:hPDLSC的LINC01133表达水平被si-LINC01133有效沉默(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:0.385±0.128)( t=10.72, P<0.01),沉默效率超过60%。LINC01133沉默后,hPDLSC BSP表达水平显著下降(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:0.664±0.179)( t=4.62, P<0.01);CAP表达水平显著下降(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:0.736±0.229)( t=2.83, P<0.05)。LINC01133沉默后,hPDLSC线粒体活性氧产量显著上升(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:1.458±0.185) (t=4.96, P<0.05);线粒体膜电位水平显著下降(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:0.209±0.029)( t=53.99, P<0.01);NDUFB8表达水平显著上升(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:1.683±0.397)( t=3.45, P<0.05);SDHA表达水平显著下降(阴性对照组:1.000±0.000,实验组:0.428±0.228)( t=5.02, P<0.05)。实验组UQCR1、COXⅣ和ATP5A的表达水平与阴性对照组相比差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:LINC01133可能通过调控hPDLSC线粒体功能,进而影响hPDLSC成牙骨质分化潜能。
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编辑人员丨5天前
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M2型巨噬细胞通过调控氧化-抗氧化体系和线粒体自噬影响人牙周膜干细胞的成牙骨质分化潜能
编辑人员丨2024/5/11
目的:探索巨噬细胞(Mφ)极化对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成牙骨质分化的影响及作用机制.方法:将THP-1 人单核细胞分别诱导为M0、M1和M2型Mφ,用RPMI 1640基础培养基或不同极化状态Mφ来源的上清液与成牙骨质诱导液等比例混合制备条件培养基(CM-Control、CM-M0、CM-M1和CM-M2)用于培养hPDLSCs,将条件培养基培养的hPDLSCs形成的细胞膜片包裹人脱矿牙本质基质(TDM)移植至裸鼠皮下进行异位牙骨质形成实验.以CM-Control组作为对照,通过HE染色实验观察类牙骨质样组织的形成;免疫荧光染色(IMF)和qRT-PCR,检测成牙骨质分化标记物骨涎蛋白(BSP)、牙骨质附着蛋白(CAP)和牙骨质蛋白-1(CEMP-1),氧化-抗氧化体系标记物超氧化物歧化酶1(SOD1)和核转录因子红系2相关因子2(NRF2)以及线粒体自噬标记物PTEN诱导假定激酶1(PINK1)和微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)的表达水平.结果:体内实验中,CM-M2组形成的类牙骨质样组织更多,CAP、CEMP-1蛋白表达量更高且伴随SOD1蛋白和PINK1、LC3蛋白表达水平升高,NRF2蛋白未见明显差异.体外实验中,CM-M2组BSP(P<0.01)、CAP(P<0.001)和CEMP-1(P<0.01)的mRNA水平上升,SOD1的mRNA水平上升(P<0.05),而NRF2的mRNA水平无统计学差异(P>0.05),PINK1的mRNA水平上升(P<0.05).结论:M2型Mφ可能通过上调hPDLSCs的氧化-抗氧化体系和线粒体自噬水平促进hPDLSCs的成牙骨质分化潜能.
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编辑人员丨2024/5/11
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慢病毒介导的Stat3沉默对成牙骨质细胞分化、凋亡、自噬的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:构建Stat3-shRNA慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的信号传导及转录激活因子3(Stat3)沉默对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化、凋亡、自噬的影响及相关机制.方法:构建含有Stat3 shRNA的慢病毒载体,包装慢病毒后感染OCCM-30细胞,使用嘌呤霉素筛选出稳定细胞株.采用real-time PCR和Western Blot法检测慢病毒对Stat3的抑制效果.将细胞分成空白对照组、阴性对照组和Stat3抑制组三组,采用Western Blot检测Atg-5,Beclin-1,cleaved caspase-3,survivin蛋白水平的变化,使用real-time PCR法检测BSP,OCN,osterix在mRNA水平的变化.结果:成功构建Stat3-shRNA慢病毒表达载体并用慢病毒感染OCCM-30细胞,有效降低了Stat3的mRNA和蛋白的表达量.在mRNA水平上,Stat3抑制组BSP,OCN,osterix表达量降低.由Western Blot结果可知,Stat3抑制组Atg-5,Beclin-1,survivin蛋白表达量明显降低,cleaved caspase-3蛋白表达量增加.结论:慢病毒介导的Stat3-shRNA可有效抑制OCCM-30细胞内Stat3基因表达,从而抑制细胞分化和自噬,诱导凋亡,其相关机制可能是通过抑制Stat3信号转导通路实现的.
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编辑人员丨2023/8/6
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药物和物理治疗对正畸牙根吸收修复影响的研究现状
编辑人员丨2023/8/6
根尖外吸收是继发于正畸牙齿移动的常见临床并发症,轻度的吸收在停止加力后一段时间可自行修复,但中重度的牙根吸收临床上尚缺乏有效对策.为避免这些并发症的出现,国内外学者展开了大量探索.迄今为止,大量体外和动物实验研究对根吸收的修复提供了新的见解和方法.本文主要从药物和物理治疗两个角度总结了可影响牙根吸收修复的相关方法,所提及的方法中对牙根修复的作用原理基本为上调相关矿化因子比值,促进成牙骨质细胞生成,提高牙骨质矿化和沉积.其中,低强度脉冲和低水平激光在治疗过程中还可进一步修复正畸所造成的牙周组织损伤.但这些方法均处于实验阶段,由于牙根吸收的高发性和不可预测性,寻找牙根修复的最佳方法和临床应用,还需进一步研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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Wnt5a在小鼠牙骨质发育中的表达特点及其对成牙骨质细胞分化的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨Wnt家族5A蛋白(Wnt5a)在小鼠出生后牙骨质中的表达特点以及其对体外培养成牙骨质细胞分化的影响,阐明Wnt非经典通路调控牙根发育的机制.方法:选择出生后0.5、4.5、10.5、16.5、20.5、24.5、26.5和30.5 d昆明小鼠并按以上相应时间点分组,每组3只;在相应时间点采用脱臼法处死小鼠,分离下颌第一磨牙及牙周组织.免疫组织化学染色法观察小鼠牙体和牙周组织中Wnt5a的表达特点.将小鼠成牙骨质细胞OCCM30分为实验组和对照组.实验组加入200 μg·L-1重组Wnt5a蛋白,对照组无添加;提取细胞总RNA.RT-PCR法检测2组OCCM30细胞中Ocn、Opn、Al p、Bsp、Wnt5a和Runx-2基因的相对表达水平.结果:小鼠出生后0.5d,第一磨牙牙胚中无Wnt5a阳性表达;出生后4.5d,成釉细胞和成牙本质细胞中Wnt5a阳性表达较强;出生后16.5d,可见成牙骨质细胞中Wnt5a呈阳性表达;出生后20.5~30.5 d,成牙本质细胞和牙周膜细胞中Wnt5a呈阳性表达.与对照组比较,实验组成牙骨质细胞中Ocn和Alp基因相对表达水平降低(P<0.05).结论:Wnt5a在牙根发育过程中的表达特点为从无到有,呈现规律性表达;Wnt5a下调分化基因的表达,在牙骨质发育中发挥重要作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1和成骨特异转录因子RUNX2的表达
编辑人员丨2023/8/6
目的:检测大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1 (forkhead boxO1,FoxO1)和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达变化,初步探讨FoxO1和Runx2在正畸牙移动牙周组织改建中的作用及相互关系.方法:将40只8周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为5组,建立正畸牙移动模型,以上颌左侧加力的第一磨牙为实验侧,右侧不加力的第一磨牙为对照侧.分别加力1、3、5、7、14 d后处死大鼠,解剖分离出含有第一磨牙的牙槽骨制备标本,进行苏木精-伊红(H-E)染色和FoxO1、Runx2免疫组织化学染色,利用Image ProPlus图像分析系统对染色后的切片做定量分析,采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理.结果:FoxO1在牙周膜主要表达于成骨细胞及成牙骨质细胞中,Runx2主要表达于成骨细胞、成纤维细胞及成牙骨质细胞中.实验组加力后,大鼠牙周组织中FoxO1和Runx2的表达增强,在3~5 d内达到峰值,而后表达降低;14 d时与对照组相比无显著差异(P>0.05),其余组与对照组相比均有显著差异(P<0.05).结论:FoxO1和Runx2参与了正畸牙移动中的牙周组织改建,且主要参与了成骨细胞和骨形成的过程.
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编辑人员丨2023/8/6
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颌骨良性肿瘤和瘤样病变的多层螺旋CT表现及其病理基础
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨颌骨良肿瘤及瘤样病变的多层螺旋CT(MSCT)表现及其病理基础.方法 回顾性分析2014年1月至2017年3月华西第四医院诊治的颌骨良性肿瘤及瘤样病变48例,在MSCT图像上,观察病变的位置、大小、形态、密度、内部结构和病变与周围结构的关系.结果 骨纤维异常增殖症11例(22.9%),可为多骨病变,有磨玻璃密度增高影或多囊状改变.颌骨囊肿14例(29.1%),是以液性密度为主的肿块.成釉细胞瘤11例(22.9%),多为膨胀性骨质破坏软组织影,伴邻近齿根吸收.动脉瘤样骨囊肿2例(4.2%),内呈液-液平面征象.成牙骨质细胞瘤2例(4.2%),呈团块状高密度影,肿块内见附属牙根.骨化性纤维瘤6例(12.5%),可见多发斑片状骨化影.MSCT检出病变部位准确率为100%,MSCT诊断符合率为91.7%.结论 MSCT对颌骨良性肿瘤和瘤样病变定性诊断、准确评估有重要意义.
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编辑人员丨2023/8/6
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牙囊细胞成骨分化的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
牙源性干细胞对口腔领域的新型细胞疗法的发展具有重要意义,引起广泛的关注.在牙体组织发育或再生过程中,牙源性干细胞也非常适合研究细胞过程.牙囊中的多能未分化细胞是牙源性干细胞的一种,这些细胞已被用于分化为成牙骨质细胞和成骨细胞的细胞过程的研究,对于牙周组织具有重要意义.该文关于信号通路、转录因子、细胞外基质蛋白对牙囊细胞成骨分化的研究作一综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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釉基质蛋白诱导不同生理性根吸收期乳牙牙周膜干细胞向成牙骨质细胞方向分化的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:检测釉基质蛋白(EMD)诱导乳牙生理性根吸收不同时期的牙周膜干细胞(PDLSCs)向成牙骨质细胞方向分化的能力及矿化相关蛋白表达水平的变化.方法:选取根吸收早期(E组)、中晚期(M组)的乳牙和恒前磨牙(P组)作为组织来源,并分离培养其PDLSCs;然后再将各组PDLSCs分为2个亚组:实验组用含100 mg/mL EMD的DMEM诱导培养,对照组用DMEM培养;并于诱导7 d后检测各组细胞中CAP、CEMP-1及BSP、OCN、ALP、COL-1表达水平的差异.结果:各组细胞经EMD诱导培养7 d后,实时定量PCR检测结果显示,与对照组相比,各实验组PDLSCs中BSP、ALP、COL-1的表达水平均显著上调(P<0.05),升高幅度为P组>E组>M组;P、E、M各实验组PDLSCs中CAP、CEMP-1 mRNA的表达水平为P组>E、M组(P<0.05),E组与M组间无统计学差异(P>0.05);BSP、OCN的表达水平均为P组>E组>M组(P<0.05);ALP的表达水平为P组>E、M组(P<0.05),E组和M组间无统计学差异(P>0.05);COL-1的表达水平在各实验组间相比无统计学差异(P>0.05).免疫组化染色结果显示,P、E、M各实验组PDLSCs中BSP、OCN、ALP、COL-1均呈阳性表达,对照组则显示染色不显著.结论:EMD可诱导乳牙PDLSCs向成牙骨质细胞方向分化.随着乳牙生理性根吸收的进行,乳牙PDLSCs向成牙骨质细胞方向分化的能力及矿化相关蛋白的表达水平均逐渐降低.
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编辑人员丨2023/8/6
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牙骨质瘤1例
编辑人员丨2023/8/6
成牙骨质细胞瘤又称真性牙骨质瘤,是一种以形成牙骨质样组织为特征的肿瘤,常与病变区所累积牙齿的牙根紧密相连,较少见. 本文将报道巨大牙骨质瘤 1 例.病例报 告患者,朱某,女,71 岁,主诉"双侧下后牙松动 4 年". 现病史:患者自述 4 年前发现双侧下后牙松动,曾于外院就诊,未行相应治疗;今来我院就诊. 查体一般情况可,无系统性疾病,无家族病史. 口腔颌面部检查:患者颜面部左右对称,无突出及凹陷. 口内检查见唇颊舌黏膜红润、光滑,未见瘘管、溃疡;全口牙齿重度磨耗,16 残根,17、26、27 缺失,36、37 松动Ⅱ度,34、35 松动Ⅰ度,43、44、45 松动Ⅰ度,48 松动Ⅲ度;颞下颌关节区检查示:双侧关节活动度正常,下颌运动时无疼痛、弹响、杂音,开口度、开口型正常.
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编辑人员丨2023/8/6
