目的:探讨具有广谱中和活性的患者DRVI01血浆来源的HIV-1B′亚型毒株抵抗VRC01抗体中和的机制。方法:比较同期感染相同亚型且对VRC01抗体敏感的病毒序列，结合文献报道筛选可能影响VRC01中和作用的关键氨基酸，通过定点突变、不同来源膜蛋白序列交换，验证这些位点氨基酸对VRC01抗体中和作用的影响。结果:位于gp120的LoopD区E279D、R282K和V5区N460A、N463Q单点突变，逆转了病毒对VRC01中和敏感性。上述2个或3个位点联合突变后的毒株与单点突变毒株比较，对VRC01抗体中和敏感性明显增强。与文献报道不同，N276糖基化位点突变并未改变毒株对VRC01的敏感性。结论:具有广谱中和活性患者DRV01血浆来源的HIV-1B′亚型毒株主要通过LoopD区D279、K282和V5区N460、N463突变，抵抗VRC01抗体的中和作用。

人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染的长期不进展者（LTNP）体内分离到的广谱中和抗体（bNAbs），已被证明可以预防HIV-1感染并降低感染者体内的病毒载量，成为了指导HIV-1疫苗设计和被动免疫治疗的突破口。中和抗体的功能除了与靶向表位有关，其亲和力也极大的影响了抗体的活性。HIV-1 bNAbs通过体内的多轮亲和力成熟获得了较高亲和力，从而实现了广谱度和中和活性的增加。高亲和力HIV-1 bNAbs在治疗过程中能更好的协助机体免疫系统清除病原体，并且使用剂量更少，毒副作用也相对较低。在亲和力成熟的同时，HIV-1 bNAbs表现出了高水平的体细胞超突变（SHM）、插入缺失、较长的重链第三互补决定区等不寻常的特征。这些特征阻碍了通过有效疫苗诱导HIV-1 bNAbs在体内产生并发育成熟，因此了解抗体亲和力成熟过程中发生的突变及其要点，有助于理解中和抗体的活性与特征的关系，并为设计有效的HIV-1潜在免疫原提供参考。

目的:观察并初步探讨获得性免疫缺陷综合征（AIDS）伴巨细胞病毒性视网膜炎（CMVR）患者眼底活动性病灶面积与房水巨细胞病毒（CMV）-DNA载量之间的关系。方法:回顾性临床分析。2019年11月至2020年12月于首都医科大学附属北京地坛医院眼科检查确诊的AIDS合并活动性CMVR患者22例31只眼纳入研究。所有患者均为男性，平均年龄（38.0±8.7）岁。接受高活性抗逆转录病毒治疗（HAART）者13例，治疗时间中位数4个月；未接受HAART者9例。采用英国欧堡P200T激光扫描检眼镜行超广角眼底成像检查。应用设备自带软件测量活动性病灶面积。所有患眼行前房穿刺，抽取房水100 μl，聚合酶链反应定量检测CMV-DNA载量。同时行外周血CD4 +T淋巴细胞、CMV-DNA载量检测19例；行人类免疫缺陷病毒（HIV）- RNA载量检测17例。CMV及HIV病毒载量均以lg表示。以活动性病灶面积为自变量，房水CMV-DNA载量为因变量构建线性回归函数。 结果:所有患眼均为活动性CMVR，其病灶面积为1 ～264个视盘直径（DD），中位数43 DD. 31只眼中，30只眼（96.8%，30/31）房水CMV-DNA载量中位数为1.3×10 4拷贝／ml，1只眼房水CMV-DNA为阴性。行外周血CD4 +T淋巴细胞检测的19例患者，CD4 +T淋巴细胞中位数18个/μl；检测出CMV-DNA载量4例（21.1%，4/19）。行HIV-RNA载量检测的17例患者，HIV-RNA载量中位数Y为4.1×10 4拷贝／ml。相关性分析结果显示，lg（房水CMV-DNA载量）与眼底活动性病灶面积大小明显相关（ r=0.601， P<0.001），与CD4 +T淋巴细胞以及lg（血CMV-DNA载量）、lg（HIV-RNA载量）均无明显相关（ r=0.125、0.202、-0.096， P>0.05）。回归方程为：lg（房水CMV-DNA载量）= 3.38+0.01×活动性病灶面积。 结论:房水CMV-DNA载量与眼底活动性病灶面积大小明显相关，可反映眼底病灶活动度。

HIV-1可穿过血脑屏障，感染中枢神经系统，引起一系列神经系统疾病。氧化应激(oxidative stress，OS)在不同的神经退行性疾病的发病机制中具有重要作用。当机体遭受各种有害刺激时，体内氧化系统和抗氧化系统的调控水平失衡，产生大量活性氧(reactive oxygen species, ROS)，从而直接或间接导致组织损伤。HIV-1感染细胞后释放的反式转录激活因子Tat蛋白对于脑组织的损伤具有重要作用，它可诱导血管内皮细胞和神经细胞产生ROS，使机体处于慢性氧化应激状态，加重疾病的发展。本文就HIV-1 Tat蛋白对血管内皮细胞和神经细胞氧化应激影响的研究进展进行综述。

目的:探究人源化膜金属蛋白酶——含有TRAB结构域的蛋白2A（TRABD2A）单克隆抗体对接受联合抗逆转录病毒疗法（cART）的人免疫缺陷病毒（HIV-1）感染者储存库细胞的作用效果，建立基于TRABD2A阻断抗体的全新HIV-1储存库检测方法。方法:2021年5—12月于中国医科大学附属第一医院收集研究对象51例。其中健康者2名，接受cART的HIV-1感染者（cART组）41例，未接受cART的HIV-1感染者（no-cART组）8例。采用噬菌体展示库技术构建人源化TRABD2A单克隆抗体，分别处理HIV-1感染者、未接受cART的HIV-1感染者及健康对照者的外周血单个核细胞（PBMC）和CD4+T淋巴细胞，利用荧光素酶报告系统、单分子免疫阵列检测技术等方法检测细胞培养上清中病毒含量，同时使用流式细胞术、荧光实时定量聚合酶链式反应检测处理后细胞的活化和病毒基因表达情况，比较不同处理组之间病毒释放量和表面活化标志CD25、CD69、HLA-DR（人类白细胞DR抗原）表达量的差异。结果:接受cART的HIV-1感染者的PBMC经人源化TRABD2A单克隆抗体处理后检测HIV-1产量，未处理组为0（0，440），使用负抗体所释放的病毒量为0（0，390），二者差异无统计学意义（ P>0.05），而使用正抗体所释放的病毒量为1 259（0，4 269）和3 142（1 292，5 060），与使用负抗体所释放的病毒量相比，差异均有统计学意义（ P<0.05）。利用健康对照者PBMC对感染者PBMC进行倍比稀释，经正抗体处理后病毒释放量等比例下降［未稀释、稀释5、25、125、625倍对应的HIV-1产量分别为4 670（3 339，7 697）、1 860（1 509，4 615）、1 550（1 150，2 680）、602（255，1 441）、2（0，37）］。且TRABD2A单抗处理后的细胞静息状态与未处理组差异无统计学意义（未处理组与正抗体-1处理组的CD25阳性细胞百分率分别为3.89±1.31、4.60±1.74，CD69阳性细胞百分率分别为2.50±1.27、2.18±0.51，HLA-DR阳性细胞百分率分别为7.66±3.78、8.79±3.42； P均>0.05），未处理与正抗体-1的病毒群抗原基因（Gag）表达量分别为1和0.82±0.55，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:人源化TRABD2A单克隆抗体能够有效阻断TRABD2A的蛋白活性，可在不改变细胞静息状态和全基因组转录水平的情况下，显著促进HIV-1感染者外周血中储存库细胞释放子代病毒，且通过此方式所引起的储存库病毒释放量与储存库细胞数量呈正相关。

目的:利用HIV慢病毒包装系统构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)原始株614D和突变株614G假病毒，并初步研究其生物学特性。方法:将重组表达质粒pCDNA3.1-614D和pCDNA3.1-614G分别与慢病毒质粒psPAX2和pLenti CMV Puro LUC瞬时共转染293T细胞，72 h后收集上清，进行20%蔗糖垫层超速离心，检测假病毒的滴度、形态、S蛋白表达和中和活性。结果:间接免疫荧光检测可见S蛋白特异性荧光，Western blot分析可见2019-nCoV 614D和614G假病毒S蛋白表达，透射电镜下可见假病毒颗粒具有明显刺突。614D和614G假病毒的滴度分别为1.12×10 4和2.52×10 4 TCID 50/ml，均能够中和S蛋白兔多克隆抗体，表明假病毒具有特异性。 结论:本研究成功构建了2019-nCoV 614D和614G假病毒，为建立基于假病毒的体外中和抗体检测平台奠定基础。

目的:在1例具有广谱中和活性的慢性HIV-1感染者(DRVI01)血浆样本中，分析潜在的中和抗体特异性。方法:查找已知的HIV-1广谱中和抗体(bNAbs)的关键氨基酸位点，分析DRVI01来源不同时间点的膜蛋白序列。对存在频繁变异的关键氨基酸位点进行回复突变，比较突变前后的假病毒与自体血浆中和敏感性的差异，推测可能存在的bNAbs。结果:在DRVI01来源的6个时间点155条膜蛋白序列中，查找存在频繁突变的10类bNAbs的关键氨基酸位点，其中gp41融合肽、gp120/gp41交界面两类bNAbs的关键氨基酸位点存在较多的变异。对这些位点回复突变后，后一个时间点及同一时间点的自体血浆，对大部分突变株病毒的中和能力明显增强。结论:具有广谱中和活性的HIV-1感染者(DRVI01)体内，可能存在与gp41融合肽类及gp120/gp41交界面类bNAbs的中和特异性。

LP-19（Lipopetide-19）是一种HIV融合抑制剂，已显示出较好的抗HIV活性。但仍然缺少LP-19对不同亚型临床分离株的抗病毒活性和耐药屏障的研究。本文选择了从HIV感染者分离的47株我国流行的HIV病毒，其中43株为CCR5嗜性、4株为CCR5/CXCR4嗜性；病毒亚型分别是B’亚型（6）、CRF01_AE（15）、CRF07_BC（14）、CRF08_BC（2）、URF（10）。体外抗病毒试验显示LP-19的平均IC50和IC90分别是0.5nM和1.88nM。相比C34和Enfuvirtide（T-20）这两种融合抑制剂的抗病毒活性提高16.7倍和86倍。进一步体外压力培养39周，出现A243突变位点。比较LP-19对A243V突变毒株和野生型毒株的抗病毒活性，没有统计学差异，LP-19剂量达到初始浓度的512倍时（39周），没有观察到HIV相关的耐药突变位点。该研究表明LP-19具有广谱抗HIV活性和较高的耐药屏障。

目的:从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。方法:采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞，通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后，采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位，通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。结果:从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系，突变率为10.76%～21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系，突变率为6.03%～18.64%。7个抗体均可以结合gp140，其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区；508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2)，IC 50值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。 结论:本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体，其中5个为识别gp41区的单克隆抗体，2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。

目的:研究HAD和非HAD的艾滋病患者不同部位来源的Tat蛋白氨基酸位点变异及其对U87细胞氧化应激的影响。方法:采用BLAST和MEGA6对一例HAD患者(H)和一例非HAD患者(N)的基底节(BG)、脾脏(SPL)共4个部位来源的HIV-1 Tat蛋白进行序列分析，研究其氨基酸位点变异，并将 tat基因转染至U87细胞，显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)初步判断Tat蛋白表达情况，Western blot检测细胞Tat蛋白的表达；并使用cck-8法、Western blot、MDA检测试剂盒研究不同部位Tat蛋白对细胞活性、氧化应激指标GPX、MDA水平的影响。 结果:氨基酸序列分析显示N-BG、N-SPL、H-BG、H-SPL来源的HIV-1 Tat蛋白关键氨基酸位点存在差异；Tat蛋白可抑制U87细胞的活性，抑制作用可以被抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)逆转。与对照组相比，四个实验组MDA水平均升高，GPX蛋白表达量均降低，差异具有统计学意义( P＝0.012， P＝0.004， P＝0.000， P＝0.003； P＝0.000， P＝0.016， P＝0.000， P＝0.021)；且不同部位的Tat蛋白诱导细胞氧化应激的能力不同，H-BG组MDA水平高于N-BG部位，差异具有统计学意义( P＝0.023)；且无论是HAD还是非HAD患者BG组GPX含量均低于SPL组，差异有统计学意义( P＝0.01， P＝0.007， P＝0.01， P＝0.007)。 结论:HAD及非HAD患者外周及中枢神经系统中的Tat蛋白关键氨基酸位点存在差异，对细胞氧化应激的影响也不同。