目的:制备靶向甲型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)蛋白的广谱抗体FHA3，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，PCR扩增FHA3重链和轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FHA3。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FHA3。ELISA检测FHA3与甲型流感病毒HA的结合。假病毒感染宿主细胞试验检测抗体FHA3的体外中和活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FHA3。FHA3与甲型流感病毒H1N1 HA、H2N2 HA、H3N2 HA、H5N1 HA、H7N9 HA以及H9N2 HA均识别结合，且呈浓度依赖效应。FHA3具有较好的体外中和活性，在低浓度下(5 μg/ml)能有效阻断H5N1以及H7N9假病毒入侵靶细胞，在0.012 5 μg/ml浓度下能有效阻断H1N1假病毒入侵靶细胞。结论:获得1株具有体外中和活性的靶向甲型流感病毒HA蛋白的广谱抗体。

目的:筛选肠道病毒71型(EV71)中和表位，确定诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸基序，为合成肽疫苗研发提供理论依据。方法:利用噬菌体随机十二肽库淘选EV71中和抗体特异性结合克隆并测序，推导出中和表位的关键序列。合成含有关键序列且N端乙酰化(AC)和C端连接血蓝蛋白(KLH)的系列肽段，免疫小鼠后收集血清，经Western blot、ELISA和中和试验验证肽段的免疫原性以及免疫后血清的中和活性。结果:经过3轮淘选和克隆测序后，分析确定关键基序为KQEKDL。Western blot结果表明修饰后的含关键基序的系列肽段免疫小鼠获得的血清与EV71和VP1蛋白均有不同程度结合。ELISA结果表明仅含有最短关键基序的合成肽段(AC-KQEKDL-KLH)免疫后血清对其余3条肽段及EV71的反应最强。中和试验结果表明该肽段免疫后血清的中和效价也最高。结论:利用噬菌体随机肽库技术成功筛选出EV71中和表位，确定KQEKDL关键基序可能是诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸序列，为了解免疫应答机制、免疫原性评价及多肽疫苗的研发提供理论依据。

新型冠状病毒感染(COVID-19)的发生、发展已对全球人类的身心健康产生了严重影响。随着研究进展，中和抗体成为一种新的保护手段而被应用于COVID-19的预防和治疗。其中，替沙格韦单抗/西加韦单抗(TIXA/CILGA)是目前唯一获批用于COVID-19暴露前预防(PrEP)的长效中和抗体组合。该药所含的2种抗体可通过协同作用阻断新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合域与血管紧张素转换酶2的结合，有效阻止病毒进入宿主细胞。TIXA/CILGA应用于COVID-19 PrEP及部分人群的暴露后预防(PEP)可显著降低有症状COVID-19感染的发生率，同时也可作为COVID-19的治疗选择。目前，体外中和试验及临床研究数据还发现，TIXA/CILGA对多种奥密克戎变异株亚型保留了中和活性，且对各种原因造成的免疫功能受损人群也具有预防潜能。COVID-19中和抗体虽不能替代疫苗，但仍在多种情况下具有重要的临床价值。

目的:通过基因序列设计及优化，构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV) PreF蛋白，对其免疫原性进行评价。方法:分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列，并添加到RSV F蛋白序列后，将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达，收获上清经镍柱纯化后，制备出4种三聚体蛋白，并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物，采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果:SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明，制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构；抗原抗体亲和力试验表明，4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强；免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明，初次免疫后，两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高，再次免疫后，Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论:两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白，并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。

目的:制备人乳头瘤病毒6型L1(HPV6 L1)蛋白特异性单克隆抗体，探索抗体的结合特点、交叉活性以及中和效果。方法:从免疫HPV6 L1蛋白小鼠脾细胞中提取抗体基因，构建ScFv噬菌体抗体文库。用HPV6 L1蛋白对文库进行富集筛选，将获得的抗体基因表达成鼠IgG后，验证抗体与L1蛋白的结合性质以及对假病毒的中和效果。结果:成功构建了针对HPV6 L1的ScFv抗体文库，库容量为6.54×10 7。抗体文库经HPV6 L1筛选后获得了两株抗体，命名为Q9和Q11。经ELISA检测，Q9-IgG与HPV6 L1反应的滴度约为10 6，与HPV18和45 L1的滴度为10 2。Q11-IgG与HPV6 L1结合的滴度约为4×10 4，而与其他型别L1均不结合。经过假病毒中和试验测定，Q9-IgG没有中和活性，而Q11-IgG针对HVP6假病毒的中和滴度约为10 4.5。 结论:Q9和Q11均为HPV6 L1特异性单克隆抗体，但二者交叉反应性、抗原识别位点及中和活性均具有明显差异。该抗体可为HPV6病毒的基础研究、免疫学诊断以及治疗制剂研发提供工具抗体。

人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染的长期不进展者（LTNP）体内分离到的广谱中和抗体（bNAbs），已被证明可以预防HIV-1感染并降低感染者体内的病毒载量，成为了指导HIV-1疫苗设计和被动免疫治疗的突破口。中和抗体的功能除了与靶向表位有关，其亲和力也极大的影响了抗体的活性。HIV-1 bNAbs通过体内的多轮亲和力成熟获得了较高亲和力，从而实现了广谱度和中和活性的增加。高亲和力HIV-1 bNAbs在治疗过程中能更好的协助机体免疫系统清除病原体，并且使用剂量更少，毒副作用也相对较低。在亲和力成熟的同时，HIV-1 bNAbs表现出了高水平的体细胞超突变（SHM）、插入缺失、较长的重链第三互补决定区等不寻常的特征。这些特征阻碍了通过有效疫苗诱导HIV-1 bNAbs在体内产生并发育成熟，因此了解抗体亲和力成熟过程中发生的突变及其要点，有助于理解中和抗体的活性与特征的关系，并为设计有效的HIV-1潜在免疫原提供参考。

目的:建立H5N1假病毒的体内感染模型，并对抗体FHA3的体内中和活性进行鉴定。方法:依据A/Anhui/1/2005/H5N1毒株血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的序列信息，构建重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1，并与质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染293T细胞制备H5N1假病毒上清，电镜观察上清中假病毒颗粒形态。假病毒上清感染MDCK细胞后，测定病毒滴度；经腹腔注射入BALB/c小鼠体内，在感染后2、5、8、12 d进行生物发光成像，检测假病毒体内感染情况。利用建立的小鼠感染模型，评价抗体FHA3的体内功能活性。结果:重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1构建正确，与pNL4-3.Luc.R-E-质粒共转染293T细胞可制备出高滴度的假病毒上清，电镜下可见圆形的病毒颗粒。H5N1假病毒感染后，小鼠体内发出较强的荧光，而攻毒前给予抗体FHA3处理可减弱其荧光信号。结论:成功构建出H5N1假病毒体内感染模型，并证实抗体FHA3对假病毒的感染具有体内保护作用。

目的:探讨流式探针法在分析、分选丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)特异性B细胞以及全人源单克隆抗体发现中的作用。方法:采用伯胺标记法制备HCV特异性探针；使用流式细胞术检测和分选HCV特异B细胞，并体外通过单个B细胞抗体克隆技术从分选的HCV特异性B细胞中克隆表达抗体；应用ELISA技术和假病毒中和试验检测抗体的结合活性以及中和活性。结果:探针法能有效地检测HCV特异的记忆性B细胞，HCV患者探针阳性细胞频率明显高于正常人(U＝0.0004, P <0.0001)。通过单细胞分选HCV特异的记忆性B细胞，体外克隆表达获得6个单克隆抗体，其中有5个与HCV膜蛋白具有结合活性，2个显示具有较强中和活性。 结论:伯氨标记法制备HCV特异性探针是一种简单高效的探针制备方法，结合流式细胞术可用于HCV特异B细胞的检测以及分选。

目的:评估新型冠状病毒灭活疫苗免疫人群和小鼠血清对变异株(Delta株和Beta株)的交叉中和活性。方法:各取20份人群常规两剂基础免疫血清、三剂加强免疫血清和两剂小鼠免疫血清作为实验材料，采用新型冠状病毒原型株、Delta和Beta变异株3株病毒，在生物安全三级实验室中采用微量中和试验检测中和抗体。通过分析不同稀释度血清对固定剂量病毒的中和活性，计算血清阳性率和抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)，评估免疫血清的交叉中和水平。结果:人免疫血清对不同变异株的阳性率均大于95%；基础免疫后，接种者血清对原型株、Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别为109、41和15，与原型株比较，针对Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别下降2.7倍和7.3倍；加强免疫后，接种者血清对原型株、Delta和Beta株的中和抗体GMT分别为446、190和86，与原型株比较，针对Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别下降2.3倍和5.2倍。小鼠免疫血清对不同变异株的阳性率均为100%；对原型株、Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别为2 037、862和408，与原型株比较，针对Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别下降2.4倍和5.0倍。结论:新型冠状病毒灭活疫苗免疫后的人群和小鼠血清均可对Delta和Beta变异株产生一定水平的中和保护，且人群加强免疫后可产生更高水平的中和抗体和交叉中和抗体，为该疫苗的临床应用和保护效果评估提供了重要参考。

目的:探讨具有广谱中和活性的患者DRVI01血浆来源的HIV-1B′亚型毒株抵抗VRC01抗体中和的机制。方法:比较同期感染相同亚型且对VRC01抗体敏感的病毒序列，结合文献报道筛选可能影响VRC01中和作用的关键氨基酸，通过定点突变、不同来源膜蛋白序列交换，验证这些位点氨基酸对VRC01抗体中和作用的影响。结果:位于gp120的LoopD区E279D、R282K和V5区N460A、N463Q单点突变，逆转了病毒对VRC01中和敏感性。上述2个或3个位点联合突变后的毒株与单点突变毒株比较，对VRC01抗体中和敏感性明显增强。与文献报道不同，N276糖基化位点突变并未改变毒株对VRC01的敏感性。结论:具有广谱中和活性患者DRV01血浆来源的HIV-1B′亚型毒株主要通过LoopD区D279、K282和V5区N460、N463突变，抵抗VRC01抗体的中和作用。