目的:通过降低斑马鱼接触蛋白相关蛋白基因2（contact protein-related protein gene 2, cntnap2）表达，建立注意缺陷多动障碍（attention-deficit/hyperactivity disorder，ADHD）遗传模型。方法:以注射剪接抑制型吗啉代寡聚核糖核酸降低cntnap2表达的斑马鱼作为实验组（ n=48），注射随机寡核苷酸片段的斑马鱼作为对照组（ n=48)，通过原位杂交观察斑马鱼神经递质系统相关基因th、dbh、gad1b、glyt2、vglut2表达的变化，使用实时荧光定量PCR检测神经递质系统及神经元发育相关基因表达量变化。使用斑马鱼行为轨迹跟踪系统记录（Noldus行为仪）检测cntnap2表达降低后多动/冲动行为及托莫西汀对多动/冲动行为的改善作用。 结果:原位杂交实验结果显示实验组较对照组神经递质系统相关基因dbh表达减少，gad1b表达增加；th、glyt2、vglut2表达未见明显差异。实时荧光定量PCR显示实验组较对照组神经递质系统相关基因dbh表达降低（ t=5.772， P=0.005），snap25、dat、gad1b表达增高（ t=14.310、22.210、22.090,均 P<0.01）；神经元发育相关基因shha、epha4b、netrin1b、noi及神经递质系统相关基因drd4、th、vglut2、glyt2表达差异均无统计学意义。6 dpf时药物未处理实验组较药物未处理对照组幼鱼游动总距离长 ［143.12(98.56, 212.22) cm 与99.03(80.54, 133.96) cm， Z=-3.547， P<0.01］，平均游动速度快［0.050(0.041, 0.067) cm/s与0.033(0.025, 0.042) cm/s, Z=-5.495， P<0.01］；经托莫西汀处理后，实验组药物处理较药物未处理幼鱼游动总距离减少［106.59(95.28, 120.10) cm与143.12(98.56, 212.22) cm, Z=-3.591， P<0.01］，平均游动速度减慢［0.031(0.028, 0.037) cm/s与0.050(0.041, 0.067) cm/s， Z=-7.035， P<0.01］。 结论:cntnap2表达降低斑马鱼可通过改变dbh、snap25、dat、gad1b表达量而产生多动/冲动表型，托莫西汀可有效缓解多动/冲动表型，cntnap2表达降低斑马鱼可作为ADHD遗传模型。

目的:探讨珊瑚状钛酸钡纳米压电涂层的生物相容性，及其于超声激发下产生的压电效应对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）早期成骨分化的影响，为口腔种植体表面优化提供实验依据。方法:通过阳极氧化、水热反应及高温退火在钛表面制备钛酸钡纳米压电涂层（涂层组），以抛光钛试件为对照组。采用扫描电镜、X射线光电子能谱、拉曼光谱和水接触角测量仪分别检测两组钛试件表面形貌、成分、晶相和亲水性；通过压电力显微镜测试涂层组压电性能。培养并鉴定大鼠BMSC并将其接种于两组钛试件表面，以接种于空白培养板的细胞为空白组；施加低强度脉冲超声干预后，检测细胞增殖和死活情况，评价涂层的细胞相容性；使用碱性磷酸酶（ALP）显色试剂盒检测各组碱性磷酸酶活性，并通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测成骨相关基因［整合素、骨形态发生蛋白2（BMP-2）、Runt相关转录因子2（RUNX2）］的表达情况，评价涂层促BMSC早期成骨分化的作用。结果:涂层组钛表面呈现均匀的珊瑚状形貌，珊瑚触手直径为70~100 nm；主要成分为四方相钛酸钡；涂层组表面亲水性（水接触角10.12°±0.93°）显著优于对照组（水接触角78.32°±0.71°）（ F=10 165.91， P<0.001）；涂层具有稳定的压电性能，压电常数约为5 pC/N。细胞实验显示，培养第3天，无论超声与否，涂层组细胞增殖活性显著小于空白组和对照组（ P<0.05）；培养第5天，无论超声与否，3组细胞增殖活性差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养第7天，涂层组ALP活性显著大于空白组和对照组（ P<0.05）；RT-qPCR显示，超声后涂层组整合素和BMP-2 mRNA表达量显著大于其他组，且显著大于未超声涂层组（ P<0.05）；超声后对照组整合素mRNA表达量显著大于未超声对照组（ P<0.05）；超声后涂层组RUNX2 mRNA表达量显著大于未超声涂层组（ P<0.05）。 结论:珊瑚状钛酸钡纳米压电涂层具有良好的生物相容性和稳定的压电性能，低强度脉冲超声激发可促进大鼠BMSC早期成骨分化。

目的:探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)在防治大鼠激素性骨质疏松(GIOP)方面的疗效及其潜在的分子生物学机制。方法:采用光学显微镜、流式细胞技术对HUC-MSCs进行表征和鉴定。成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、地塞米松(DEX)组、DEX+不同比例HUC-MSCs组。对照组加入正常培养基，DEX组加入10 μmol/L DEX处理，DEX+不同比例HUC-MSCs组加入10 μmol/L DEX处理细胞，然后将HUC-MSCs按照1∶1、10∶1、100∶1的比例在共培养小室中与MC3T3-E1非接触式共培养48 h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力。24只SD大鼠随机分成3组( n＝8)：对照组、模型组、治疗组(HUC-MSCs组)。模型组使用DEX构建GIOP模型，对照组给予等量磷酸盐缓冲液(PBS)，治疗组在构建GIOP模型的同时通过尾静脉注射约10 6个HUC-MSCs进行治疗。8周后取股骨组织样本，采用苏木精-伊红(HE)染色观察空骨陷窝率，脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色评价细胞凋亡。进行Micro CT扫描，测量骨密度(BMD)、单位组织体积的骨量(Bv/Tv)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间距(Tb.Sp)、骨小梁数量(Tb.N)等骨质疏松相关指标。提取组织蛋白后，用蛋白印迹法(Western blot)检测通路蛋白表达。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:流式细胞鉴定结果显示，HUC-MSCs高表达CD44(99.9%)、CD73(98.0%)、CD90(100.0%)、CD105(99.6%)、CD166(99.9%)，低表达CD14(0.43%)、CD19(1.11%)、CD34(0.89%)、CD45(1.06%)、HLA-DR(0.38%)，符合HUC-MSCs表面特异性抗原表达规律。CCK-8显示，模型组较对照组细胞活力明显下降，与HUC-MSCs共培养后可部分恢复MC3T3-E1活力。HE染色对照组、模型组、HUC-MSCs组空骨陷窝率分别为(2.546±1.049)%、(28.720±1.546)%、(13.600±1.012)%。TUNEL染色结果对照组、模型组、HUC-MSCs组TUNEL阳性细胞的比例分别为(2.334±0.789)%、(24.140±4.646)%、(11.610±2.974)%。Micro CT显示模型组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N均降低，Tb.Sp增加，HUC-MSCs治疗可以一定程度上逆转上述改变。Western blot结果表明，与对照组比较，模型组β-连环蛋白(β-catenin)、Runt相关基因2(Runx2)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达均明显下降，硬化素(SOST)蛋白表达增加，HUC-MSCs治疗组β-catenin、Runx2、BMP-2表达较模型组增加，SOST表达相应减少。结论:HUC-MSCs能够通过Wnt/β-catenin信号通路改善地塞米松所致的骨丢失。

目的:研究不同浓度锌离子喂养孕鼠对其子代胚胎腭突融合期细胞增殖和细胞凋亡的影响，进一步筛选参与该过程的腭突组织之间锌指蛋白Sp家族相关差异候选基因，探索锌在腭裂发生过程中的作用机制。方法:C57BL/6J雌雄小鼠合笼，将144只孕鼠按随机数字表法分为4组，每组36只，按饲料的锌离子浓度不进行喂养，常锌组含锌30 mg/kg、缺锌组为Flanagan缺锌饲料（0 mg/kg）、低锌组含锌5 mg/kg、富锌组含锌100 mg/kg。HE染色观察ED14.5、ED16.5胎鼠腭部发育状况和形态学变化，PCNA染色观察ED14.5胎鼠腭胚突融合期细胞增殖情况，TUNEL染色观察ED14.5胎鼠腭胚突融合期细胞凋亡情况；通过mRNA表达谱芯片杂交技术，收集富锌组、常锌组、缺锌组腭突组织基因表达情况并相互比较组间差异表达，采用2倍表达差异倍数对差异基因进行筛选并分析锌指蛋白Sp家族基因表达是否有差异，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证差异表达基因。结果:ED14.5时，常锌组、富锌组、低锌组和缺锌组的腭裂发生率分别为8%（3/36）、2%（1/39）、29%（12/41）和39%（15/38）。ED14.5时的HE染色结果显示，常锌组左右腭突均已上抬，相互接触、贯通；缺锌组左右侧腭突仍位于舌体两侧垂直向下最终形成腭裂；低锌组左右侧腭突上抬但并未接触，最终形成腭裂；富锌组与常锌组无明显差异。ED14.5时，常锌组和富锌组的胎鼠腭突增殖细胞阳性率（80.29%±7.39%和87.69%±6.62%）均显著高于缺锌组（56.05%±16.13%）和低锌组（56.22%±9.61%）（ t=4.32， P<0.05）；缺锌组和低锌组胎鼠腭突细胞凋亡指数（38.80%±3.10%和28.80%±6.19%）均显著高于常锌组（16.80%±1.82%）（ t=19.35， P<0.001； t=5.81， P<0.001）。富锌组与缺锌组的2倍差异表达基因为663个，其中表达上调基因为513个，表达下调基因150个，并发现Sp5位于其中。qRT-PCR结果显示，与常锌组（2.22±0.36）相比，缺锌组的腭突组织中Sp5mRNA的表达水平（1.23±0.38）显著升高，富锌组（3.68±0.90）显著降低（ P<0.05）。 结论:母鼠孕期缺锌可抑制胚胎腭突间充质细胞增殖，促进细胞凋亡，致使腭突形态变异，上抬动力减弱，且使腭中缝上皮细胞持续存在，最终形成腭裂。缺锌可致子代胚胎融合期Sp5表达升高，富锌对可致子代胚胎融合期Sp5表达下降，推测Sp5在调控缺锌导致腭裂腭突融合的过程中起负性调节作用。

对2021年山东省两起婴儿B群流脑疫情开展调查，采集病例及其密切接触者相关标本进行脑膜炎奈瑟菌（ Nm）分离培养鉴定，并对分离株进行多位点序列分型、外膜蛋白基因 porA和 fetA分型及药物敏感性试验。实验室确诊的两起B群流脑疫情来自烟台市和临沂市报告，指示病例分别为5月龄和2月龄婴儿，均未到流脑疫苗接种月龄，其流行病学特征和临床表现相似，预后良好。家庭密切接触人员标本均检出与指示病例相同序列型（ST）B群 Nm，但未再发现后续病例。其中，烟台菌株为ST-8920型，属CC4821克隆群， porA基因型为P1.21-2，23， fetA基因型为F3-1；临沂菌株为新ST型，属CC4821克隆群， porA基因型为P1.20，23， fetA基因型为F1-91。上述菌株对青霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明耐药，对头孢类药物敏感性降低。两起婴儿B群流脑疫情在国内较为少见，与既往其他菌群的流行特征和病原特点有所不同。

目的:总结抗黑色素瘤分化相关基因5（MDA5）抗体相关幼年皮肌炎（JDM）的临床特征，探讨其诊治方法。方法:对2018年10月至2019年12月天津市儿童医院收治的5例抗MDA5相关JDM患儿的基本信息、临床表现、实验室检查、影像学资料和用药情况进行回顾性分析，并随访其转归，其中男性4例，女性1例，中位年龄4岁，起病到确诊1~7个月。结果:5例均有皮损，其中面部非特异红色斑疹3例，Gottron疹/征4例，2例表现为皮肤粗糙和角化过度。甲周毛细血管炎改变5例，皮肤黏膜溃疡3例，关节受累3例，发热1例。肌力2例正常，3例轻度下降，肌酸激酶均正常，肌肉核磁和肌电图异常各4例。血清学全部为抗MDA5抗体阳性，3例伴抗Ro52阳性。5例肺计算机断层摄影（CT）均显示间质性肺病（ILD）但缺乏呼吸系统症状，血清涎液化糖链抗原（KL-6）和铁蛋白均增高。5例患者的治疗中均包括了激素和静脉免疫球蛋白。2例单独使用环磷酰胺作为免疫抑制剂完全缓解，2例难治患者采用环磷酰胺联合他克莫司方案。1例采用利妥昔单抗联合甲氨蝶呤达到完全缓解，后由于密切接触发生肺结核。结论:抗MDA5相关JDM发病年龄低，肌肉损害轻，皮疹不典型，容易漏诊及合并ILD。肌炎抗体有助于诊断，肺CT、铁蛋白和KL-6综合评估治疗反应，应积极免疫抑制治疗以改善预后并注意药物不良反应。

目的:分析恶性胸膜间皮瘤（MPM）基因突变概况和高频突变基因的表达水平，筛选出影响MPM患者预后的关键分子和临床病理因素。方法:于2020年3月，分别从癌症基因组图谱（TCGA）数据库和人类肿瘤相关基因表达汇编（GEO）数据库下载86例MPM组织的基因二代测序数据和89例MPM组织样本的基因芯片表达数据，收集相关体细胞突变信息及对应的临床病理资料。汇总TCGA数据库中组织样本基因突变概况并分析高频突变基因表达水平与MPM患者临床病理学特征、石棉接触史和预后的关系，筛选出与MPM预后显著相关的基因进行基因集富集分析（GSEA）。利用GEO数据库的芯片表达数据对筛选出的关键基因和临床病理特征进行生存分析和GSEA验证。结果:TCGA数据集中单核苷酸变异（SNV）频率最高的10个基因是BAP1、NF2、TP53、TTN、SETD2、LATS2、CCDC168、FAT4、PTCH1和ZNF469。野生型NF2、TP53、SETD2和CCDC168基因的高表达率高于突变型，差异均具有统计学意义（ P<0.05）。TCGA数据集Cox多因素分析结果显示，上皮型（ HR=0.425，95% CI：0.235~0.767， P<0.01）和SETD2低表达（ HR=0.516，95% CI：0.307~0.868， P=0.011）MPM患者的死亡风险较低。GEO数据集生存分析验证发现，上皮型MPM患者生存时间更长，肉瘤型MPM患者生存时间最短（ P<0.01）。TCGA和GEO数据集富集结果显示STED2可能与G2M细胞周期检查点、E2F靶标基因、MYC靶标基因、蛋白分泌、有丝分裂纺锤体、MTORC1通路、TGF-β通路、雄激素反应和紫外线反应等通路相关。 结论:MPM伴随着以BAP1、NF2、TP53、TTN、SETD2和LATS2等基因为代表的较高频率的基因突变。SETD2表达水平和组织类型中的上皮型可能是影响MPM预后的因素。

目的:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法检测和分析牡蛎中诺如病毒的基因特征。方法:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法，对2014年11月至2015年10月北京市采集的新鲜市售牡蛎进行诺如病毒GⅠ/GⅡ组并联试验检测，分析检出率，应用符合率和一致性检验（Kappa值）对半巢式RT-PCR方法进行可靠性评价，应用半巢式RT-PCR方法扩增诺如病毒GⅠ/GⅡ衣壳蛋白区基因，对阳性产物进行测序。采用BioEdit 7.0.9.0软件进行序列比对、Mega 6.0软件构建进化树。结果:72份样品中，实时荧光RT-PCR、半巢式RT-PCR和并联试验的诺如病毒检出率分别为31.94%（23/72）、38.89%（28/72）和48.61%（35/72）。2种方法符合率为73.61%，中度一致（Kappa值=0.43）。测序成功13株诺如病毒，11株（7株GⅡ.17、2株GⅡ.4 Sydney_2012、1株GⅡ.1和1株GⅡ.21基因型）为2种RT-PCR方法检测诺如病毒阳性样本所得；2株（GⅡ.17和GⅡ.3基因型各1株）为半巢式RT-PCR方法检测诺如病毒阳性样本、实时荧光RT-PCR方法检测诺如病毒阴性样本所得。这些毒株与腹泻患者、环境污水和贝类水产品参考株的相似性为84.4%~100.0%。结论:用2种RT-PCR并联法检测牡蛎中诺如病毒，不仅能提高检出率还能获得更多基因型；牡蛎中诺如病毒毒株与人源、环境污水及贝类水产品参考毒株高度同源，应对经常接触牡蛎的人群及相关环境进行诺如病毒监测和防控。

目的:研究体外诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化成甲状腺滤泡细胞的培养条件，探讨其对BMSCs向甲状腺滤泡细胞分化的诱导作用。方法:实验分组：阴性对照组（B组）、阳性对照组（T组）、共培养组（C组）、诱导素组（F组）、共培养+诱导素组（C+F组）。倒置显微镜下观察各组诱导1周后细胞形态的变化；细胞免疫染色法检测甲状腺特有标记物的表达；RT-PCR分析诱导后细胞内甲状腺细胞相关基因表达水平。多组间均数比较使用单因素方差分析ANOVA，两组间资料差异比较采用t检验。结果:SD大鼠BMSCs （P3）诱导1周：（1）细胞免疫染色结果显示各实验组甲状腺转录因子TTF1和PAX8及钠/碘同向转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）与甲状腺球蛋白（Tg）表达情况不同，其中以C+F组染色效果显著加深；（2）RT-PCR分析与C+F组比较，B组、C组、F组PAX8 （6.21±0.04，0.02±0.01，0.54±0.03，3.31±0.30，F = 283.07，P < 0.05）、TTF1 （0.33±0.04，0.03±0.01，0.15±0.03，0.08±0.02，F = 73.36，P < 0.05）、TG （14.90±2.00，0.10±0.05，1.61±0.40，1.91±0.39，F = 134.03，P < 0.05）mRNA水平下降。结论:在体外BMSCs与FRTL-5间接接触共培养体系中添加TSH、胰岛素、转铁蛋白、生长抑素及氢化可的松可诱导BMSCs分化为表达甲状腺滤泡细胞特异抗原的细胞。

[背景]血管内皮损伤是振动引发手臂振动病(HAVD)的重要环节,长时间振动暴露可导致血管内皮细胞功能障碍及细胞损伤,细胞铁死亡有可能是振动诱导血管内皮细胞损伤并导致HAVD的重要机制之一.[目的]探究振动是否可诱导体外血管内皮细胞铁死亡相关指标发生改变.[方法]将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为振动组以及对照组.振动组是对HUVEC施加125 Hz、6.5 m·s-2 频段的振动,并且分为四组:1 d 2 h组、1 d 4 h组、2 d 2 h组、2 d 4 h组;对照组除了不接触振动外,其他条件均与实验组相同.待细胞融合至 80%时,对照组与同组别实验组同时收获.采用细胞亚铁比色法测试盒、还原型谷胱甘肽(GSH)比色法测试盒、微量丙二醛(MDA)测试盒分别检测不同振动时间和频次对HUVEC内铁、还原型GSH、MDA含量的影响;使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞铁死亡相关基因酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(ACSL4)、肿瘤蛋白 53(P53)、重组人铁蛋白重链(FTH1)和谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)mRNA的表达情况;使用蛋白免疫印迹法(WB)检测HUVEC铁死亡相关蛋白表达水平.[结果]与对照组相比,振动可诱导HUVEC铁含量增加且存在剂量-效应趋势.与对照组相比,振动组的HUVEC细胞内还原型GSH含量随着振动时间和频次的增加而减少,并且存在剂量-效应趋势.与对照组相比,1 d 2 h、1 d 4 h和 2 d 4 h振动组的HUVEC细胞内MDA含量增加,且1 d 2 h和 1 d 4 h振动组中MDA含量随时间增加而增加.RT-PCR结果显示,与 1 d 2 h组相比,1 d 4 h组ACSL4、P53表达水平上升.与 2 d对照组相比,振动 2 d 2 h组和 2 d 4 h组ACSL4表达水平上升,振动2 d 4 h组P53 mRNA表达水平上升.与1 d对照组相比,振动1 d 2 h组内皮细胞FTH1、GPX4 mRNA的表达水平下降.WB结果显示,与对照组相比,振动 1 d 2 h组内皮细胞铁死亡相关蛋白ACSL4的表达水平上升;1 d 2 h组和 2 d 4 h组中P53的表达水平上升;振动1 d 4 h组、2 d 2 h组GPX4的表达水平下降,且振动2 d 2 h组相对于振动1 d 2 h组的下降更加明显.上述差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]振动可诱导体外血管内皮细胞中的铁含量升高,GSH的减少和MDA的增加,以及铁死亡相关基因ACSL4、P53、FTH1、GPX4 mRNA和蛋白表达改变.