目的:探究黄芪甲苷对高糖诱导 RGC-5细胞氧化应激、凋亡、自噬的影响,并探究其与高尔基体应激之间的关系.方法:将不同浓度葡萄糖(5、35 mmol/L)处理的RGC-5细胞设为正常(NG)组、高糖(HG)组;不同浓度黄芪甲苷(20、40、60、80、100μmol/L)处理高糖 RGC-5细胞,筛选最适浓度 60 μmol/L.将 si-NC、si-高尔基磷蛋白 3(GOLPH3)转染至高糖和黄芪甲苷共处理的 RGC-5 细胞,设为黄芪甲苷+si-NC组、黄芪甲苷+si-GOLPH3组.细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS);膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测细胞微管相关蛋白 1轻链 3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、细胞微管相关蛋白 1轻链 3-Ⅰ(LC3Ⅰ)、自噬蛋白(p62)、高尔基体外膜蛋白(GOLPH3)的蛋白表达;实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测 GOLPH3表达.结果:与 NG组相比,HG组 RGC-5细胞存活率明显降低,ROS、MDA明显升高,SOD明显降低,细胞凋亡率明显升高,LC3Ⅱ蛋白明显升高,LC3Ⅰ、p62 蛋白明显降低,GOLPH3 的 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05).黄芪甲苷(20、40、60、80、100 μmol/L)处理高糖诱导 RGC-5细胞最适浓度为 60 μmol/L.黄芪甲苷明显反向调控 HG组细胞上述指标.沉默 GOLPH3能够明显增强黄芪甲苷对高糖诱导 RGC-5细胞中上述指标的负向调控.结论:黄芪甲苷可减轻高糖诱导 RGC-5细胞的损伤,抑制高糖诱导的氧化应激、凋亡和自噬,其潜在的机制与激活高尔基体应激有关.

目的:探讨程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂通过细胞焦亡通路对放射性心肌损伤的影响。方法:20只C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为4组：健康对照组；PD-1抑制剂组；单纯照射组(胸部单次照射20 Gy)；照射联合PD-1抑制剂组，每组5只。超声心动测试评价受照后1个月小鼠左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、左室缩短率(FS)；采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色观察心肌组织病理学改变；蛋白免疫印迹、实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测心肌组织焦亡关键因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达水平；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白介素18(IL-18)、IL-1β表达；流式细胞术检测心肌淋巴细胞浸润情况。结果:照射后1个月，照射联合PD-1抑制剂组的LVEF、FS、SV较单纯照射组下降( t ＝ 4.50、27.93、3.11， P <0.05);照射联合PD-1抑制剂组小鼠心肌损伤及纤维化较单纯照射组更明显，心肌胶原容积分数较单纯照射组升高[(2.88±0.27)% vs. (3.81±0.57)%， t ＝ 2.90， P<0.05]；与单纯照射组比较，照射联合PD-1抑制剂组心肌Caspase-1、Caspase-1 p20、GSDMD、GSDMD-N、ASC蛋白表达量增高( t＝3.14、3.22、8.83、20.29、2.79， P <0.05)，Caspase-1、GSDMD、ASC的mRNA表达量也升高( t ＝ 3.09、2.91、2.53， P <0.05)；照射联合PD-1抑制剂组心肌及血清IL-18、IL-1β表达较单纯照射组均升高( t ＝ 3.46、3.75、7.58、8.24， P <0.05)，CD8＋T淋巴细胞百分比高于单纯照射组[(38.33 ± 7.92)% vs. (54.70 ± 4.01)%， t ＝ 3.29， P <0.05]，而CD4＋T淋巴细胞在各组间的差异无统计学意义( P >0.05)。 结论:PD-1抑制剂可通过Caspase-1/GSDMD促进细胞焦亡，进而加重放射性心肌损伤。

目的:了解深圳地区2019—2021年诺如病毒暴发分子流行特征。方法:收集2019年1月至2021年12月诺如病毒暴发信息及标本，应用实时荧光反转录聚合酶链式反应样本进行诺如病毒检测，阳性样本通过RT-PCR扩增、测序和序列分析；对其中3株GII.2[P16]进行基因组扩增和序列分析。结果:2019年1月至2021年12月，共报告诺如病毒暴发246起，主要发生在幼儿园（132，53.66%）和小学（52，21.14%）。每起暴发发病数范围为3~130，中位数为8。每年11月至次年3月为诺如病毒暴发的流行高峰。211起暴发分型成功，GI和GII分别检出7种和11种基因型，78起（36.97%）诺如病毒暴发由GII.2[P16]引起。对GII.2[P16]基因组分析表明，深圳2020年暴发株仍属于GII.2[P16](2016-2017)亚群，在非结构蛋白P22（L777S）和3C蛋白酶（A1047V和P1074T）上出现氨基酸变异。结论:GII.2[P16]是2019年1月至2021年12月引起深圳市诺如病毒暴发的流行株，主要发生在学校和幼儿园，持续监测和基因组分析有助于发现流行株的变异和新毒株的出现。

目的:评价快速免疫层析法抗原检测在新型冠状病毒症状性感染患者中的诊断价值。方法:前瞻性研究，研究对象为2022年5月20日至6月5日复旦大学附属儿科医院（上海市新型冠状病毒感染患儿定点医院）新型冠状病毒肺炎隔离病房确诊住院的76例新型冠状病毒症状性感染的患儿和其确认感染的55例陪护家属。连续采集其鼻咽拭子标本，采用实时荧光定量反转录PCR方法检测新型冠状病毒核酸，同时用免疫层析法检测新型冠状病毒抗原。评价抗原检测结果与核酸循环阈（Ct）值变化的相关性及新型冠状病毒抗原检测在患者发病后不同时期的灵敏度与特异度，采用Kappa检验分析2种检测方法的一致性。结果:新型冠状病毒症状性感染患者中，患儿76例（男41例、女35例），患病年龄5（2，9）岁；陪护家属55例（男8例，女47例），患病年龄38（32，41）岁。对采集的所有478份鼻咽拭子样本同时进行了新型冠状病毒抗原与核酸扩增检测。自发病至新型冠状病毒核酸检测转阴性的任何时期，快速抗原检测的总体灵敏度和特异度分别为48.2%（119/247）和98.3%（227/231），抗原检测与核酸检测显示中等度的一致性（κ=0.46，P<0.05）。Ct值 ≤25，抗原检测灵敏度均为100.0%（82/82）；Ct值为26，灵敏度为8/10；Ct值为30，灵敏度为4/15；Ct值为35，灵敏度为8.3%（3/36）；Ct值>35，抗原检测均为阴性。发病1~2、3~5、6~7、8~10、>10 d抗原检测的灵敏度分别为5/8、90.2%（37/41）、88.9%（24/27）、45.0%（36/80）、18.7%（17/91），特异度分别为5/5、5/5、2/2、94.1%（32/34）、98.9%（183/185）。病程2~7 d，患者鼻咽拭子的Ct值均<26；病程第8天时，Ct值为28.7±5.0，病程第13天时，Ct值为34.5±2.9，病程第14天后，Ct值均>35。 结论:快速免疫层析法抗原检测新型冠状病毒在发病后7 d内具有较高的灵敏度和特异度，其灵敏度与患者的病毒载量呈正相关和发病时间呈负相关。

目的:利用生物信息学分析筛选脓毒症心脏组织巨噬细胞差异表达基因（DEGs）并对关键基因进行验证。方法:实验1（基因芯片与生物信息学分析）：从基因表达数据库（GEO）下载脓毒症小鼠心脏巨噬细胞基因芯片数据GSE104342，通过R语言分析获得DEGs，使用DAVID在线数据库对DEGs进行基因本体及功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，最后利用基因与蛋白质相互作用检索数据库（STRING）对DEGs进行基因编码蛋白质-蛋白质相互作用分析，并运用Cytoscape软件及MCODE等插件筛选出关键基因。实验2（脓毒症模型构建与相关基因验证）：8~14周龄雄性C57BL/6小鼠10只，随机选取5只作为对照组，5只在体构建小鼠脓毒症模型作为脓毒症组。超声心动图检测小鼠心脏功能，采用苏木精-伊红染色法检测小鼠心脏形态，原位缺口末端标记法检测小鼠心肌细胞凋亡，免疫荧光染色检测分化抗原簇206（CD206）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、F4/80、细胞因子信号转导抑制因子3（Socs3）、白细胞介素1受体拮抗剂（Il1rn）和CC趋化因子7（Ccl7）蛋白表达。体外培养RAW264.7巨噬细胞，分为2组：（1）脂多糖刺激组：给予1 mg/L脂多糖干预；（2）空白对照组：加入等体积磷酸缓冲液溶液。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应检测巨噬细胞Socs3、Il1rn和 Ccl7基因表达。结果:实验1：GSE104342数据集筛选出24 647个基因，DEGs共177个（0.72%），其中上调基因120个，下调基因57个。基因本体富集分析表明，DEGs主要参与炎症反应、免疫应答、凋亡调控和抗原加工提呈等过程。KEGG信号通路分析发现，脓毒症小鼠心脏巨噬细胞中DEGs主要富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、肿瘤坏死因子信号通路、NOD样受体信号通路等。STRING及Cytoscape分析构建基因相互作用网络图及重要子模块，获得了3个hub基因，分别为Socs3、Il1rn和Ccl7。实验2：在体实验发现，与对照组相比，脓毒症组小鼠心脏功能明显下降，心肌细胞明显水肿、炎性细胞浸润、心肌纤维断裂，部分心肌细胞核溶解消失，心肌细胞凋亡增加，提示小鼠脓毒症心肌损伤模型构建成功。与对照组相比，脓毒症组小鼠心脏中CD206蛋白表达下调，iNOS、F4/80、Socs3、Il1rn和Ccl7蛋白表达上调，且Socs3、Il1rn、Ccl7与F4/80蛋白存在共定位。体外实验发现，与空白对照组相比，脂多糖刺激巨噬细胞后Socs3、Il1rn和Ccl7水平明显上调。结论:脓毒症小鼠心脏中巨噬细胞Socs3、Il1rn和Ccl7基因表达上调，Socs3、Il1rn和Ccl7有望成为诊治脓毒症心脏损伤的新靶点。

目的:了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染（ARIs）病例中肠道病毒（EV）的感染状况，分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法:于2017年10月至2021年5月，采集河南省漯河市中心医院1 828例ARIs患者的咽拭子样本，并收集相关临床流行病学资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）筛选EV阳性样本，随后对阳性样本采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增5′非翻译区（5′UTR），使用Enterovirus Genotyping Tool在线定型工具初步定型后采用RT-PCR法进行VP1区全长扩增，再次比对确定EV分型。结果:1 828例ARIs病例中，男性占56.7%（1 036例）；年龄 M（ Q1， Q3）为3（1，5）岁；5岁以下人群占71.6%（1 309例）。1 828例ARIs病例中，通过qPCR检测鉴定EV阳性样本共有71例，检出率为3.88%（71/1 828）；男、女性EV检出率分别为3.28%（34/1 036）和4.67%（37/792），差异无统计学意义（ χ2=2.32， P=0.14）。2~<6岁、6月龄~<2岁、6~<10岁和<6月龄的EV检出率依次为6.29%（48/763）、3.00%（18/600）、2.52%（4/159）和1.67%（1/60）（ χ 2=27.91， P<0.001）。2017年秋、冬季EV检出率为0.92%（3/326）；2018—2020年各年EV检出率依次为1.18%（6/508）、2.47%（12/485）和8.31%（34/409），呈逐年上升趋势（ χ2趋势=29.76， P<0.001），主要流行季节为夏、秋季；2021年春季检出率为4.00%（4/100）。共鉴定出12种型别：CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVB3、CVB5、E5、E11、E30、PV-1和EV-D68，其中CVA2、CVA10、CVA6和CVB3为优势型别。59例EV分型样本中，临床表现以上呼吸道感染为主（36/59，61.01%）。上呼吸道感染检出的优势型别为CVA10（10/36，27.78%）、CVA6（9/36，25.00%）和CVB3（8/36，22.22%）；下呼吸道感染中检出的优势型别为CVA2（7/19，36.84%）。 结论:2017—2021年河南省漯河市ARIs病例中EV感染具有明确的季节性和年龄特征，上、下呼吸道感染所检出的优势型别有所不同。

目的:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法检测和分析牡蛎中诺如病毒的基因特征。方法:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法，对2014年11月至2015年10月北京市采集的新鲜市售牡蛎进行诺如病毒GⅠ/GⅡ组并联试验检测，分析检出率，应用符合率和一致性检验（Kappa值）对半巢式RT-PCR方法进行可靠性评价，应用半巢式RT-PCR方法扩增诺如病毒GⅠ/GⅡ衣壳蛋白区基因，对阳性产物进行测序。采用BioEdit 7.0.9.0软件进行序列比对、Mega 6.0软件构建进化树。结果:72份样品中，实时荧光RT-PCR、半巢式RT-PCR和并联试验的诺如病毒检出率分别为31.94%（23/72）、38.89%（28/72）和48.61%（35/72）。2种方法符合率为73.61%，中度一致（Kappa值=0.43）。测序成功13株诺如病毒，11株（7株GⅡ.17、2株GⅡ.4 Sydney_2012、1株GⅡ.1和1株GⅡ.21基因型）为2种RT-PCR方法检测诺如病毒阳性样本所得；2株（GⅡ.17和GⅡ.3基因型各1株）为半巢式RT-PCR方法检测诺如病毒阳性样本、实时荧光RT-PCR方法检测诺如病毒阴性样本所得。这些毒株与腹泻患者、环境污水和贝类水产品参考株的相似性为84.4%~100.0%。结论:用2种RT-PCR并联法检测牡蛎中诺如病毒，不仅能提高检出率还能获得更多基因型；牡蛎中诺如病毒毒株与人源、环境污水及贝类水产品参考毒株高度同源，应对经常接触牡蛎的人群及相关环境进行诺如病毒监测和防控。

目的:研究免疫球蛋白γFc段受体1b（Fc fragment of IgG receptor 1b， FCGR1B）基因转录水平检测对活动性结核病的诊断价值。 方法:2018年2—9月，收集解放军总医院第八医学中心活动性结核病患者、结核潜伏感染者（LTBI）、治愈结核病患者、健康人和肺炎患者的外周血，分离外周血单个核细胞（PBMC），提取总RNA并反转录为cDNA，实时荧光定量聚合酶链式反应（QPCR）检测PBMC中 FCGR1B基因mRNA的相对表达量，非参数检验比较活动性结核病和对照组 FCGR1B基因mRNA的表达差异、相关性分析 FCGR1B基因mRNA的表达与结核病病情和感染指标的关系，受试者工作特征曲线（ROC）评估 FCGR1B基因转录水平检测在活动性结核病诊断中的价值。 结果:与非结核组（包括LTBI、健康人、治愈结核和肺炎患者）相比，活动性结核病患者PBMC中 FCGR1B基因mRNA的表达较高（ u=2081， P<0.001）；结核患者的载菌量越多， FCGR1B基因mRNA的表达越高（ H=12.35， P=0.015），与C反应蛋白（CRP）的表达显著相关（ r=0.30， P=0.008）； FCGR1B基因mRNA鉴别活动性结核病的曲线下面积（AUC）为0.849，诊断的敏感度和特异度分别为71.43%和84.17%， FCGR1B基因mRNA鉴别肺外结核的AUC为0.906，诊断的敏感度和特异度分别为84.62%和91.89%。 结论:FCGR1B基因mRNA是潜在的活动性结核病分子诊断标志物。

目的:建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法:从GenBank中下载WUXV的全部基因序列，使用MEGA-X完成多序列比对分析，选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针，分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果:建立的方法可以特异性地检测WUXV，并且与多种虫媒病毒无交叉反应；反应的灵敏度较高，最低检测下限为1 pfu/ml；同一样品重复检测循环阈值( Ct)的批间变异系数均小于1.00%；用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本，其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。 结论:本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

目的:基于加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选与胰腺癌细胞增殖相关的关键基因并进行验证。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因型-组织表达(GTEx)数据库生成的胰腺癌以及正常组织数据集产生差异表达基因(DEGs)。采用R软件包的limma算法识别DEGs，校正后 P<0.01且表达变化大于2倍的基因被鉴定为DEGs。采用Metascape数据库对DEGs的功能进行富集分析。使用R软件包进行WGCNA分析。使用R软件包的Survival功能进行生存分析；取30例就诊于河北医科大学第四医院胰腺癌患者的新鲜胰腺癌临床样本及癌旁组织，应用荧光实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测部分筛目标基因mRNA表达水平。数据分析使用R软件及SPSS 25.0统计分析软件进行处理。 结果:DEGs分析结果显示，在胰腺癌组织中有12 044个基因表达上调，有694个基因表达下调( P<0.01)。生存分析结果显示，其中855个与患者预后显著相关的基因( P<0.01)。对影响预后的DEGs进行富集分析，发现与DNA损伤修复、细胞周期转化、蛋白激酶活性调控等多种功能有关。WGCNA分析发现3个重要网络模块，对模块中基因功能进行富集分析，发现涉及细胞周期相关的生物学过程。通过分析筛选出CCNB1、CCNB2、CDC25C、DBF4、E2F1、MAD2L1、MCM2、ORC6、PLK1、PTTG1、TTK等与肿瘤增殖关系密切的基因。采用30例临床样本对其中的DBF4、E2F1、MCM2进行了验证，结果显示这3种基因的mRNA在胰腺癌组织的表达水平(2.625±0.936、3.289±0.921、1.214±0.465)均明显高于癌旁组织(0.604±0.225、0.940±0.367、0.312±0.121)，差异有统计学意义( t＝11.404、12.657、11.169， P<0.01)。 结论:WGCNA分析鉴定得到了促进胰腺癌增殖的关键基因，可能为胰腺癌治疗提供新的靶点。