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基于双链特异性核酸酶触发滚环扩增的microRNA-21太赫兹超材料传感方法的构建
编辑人员丨6天前
目的:构建一种太赫兹(THz)超材料传感方法用于microRNA-21(miRNA-21)的信号放大检测。方法:首先构建THz超材料传感方法,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳及zeta电位验证方法的可行性;对传感器检测条件进行优化之后,对不同浓度的miRNA-21以及其他不同的miRNAs进行检测,并与其他microRNA检测方法进行比较;最后,对该传感器的回收率进行了评价。结果:在最优实验条件下,通过双链特异性核酸酶(DSN)循环识别与滚环扩增(RCA)的双重信号放大策略,该THz超材料传感器对靶标miRNA-21的响应范围为10 fmol/L至10 nmol/L,检测限为8.49 fmol/L。并且该传感器具有较好的特异性,具备了从多种miRNAs中识别靶标miRNA-21的能力,并且在商业化人血清样本中的回收率可达94.33%到115.33%。结论:该THz传感器可以实现靶标miRNA-21的高灵敏、高特异性检测,具备了在miRNA相关疾病无标记诊断与早期预警的潜力。
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编辑人员丨6天前
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4例胃底腺来源肿瘤的临床病理特征
编辑人员丨6天前
目的:探讨胃底腺来源肿瘤胃泌酸腺腺瘤(OGA)和胃底腺型腺癌(GA-FG)的临床病理特征。方法:对解放军第960医院2019年2月至2019年9月确诊的2例OGA和2例GA-FG进行回顾性分析,采用光镜切片和免疫组织化学染色,结合内镜分析其组织学的主要特征。结果:OGA和GA-FG均分化较好,位于黏膜固有层的深部。2例OGA局限于黏膜内,其中1例OGA腺体呈不规则管状,结构异型性较小,属于低度异型,1例OGA腺体呈不规则的管状、分枝状或吻合状,属于高度异型;2例GA-FG伴有黏膜下浸润,腺体呈不规则的管状、分枝状或吻合状,可形成所谓的"无尽腺"结构。肿瘤表面腺体未见明显异型,周围黏膜无幽门螺杆菌感染、慢性炎症、肠化或萎缩等。2例OGA和2例GA-FG免疫组化结果相似,胃蛋白酶原1呈弥漫性阳性表达,提示肿瘤细胞主细胞分化;H +/K + ATPase和PDGFRA-α呈阳性表达,提示肿瘤细胞壁细胞分化。Syn均呈阳性表达而CD10、MUC2和CD-X2均阴性,未见p53过表达和β-catenin核阳性,热点区Ki-67增殖指数约为1%~5%。 结论:GA-FG为一种分化良好的、低度恶性的新的胃癌亚型。免疫组化及窄带成像结合放大内镜有助于鉴别诊断,Syn的阳性意义及能否成为诊断指标有待进一步研究。OGA由低度异型至高度异型至黏膜下浸润可能是GA-FG的发生过程,但发生机制尚不明确,多认为与Wnt/β-catenin和Shh信号通路有关,但有别于其他类型胃癌的发病机制。内镜下黏膜切除对病变的完整切除是首选治疗,通常是治愈性的。
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编辑人员丨6天前
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慢性酒精摄入对小鼠小脑分子层场电位的影响及NO信号通路机制
编辑人员丨6天前
目的:研究慢性酒精摄入对小脑分子层感觉信息传递的影响,揭示慢性酒精中毒对小脑皮质感觉信息传递与信息整合影响的机制。方法:50只6~8周龄健康雄性ICR小鼠按照随机数字表法分为生理盐水组(对照组)和酒精摄入组(酒精组),每组25只,酒精组每日腹腔注射体积分数为20%酒精,对照组则注射同等剂量的生理盐水,所有小鼠每天腹腔注射一次,连续注射28 d。通过电生理技术运用膜片钳放大器及数据采集软件记录感觉刺激诱发酒精组及对照组小鼠小脑分子层场电位变化。采用Clampfit 10.3软件对电生理数据进行记录分析,采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析,使用配对 t检验和单因素方差分析比较用药前后的差异。 结果:给予吹风刺激后,酒精组小鼠的P1振幅较对照组显著增高[(121.3±3.5)%,(97.2±2.7)% ; t=26.08, P<0.05),P1曲线下面积较对照组明显增大[(127.1±4.2)% ,(102.2±3.5)%; t=22.95, P<0.05]。酒精组N1的平均振幅与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。小鼠脑表面灌流一氧化氮合酶抑制剂L-NNA后,吹风刺激诱发的酒精组小鼠P1振幅(76.2±4.8)%较给药前(103.5±3.6)%显著降低( t=22.60, P<0.05),但洗脱后(101.5±4.6)%与给药前相比差异无统计学意义( t=1.70, P>0.05),P1曲线下面积(72.4±5.6)%较给药前(102.7±2.6)%显著降低( t=24.58, P<0.05),洗脱后(100.6±3.5)%与给药前差异无统计学意义( t=1.81, P>0.05)。小鼠脑表面灌流一氧化氮合酶抑制剂L-NNA后,对照组小鼠的P1振幅(104.3±1.6)%与给药后(102.2±5.6)%( t=1.84, P>0.05)及洗脱后(102.5±4.5)%( t=1.92, P>0.05)比较,均差异无统计学意义;P1曲线下面积(103.5±2.6)%较给药后(102.5±4.6)%( t=0.99, P>0.05)及洗脱后(101.9±3.7)%( t=1.81, P>0.05)差异无统计学意义。对照组小鼠脑表面灌流一氧化氮供体SNAP后,吹风刺激诱发分子层场电位P1振幅(128.2±3.4)%较给药前(103.5±2.6)%显著增加( t=28.89, P<0.05),洗脱后(105.4±4.2)%较给药前差异无统计学意义( t=1.93, P>0.05),P1曲线下面积(125.4±4.4)%较给药前(104.3±4.6)%显著增加( t=16.60, P<0.05),而给药前与洗脱后(103.5±4.2)%差异无统计学意义( t=0.65, P>0.05)。 结论:慢性酒精摄入显著增强抑制性反应,抑制性成分的增强源于NO信号通路的激活。
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编辑人员丨6天前
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金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测微RNA-721
编辑人员丨2024/7/27
目的 构建一种自催化发夹组装无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA.方法 首先在金纳米颗粒(AuNP)表面修饰5-羧基荧光素(FAM)标记的DNA发夹探针H1,形成探针AuNP-H1,H1的荧光被AuNP猝灭.加入靶标miRNA会导致AuNP上的H1标记荧光素远离AuNP而重新发射荧光,随后H1与DNA发夹探针H2发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大.将探针AuNP-H1、探针H2及不同浓度的miRNA-721共反应后,在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度.结果 以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下使用20 μL探针AuNP-H1、50 μL 3 μmol/L探针H2(退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、5 mmol/L MgCl2,pH 7.4)与 50 μL不同浓度(0.1~5 μmol/L)的 miRNA-721 在 30 ℃共反应20 min,发现在520 nm处的相对荧光强度变化值(△F=F-F0)与miRNA-721浓度(C)呈良好的线性关系,拟合线性方程为△F=29 232×lgC-52 435(R2=0.991 0).该荧光法检测限为1.23 nmol/L.在正常人血清中的加标回收率为92.71%~104.02%.一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成.结论 该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段.
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编辑人员丨2024/7/27
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基于转录因子生物传感器在环境分析中的应用
编辑人员丨2024/7/13
转录因子是一类在细胞中通过引导RNA聚合酶与特定DNA序列结合调控基因表达的蛋白质.转录因子是生物体适应自然环境过程中的一类重要调节性蛋白,可专一性的感知环境介质中的配体分子.利用转录因子作为识别元件构建生物传感体系并与不同的信号转导和放大系统耦合,可在细胞、无细胞和体外等不同反应体系构建信号输出形式灵活多样的传感策略.基于转录因子构建的生物传感器(TFBBs),因其灵敏度高、体积小、价格低廉以及可应用于现场监测等优势,在环境分析领域显示出巨大应用潜力.文中着重介绍了TFBBs的传感体系类型、核心元件组成和工作原理,列举了其在重金属离子、芳香族化合物及抗生素等环境污染物检测中的应用进展,在此基础上讨论了TFBBs在环境污染物检测中可能面临的机遇和挑战,并对其发展趋势进行了展望,指出合成生物学、人工智能等多学科新兴技术的高速发展将促进TFBBs人工设计和传感性能提升,使其应用于更广泛的领域.
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编辑人员丨2024/7/13
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基于微间隙生物芯片检测单核细胞增生李斯特菌
编辑人员丨2023/8/6
目的 建立一种可快速检测食品中单核细胞增生李斯特菌的方法.方法 以微间隙生物芯片阵列电极为基础电极,采用双抗夹心酶联免疫反应,结合酶的生物催化银沉淀反应,放大电化学分析信号,用于单核细胞增生李斯特菌的检测.结果 该方法特异性好,对其他菌株无交叉反应.单核细胞增生李斯特菌在105~108CFU/mL浓度范围内变化时,电导与菌浓度成线性关系(R2=0.993),最低检出限为105CFU/mL.结论该方法具有灵敏度高、检测时间短、特异性好等优点,在食品检测中有较好的应用价值.
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编辑人员丨2023/8/6
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黄芪多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究黄芪多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及可能机制.方法 选取健康成年SD大鼠24只,随机分为假手术组(8只)、缺血再灌注损伤组(8只,模型组)与黄芪多糖50 mg/ml灌注液治疗组(8只).结扎大鼠左冠状前降支制备心肌缺血再灌注模型.测定三组心肌损伤指标肌酸激酶(CK)、心肌钙蛋白-Ⅰ(TNI),比较三组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)、氧自由基(OFR),并应用多导生理记录仪观察三组大鼠缺血前与再灌注25 min后主动脉压(AP),将左室内压信号放大10倍,读取左室舒张末期压(LVEDP),计算每搏量(SV)、心脏指数(CI)、每搏指数(SI)与等容舒张期心室内压下降的时间常数(T值).结果 模型组与治疗组CK、TNI均显著高于假手术组;治疗组显著低于模型组.模型组与治疗组SOD均显著低于假手术组,治疗组显著高于模型组;模型组与治疗组LPO、OFR均显著高于假手术组(P<0.05);治疗组显著低于模型组.缺血前三组心脏功能指标差异均无统计学意义(P>0.05),再灌注25 min后假手术组各个心脏功能指标除LVEDP外均与缺血前相比差异无统计学意义(P>0.05);模型组与治疗组AP、SV、CI、SI均显著低于假手术组,而T值显著高于假手术组;治疗组AP、SV、CI、SI均显著高于模型组,LVDEP、T值显著低于模型组(P<0.05).结论 黄芪多糖具有显著改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与抗氧自由基、降低心肌钙含量以及减轻心肌舒张功能受损有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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可视化检测技术测定前列腺特异抗体的应用
编辑人员丨2023/8/6
目的 通过改良酶联免疫吸附试验(ELISA)信号放大系统,实现前列腺特异抗体(PSA)的可视化检测.方法 应用H2O2与氯金酸反应生成纳米金的原理,当H2O2减少时,纳米金粒径变大,导致吸收波长改变,颜色从红色变为蓝色.结果 实验首先确定了产生颜色变化的H2O2临界值是100μmol/L.在测定PSA的ELISA双抗体夹心法的最后一步,利用链霉亲和素-HRP消耗H2O2,导致H2O2低于临界值100μmol/L,检测液从红色变为蓝色.结论 应用可视化检测技术,可检测到的PSA最低水平为0.1 ng/mL.可视化检测技术具有灵敏度高,操作方便,无需仪器等优点,值得推广.
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编辑人员丨2023/8/6
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心血管疾病相关的MicroRNA-21新型检测方法的建立
编辑人员丨2023/8/6
[目的]建立一种测定miR-21含量新型实验方法.[方法]利用microRNA-21(miR-21)作为靶标,并设计基于双链特异性核酸酶(Duplex specific nuclease,DSN)及杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)的探针MP、H1及H2,通过加入靶标从而引起DSN和HCR反应,达到双重信号放大的目的,最终信号输出方式为DNAzyme显色,裸眼可视,根据其产生颜色强度对靶标进行定量检测.[结果]DSN结合HCR靶标的最低检测限可达1 pmol/L,线性范围为1 pmol/L~1μmol/L,特异性良好,除靶标miR-21外,非特异性靶标均无明显信号产生,在人体血清实际样品中检测miR-21,其回收率可达到92.3%~101.5%.[结论]该检测方法成功建立测定miR-21含量的技术平台,灵敏性可达1 pmol/L,且特异性好、快速可视,为研究及临床诊断心血管疾病提供技术依托.
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编辑人员丨2023/8/6
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PI3K抑制剂对甲型流感病毒FM1感染诱导病毒性肺炎小鼠肺组织中NO生成及炎症反应的影响
编辑人员丨2023/8/6
甲型流感病毒(InfluenzaA virus,IAV)感染可触发细胞因子风暴,并增加急性呼吸窘迫综合征的发生风险,肺组织内炎症反应的级联放大激活在该过程中起到关键作用.磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)信号通路参与细胞炎症反应的调控,刺激内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,并增加一氧化氮(Nitric oxide,NO)的生成,进而通过NO的活性来增加血管通透性并促进炎症细胞浸润、刺激炎症细胞活化,并分泌大量炎症因子.但PI3K/AKT通路在甲型流感病毒感染所致病毒性肺炎中的作用尚未明确.为研究PI3K抑制剂对IAV FM1感染诱导病毒性肺炎小鼠肺组织中NO生成及炎症反应的影响,选择C57BL/6小鼠并随机分为对照组、H1N1组、LY294002组,H1N1组、LY294002组通过病毒液滴鼻的方式建立IAV感染诱导病毒性肺炎的模型,LY294002组从造模当天开始,给予PI3K抑制剂LY294002腹腔注射、连续7d.比较三组小鼠肺组织HE染色及H1N1病毒拷贝数、PI3K/AKT/eNOS通路表达量、NO及炎症因子含量的差异.结果 显示,H1N1组肺组织HE染色出现明显的病理损害且H1N1病毒拷贝数、p-PI3K、p-AKT、eNOS的表达量及NO、IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1的含量明显高于对照组(P<0.05);LY294002组肺组织HE染色的病理损害减轻且p-PI3K、p-AKT、eNOS的表达量及NO、IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1的含量明显低于H1N1组(P<0.05),H1N1病毒拷贝数与H1N1组比较无显著性差异(P>0.05).本研究提示,PI3K抑制剂对IAV感染诱导病毒性肺炎小鼠肺组织中NO生成及炎症反应具有抑制作用.
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编辑人员丨2023/8/6
