目的 观察静脉注射甲泼尼龙(IVMP)冲击治疗总剂量对视神经脊髓炎谱系疾病相关视神经炎(NMOSD-ON)患者最佳矫正视力(BCVA)、治疗后复发次数的影响.方法 回顾性临床研究.2020年3月至2023年2月在山西省眼科医院检查确诊的NMOSD-ON患者23例27只眼纳入研究.所有患眼均采用国际标准视力表行BCVA检查,统计时换算为最小分辨角对数(logMAR)视力.所有患者采用基于细胞检测技术的间接免疫荧光法行血清水通道蛋白4抗体(AQP4-IgG)检测.依据中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南(2021版)给予患者IVMP冲击治疗.其中,给予1 000、500 mg/d的IVMP冲击治疗分别为18、5例,连续3～5 d,其后酌情减量为500 mg/d或250 mg/d,连续2～3 d.治疗过程中IVMP冲击总剂量平均为4 500 mg(1 500～5 250 mg).将初始、治疗后BCVA分为≤0.1、＞0.1～＜0.5、≥0.5三个区间,观察治疗后1周及1、3、6个月不同BCVA区间的变化情况.年龄、病程、IVMP总剂量等不同条件下BCVA比较采用Mann-WhiteneyU检验.不同复发次数者之间BCVA比较采用Kruskal-Wallis检验.IVMP总剂量对治疗后6个月随访期间复发次数的影响行x2检验.Logistic回归分析法分析IVMP治疗6个月后BCVA≥0.5的影响因素;Spearman相关性分析法分析△logMARBCVA与IVMP冲击总剂量的相关性.结果 23例27只眼中,男性3例,女性20例;年龄中位数35岁;发病时间中位数为5 d.AQP4-IgG阳性、阴性分别为21(91.30％,21/23)、2(8.70％,2/23)例.初始为首发病程者3例(13.04％,3/23)4只眼(14.81％,4/27);复发病程者20例(86.96％,20/23)23只眼(85.19％,23/27).患者初始至糖皮质激素治疗的干预时间中位数为7 d.治疗后6个月随访期间,复发5例(21.74％,5/23)6只眼(22.22％,6/27),均为初始复发病程者.其中,复发1次、≥2次分别为4(66.67％,4/6)、2(33.33％,2/6)只眼.初始、治疗后6个月BCVA≤0.1、＞0.1～＜0.5、≥0.5分别为20、4、3只眼及3、13、11只眼.初始、治疗后不同时间BCVA≤0.1、＞0.1～＜0.5、≥0.5的眼数比较,差异有统计学意义(x2=40.772,P＜0.001).女性患者治疗效果优于男性患者,初始BCVA≥0.1者BCVA提高眼数较BCVA＜0.1者更多,首发病程者BCVA提高眼数优于复发病程者,IVMP总剂量＞4 500 mg者BCVA提高眼数较总剂量≤4 500 mg者少,差异均有统计学意义(Z=-2.449、-2.904、-2.485、-2.286,P=0.014、0.004、0.013、0.022).Logistic回归分析结果显示,初始BCVA≤0.1、IVMP冲击总剂量越高,治疗后获得BCVA≥0.5的可能性更低(比值比=0.069、0.899,95％可信区间0.010～0.463、0.798～0.998,P=0.006,0.020).Spearman相关性分析结果显示,△logMAR BCVA与IVMP冲击总剂量呈负相关(rs=-0.472,P=0.013).不同总剂量IVMP冲击治疗后,复发次数比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 与IVMP总剂量＞4 500 mg比较,IVMP总剂量≤4 500 mg能获得更好的BCVA预后;IVMP总剂量对治疗后复发次数无影响.

目的:通过与酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)进行对比分析，探讨时间分辨荧光检测技术(time-resolved fluorescence immunoassay, TRFIA)在献血者样本乙型肝炎表面抗原(HBsAg)筛查中的应用价值。方法:分别采用两个厂家的ELISA HBsAg试剂和TRFIA试剂检测国家卫生健康委临床检验中心HBsAg血清盘和烟台中心血站献血者样本，分析两种检测方法的灵敏度、特异性等性能指标。结果:对于HBsAg血清盘检测结果TRFIA的灵敏度为99.43%，特异性为97.54%，阳性预测值(positive predictive value，PPV)为98.88%，阴性预测值(negative predictive value，NPV)为98.76%，约登指数为0.969 7，均显著高于ELISA。对于5 317例无偿献血者的筛查结果，TRFIA的灵敏度为100.00%，特异性为99.87%，PPV为66.67%，NPV为100.00%，约登指数为0.998 7，灵敏度、NPV和约登指数三项指标优于ELISA，三者检测结果差异无统计学意义。结论:TRFIA的检测灵敏度优于ELISA，适于向血液筛查推广。

目的 设计合成新型布鲁顿氏酪氨酸激酶蛋白水解靶向嵌合体(BTK PROTAC),并在体外评估这些分子对BTK蛋白的降解活性.方法 以Nurix Therapeutics公司临床化合物NX-5948为先导化合物,分析其与靶蛋白的相互作用,通过引入并环代替吡嗪胺的骨架跃迁思路对其进行结构改造,成功合成了一系列新型BTK PROTACs,通过时间分辨荧光共振能量转移技术(TR-FRET)、MTS法和蛋白质免疫印迹法分别测定目标化合物的激酶活性、细胞增殖抑制活性和BTK蛋白降解活性.结果 共合成6个目标化合物(化合物B～G),活性测试结果显示,大部分化合物都具有优异的细胞增殖抑制活性和BTK降解活性,其中化合物B表现出较优的BTK蛋白降解能力,其半数最大降解浓度(DC50)值约为0.1 nmol·L-1.结论 基于NX-5948,通过骨架跃迁的方法设计合成了一类新颖的BTK PROTAC化合物,进行了构效关系的初步探索,可为BTK PROTAC降解剂的进一步研究提供参考.

多肽CAI在HIV-1衣壳蛋白(CA)C末端的结合口袋可用来筛选CA蛋白装配调节剂.采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)筛选399个化合物,发现1个小分子化合物环索奈德(ciclesonide)能够竞争性抑制十二肽CAI与CA蛋白C末端的结合,其半数抑制浓度IC50值为6.06 μmol/L.生物膜干涉技术(BLI)测量环索奈德与CA蛋白(单体和六聚体)的结合,环索奈德与CA六聚体的亲和力为159 nmol/L,远远大于其与CA单体的亲和力(KD=1.68 mmol/L).衣壳蛋白体外装配实验表明,环索奈德能促进CA蛋白的装配,且具有浓度依赖性.分子模拟分析环索奈德与CA蛋白的结合模式,显示环索奈德与CA六聚体的相互作用发生在六聚体相邻亚基N末端-C末端的界面上,并与H67和L211两个残基形成氢键.研究表明,环索奈德是一种潜在的HIV-1衣壳装配调节剂.

目的 采用"分子对接-分子动力学-体外药理学"研究方法筛选并优化阻断程序性细胞死亡蛋白1/程序性细胞死亡配体 1(programmed cell death protein 1/programmed death-ligand 1,PD-1/PD-L1)结合,获得具有较高抗肿瘤活性的多肽小分子化合物.方法 利用本团队构建的5肽化合物数据库,以及从蛋白质数据库(protein databank,PDB)中下载的PD-L1蛋白质三维结构数据,采用Molecular Operating Environment软件进行柔性分子对接得到多肽化合物;对其中 GWVI/WSA(generalized Born volume integral/weighted surface area)自由能变化值(ΔG)排名最高的化合物分子进行分子动力学计算分析,包括配体重原子位置变动的均方根偏差(root mean square error,RMSD)以及相互作用能[为兰纳-琼斯势能(Lennard-Jones potential)与库伦势能(Coulombic energy)之和].通过均相时间分辨荧光(homogeneous time-re-solved fluorescence,HTRF)技术分析配体化合物对PD-1/PD-L1相互结合的阻断作用,建立Jurkat T淋巴细胞与黑色素瘤B16-F10细胞的共培养体系,探索化合物配体对T细胞杀伤肿瘤作用的影响以及对共培养上清液中IL-2分泌水平的影响.结果 在筛选的多肽化合物中,RGGHA与RGGHH与PD-L1的结合更为稳定,其中RGGHA与PD-L1存在多种相互作用力,与PD-1竞争性结合PD-L1的Asp122、Try123、Lys124等位点阻断PD-1/PD-L1信号转导.HTRF实验表明,RGGHA对PD-1和PD-L1结合抑制率为58.38％,RGGHH为42.73％.此外,在共培养体系中,RGGHA与RGGHH能够显著增加IL-2的分泌水平,提高T细胞对于肿瘤细胞的杀伤能力,激活肿瘤免疫微环境.结论 研究发现多肽化合物RGGHA与RGGHH可以有效阻断PD-1/PD-L1相互作用,重新激活有利于抗癌的免疫反应,可以将其作为先导化合物用于新药研发.

目的 在传统的时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技术基础上,结合生物素-亲和素放大技术和磁性微粒技术优势,建立一项新方法 进行血清中糖类抗原153(carbohydrate antigen 153,CA153)含量的测定.方法 利用磁性微粒表面的链霉亲和素分子与生物素-CA153包被抗体快速高效结合,从而在固相载体磁性微粒表面形成双抗体夹心复合物.并对新方法 的各项性能指标进行评价.结果 获得的CA153 TRFIA线性方程为y=54 638x+7 052.2,R2=0.9995;该方法 的灵敏度为0.48 U/mL,批内和批间的变异系数分别为2.09％～5.95％,1.54％～7.15％,平均回收率为94.48％,与其他肿瘤标志物无明显干扰,正常范围参考值为0～35U/mL.用该方法 检测乳腺癌与健康体检者血清的CA153结果 与化学发光法一致,相关系数为0.9782.结论 该方法 灵敏度优于传统技术,是TRFIA的一种新方法,反应时间短,操作简单,敏感度、特异性、准确度等均符合临床应用要求.

目的 建立检测糖类抗原(CA)199的磁珠时间分辨荧光免疫分析法(Nano-TRFIA).方法 采用磁珠耦联标记抗CA199单克隆抗体(B1),Eu3+标记抗CA199单克隆抗体(Eu3+-CA199-B7),采用双抗体夹心法建立基于磁性微球法的 CA199检测方法 Nano-TRFIA,并对90份血清标本进行该方法血清学检测.结果 Nano-T RFIA检测CA199的灵敏度为0.2 U/mL,甲胎蛋白、CA125对CA199-T RFIA 均无交叉反应.磁珠耦联B14 ℃保存3个月免疫反应基本无损;同批试剂连续3个月应用分析结果稳定,样品的平均添加回收率为97.91%,批内和批间变异系数(CV)分别为4.84% 和8.32%.Nano-T RFIA 检测血清CA199结果与电化学发光法(ECLIA)检测结果显著相关(Y=0.9698 X+4.0153).以ECLIA为金标准,Nano-T RFIA 检测血清CA199时2份标本出现了假阳性.结论 Nano-T RFIA的灵敏度、特异度、准确度等均符合临床应用要求,为进一步临床验证奠定了基础.

抗dsDNA抗体是系统性红斑狼疮的诊断标准之一[1].在系统性红斑狼疮中,抗dsDNA抗体阳性率为60% ~90%,浓度随着疾病的活动和缓解而升高和降低.抗dsDNA抗体浓度的检测对于系统性红斑狼疮的诊断和预后判断有重要意义.目前检测抗 dsDNA 抗体的方法有间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附试验方法(ELISA)及放射免疫法(Farr).近几年,时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroim-munoassay,TRFIA)被广泛应用于多种抗原抗体的定量检测[2-3].时间分辨荧光免疫技术利用镧系元素螯合物的荧光寿命长,Stokes位移大,荧光强度高等独特的荧光特性,在背景荧光已经降到很低时再开始检测特异的阳性信号,确保检测信号特异性的同时,应用解离-增强原理进一步增加了该检测的灵敏度,检测下限可达5×10-14mol/L.

目的 对2014-2016年青岛地区的产前筛查与产前诊断情况进行回顾性分析,为出生缺陷干预提供科学依据.方法 应用12 35全自动时间分辨荧光免疫分析仪(1235Automatic Immunoassay System)测定孕妇血清标记物AFP、free-β-HCG、μ E3的生化值,并结合其孕周、年龄、体重等因素进行风险评估,对于高风险或临界风险的孕妇召回,并建议行羊水或无创DNA检测以及影像学检测,并紧密随访至出生后半年.结果 接受产前筛查的327 788例孕妇中,高风险孕妇19 025例(5.8％),其中16 384例接受了无创DNA检测,5472例接受了羊水产前诊断,检出异常病例381例,逐年递增的异常检出率差异有统计学意义.结论 实行血清学筛查联合无创DNA、羊水脐血产前诊断、影像学超声检测的逐级筛查模式,可以更有效地利用医疗资源,很大程度上降低出生缺陷的发生.

目的 探讨珠海市孕中期血清学三联指标筛查胎儿染色体异常的价值.方法 选取2013年8月-2014年7月在该院进行产前检查的孕14 ～ 20+6周单胎妊娠孕妇6 708例,采用时间分辨荧光免疫法检测孕妇血清中的甲胎蛋白(AFP)、游离人绒毛膜促性腺激素(f-βhCG)和游离雌三醇(uE3),结合孕妇的年龄、孕周、体质量、吸烟、糖尿病及妊娠史等因素,用Life-cycle3.2风险计算软件进行评估,唐氏综合征和18-三体综合征的风险截断值分别为1/250和1/350.高风险孕妇在知情同意基础上,于孕20周后行羊水染色体核型分析以确诊.结果 在上述样品中,共筛出唐氏综合征和18-三体综合征高风险孕妇387例,阳性率为5.77％,其中唐氏综合征和18-三体综合征高风险孕妇分别为376例(5.61％)和11例(0.16％).高风险孕妇中的248例(64.08％)进行了羊水染色体核型分析,检出染色体异常胎儿27例(10.89％),其中唐氏综合征和18-三体综合征各4例(各占1.61％)、其他染色体异常19例(7.66％).在6 321例筛查低风险孕妇中,因年龄风险增高,经产前诊断分别确诊为唐氏综合征和18-三体综合征各1例(均≥35岁),产后追踪随访发现唐氏综合征1例.唐氏综合征和18-三体综合征检出率分别为66.67％ (4/6)和80.00％ (4/5),筛查假阳性率为5.65％ (379/6 708).结论 孕中期血清学指标产前筛查不仅可有效检出唐氏综合征和18-三体综合征,还可以检出其他染色体异常,是一项重要的保证孕妇生育质量的血清生化免疫筛查技术手段.