目的 设计一种新型淫羊藿苷修饰的普鲁兰聚合物,通过化学连接和物理包埋的方式高效装载淫羊藿苷,制备一种具有缓释性的纳米球形载体,并对其性能进行初步探讨.方法 淫羊藿苷通过丁二酸酐作为连接臂接枝亲水性普鲁兰形成淫羊藿苷修饰的普鲁兰聚合物,通过傅里叶红外光谱对终产物鉴定.采用透析法制备负载淫羊藿苷的普鲁兰纳米粒.测量空白纳米粒和载药纳米粒的粒径和Zeta电位,利用透射电镜观察其形貌,并测定其在不同pH条件下的体外药物释放行为.结果 纳米粒具有规则的形态、均匀的尺寸.空白纳米粒电位为+2.23 mV,载药纳米粒电位为+3.98 mV;空白纳米粒平均粒径为 122 nm,载药纳米粒粒径为190 nm.纳米粒能明显延长淫羊藿苷的缓释作用时间,在pH 6.8的酸性条件下更有利于淫羊藿苷的释放.结论 通过两亲性聚合物自组装行为,成功制备了尺寸均匀的纳米粒.通过聚合物化学连接方式丁二酸将中药单体淫羊藿苷连接普鲁兰制备为纳米递送系统,淫羊藿苷的普鲁兰纳米递送系统该系统能使疏水性药物成为纳米型的水溶性药物,药物具有缓释性,并在弱酸度环境下可以定向释放.

[背景]海洋环境中分离到的微泡菌属菌株具有多糖降解能力,在环境中可以作为糖类代谢的重要执行者参与海洋碳循环过程.[目的]测定 2株微泡菌属菌株的多糖降解活性,通过与微泡菌属其他菌株基因组比较分析 2 株菌的多糖降解基因特征.[方法]通过 3,5-dinitrosalicylic acid(DNS)定糖法测定多糖降解活性,同时利用高通量测序技术对菌株基因组序列进行测定与组装,并与其他基因组注释结果进行比较分析.[结果]分离得到 2 株微泡菌属菌株YPW1 和YPW16,二者均为潜在新种.结果表明,菌株YPW1 能够降解琼胶、褐藻胶、果胶、几丁质、木聚糖、淀粉、普鲁兰等 7 种多糖,而菌株YPW16 仅可降解淀粉和普鲁兰.基因组分析表明,YPW1 具有上述 7 种多糖的降解酶基因,但菌株YPW16 只具有淀粉酶与普鲁兰酶降解基因.相较于其他微泡菌属菌株,菌株 YPW1 多糖降解范围、多糖降解酶基因种类与丰度较高,但菌株 YPW16 多糖降解范围却较为狭窄.由此可知,多糖降解酶基因在微泡菌属基因组中的分布差异性较大.[结论]本研究为微泡菌属提供了 2 株潜在的新型菌株资源,为生物多糖降解提供了生化工具,也为研究微泡菌属菌株中多糖降解基因分布与相关菌属的生态功能奠定基础.

目的 开发一种应用于肉类保鲜的天然、绿色、可食用复合防腐保鲜剂.方法 以市售冷鲜猪肉为研究对象,利用普鲁兰多糖成膜的特点,使用纳他霉素、乳酸链球菌素作为主要防腐保鲜剂,柠檬酸作为防腐保鲜增强剂,以色泽、气味、pH、菌落总数和挥发性盐基氮(TVB-N)作为评价指标,优化防腐保鲜剂复配方案.结果 最优复配配方为:乳酸链球菌素(0.2 g/L),纳他霉素(0.1 g/L),普鲁兰多糖(5 g/L), 柠檬酸(10 g/L).结论 本研究为冷鲜肉防腐保鲜提供了一种经济、安全、有效、实用的配方.

目的 研制一种对鹰爪虾具有防腐保鲜作用的复合生物保鲜剂.方法 将经复合生物保鲜剂处理过的鹰爪虾在4 ℃件下冷藏,通过感官评分、菌落总数、pH值、挥发性盐基氮指标的测定,得到最佳保鲜组合.结果 最终确定的最优配方为:乳酸链球菌素(nisin) 1 g/L,纳他霉素0.2 g/L,普鲁兰多糖5 g/L,柠檬酸5 g/L.结论 虾经最优保鲜剂处理后,冷藏6 d时依然保持二级鲜度,处于可接受范围,有效延长了货架期.

目的 开发分别适用于市售草莓、荔枝、冬枣的防腐保鲜膜.方法 以市售草莓、荔枝、冬枣为研究对象,利用普鲁兰多糖的保水成膜性,使用生物防腐剂纳他霉素作为主要霉菌抑制剂,维生素C和柠檬酸作为增强剂,以水分、气味、组织状态、色泽、失重率、维生素C含量等指标作为评价指标,优化防腐保鲜配方.结果 开发出适用于不同水果的防腐保鲜剂最优配方,草莓:1.5％普鲁兰多糖+0.05％纳他霉素,冬枣:1.5％普鲁兰多糖+0.025％纳他霉素,荔枝:3％普鲁兰多糖+0.1％纳他霉素.结论 本研究为不同品种的水果提供了有针对性、经济、安全、有效的生物防腐保鲜剂配方.

目的 细胞毒T淋巴细胞是抗肿瘤免疫的主要效应细胞,纳米粒表面经特异性抗体修饰可使其靶向并激活T细胞.文中探讨生物素化乙酰普鲁兰多糖纳米粒耦联CD3抗体(Bio-PA-CD3 NPs)对CD8+T细胞增殖及细胞因子分泌及摄取效应的影响.方法 超声透析法制备了3种生物素取代度Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs,CD3抗体耦联于纳米粒表面.比较3种纳米粒的粒径,Zeta电位;CCK-8法检测对CD8+T细胞增殖的影响,ELISA试剂盒测定纳米粒对CD8+T细胞分泌的3种细胞因子含量.流式细胞仪定量分析细胞摄取Bio-PA-CD3 NPs.结果 Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs表面CD3抗体浓度分别为(36.1±4.4)、(21.4±4.3)和(10.3±4.7)μg/mg.耦联CD3抗体的纳米粒与CD8+T细胞共孵育48 h,NPs浓度为50、100、200μg/mL时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05);共孵育96 h,NPs浓度为1、10、50、100、200μg/mL时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05).当NPs浓度为10μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IL-2的分泌;当NPs浓度为50μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ的分泌;Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进TNF-β、IL-2的分泌;当NPs浓度为100、200μg/mL时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ、TNF-β、IL-2的分泌(P<0.05).流式结果显示CD8+T细胞对Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs 3组纳米粒摄取率荧光强度峰值左移,即荧光强度逐渐降低.结论 制备的耦联抗体的普鲁兰多糖纳米粒有望作为一种提高T细胞免疫效应的制剂.

目的:出芽短梗霉RM1603是一株高产胞外多糖新菌株,通过优化其产糖条件,鉴定其多糖结构,为进一步开发利用RM1603产胞外多糖奠定理论基础.方法:以RM1603为出发菌株,在单因素分析确定最佳氮源与无机盐的基础上,利用正交试验探究RM1603最佳发酵产糖条件;薄层层析及红外光谱分析确定胞外多糖产物结构.结果:出芽短梗霉菌RM1603的初始多糖产量为28.91 g/L,发酵条件优化后产糖量达到65.213 g/L,提高了约2.3倍;结构分析表明RM1603的多糖产物为普鲁兰多糖.结论:出芽短梗霉RM1603是一株具有较大产糖优势,极具开发潜力的高产普鲁兰糖新菌株;奠定了开发利用RM1603生产普鲁兰多糖的理论基础.

普鲁兰糖是由出芽短梗霉产生的一种胞外多糖,在食品、药物、化妆品等领域有广泛应用,但其具体的分子合成机制和分子量调控机制尚不明确.本文回顾了近年普鲁兰糖生物合成途径及分子量调控机制研究,并绘制了可能的普鲁兰糖合成途径,总结了影响普鲁兰糖产量和分子量的因素.

菌株SRF是1株从意大利树莓(Rubus corchorifolius)果实表面分离、可产胞外多糖的新菌株.在鉴定其分类归属的基础上,对其产生的胞外多糖进行了结构分析和发酵条件优化,为寻找微生物多糖提供新的菌株,为开发利用资源微生物提供借鉴.通过形态学和ITS序列对比分析进行菌株鉴定;通过薄层层析和红外光谱分析,确定胞外多糖结构;通过单因素检测试验,确定影响产糖量的主要因素;响应面Plaekett-Burman和Box-Behnken设计筛选发酵产胞外多糖的最优条件.结果 表明,出发菌株SRF隶属于出芽短梗霉属,命名为Aureobasidium sp.SRF;SRF所产胞外多糖为普鲁兰多糖;单因素检测表明,对多糖产量影响最大的因素为碳源浓度、氮源浓度、无机离子浓度,其次是碳源、氮源、无机离子、pH值;根据响应面结果确定最优发酵条件为麦芽糖8％(质量分数)、酵母提取物3％(质量分数)、钙离子0.3 g/L、pH 6,产糖量达5.93 g/L.SRF是1株来源于树莓浆果表面,可产胞外普鲁兰多糖的出芽短梗霉新菌株,是1株产微生物多糖的候选菌株.

人参皂苷Rg3作为抗肿瘤辅助用药,广泛应用于临床,但由于其口服吸收差,因此应用受到了一定的限制.该研究拟构建普鲁兰多糖(pullulan,PUL)修饰的人参皂苷Rg3纳米结构脂质载体(PUL-Rg3-NLC),提高Rg3的黏附特性,促进摄取,改善抗肿瘤功效.通过形态学观察、粒径大小、Zeta电位等指标对PUL-Rg3-NLC进行表征.通过口服灌胃实验评价其体内黏附特性,并结合体外摄取行为、体外抗肿瘤药效学等评价手段多角度进行验证.结果 表明,实验制备的PUL-Rg3-NLC粒径为(102±1.89) nm,具有胃黏附特性,可以较长时间地滞留在胃组织,其主要通过细胞膜穴样凹陷介导的内吞途径促进人胃腺癌细胞BGC-823细胞对其摄取.体外MTT、凋亡、划痕和侵袭实验均表现出一定的抗肿瘤作用.因此,PUL-Rg3-NLC可以显著促进人参皂苷Rg3在胃部的黏附,促进胃癌细胞对药物的摄取,提高抗肿瘤作用,该研究可为胃部肿瘤辅助治疗提供一定的借鉴.