目的:研究喷施不同叶面肥对柔毛淫羊藿开花结实及黄酮醇苷类成分含量的影响.方法:以柔毛淫羊藿 2 年生苗为供试材料,采用 0.1%磷酸二氢钾(T1)、0.06%硼酸(T2)、0.1%磷酸二氢钾+0.03%硼酸(T3)、5%氨基酸水溶肥(T4)及清水对照(CK)5 个处理,分别于抽薹前、花蕾期、盛花期喷施,分析各处理对植株光合作用、开花结实和叶中黄酮醇苷成分含量的影响.结果:与CK比较,T1 处理能够显著增加花枝数、种子产量和总黄酮醇苷含量;T2 处理能够增加花枝数、花枝长度、种子产量、种子千粒质量及叶片中朝藿定A、朝藿定B含量;T3 处理能够增加花枝数和种子产量,但不利于黄酮醇苷类成分的积累;T4 处理能够增加花枝数、种子产量和总黄酮醇苷含量.结论:合理施用叶面肥可促进柔毛淫羊藿开花结实、提高黄酮醇苷类成分含量,其中硼酸促进结实效果最佳,磷酸二氢钾和氨基酸水溶肥对柔毛淫羊藿生长和黄酮醇苷类成分积累有积极作用.研究结果可为柔毛淫羊藿种子生产和药材定向培育施肥方案的制定提供参考.

目的:研究淫羊藿不同炮制品的细胞毒性，以及其毒性的物质基础。方法:采用磺酰罗丹明B（SRB）比色法考察淫羊藿不同炮制品对HaCaT细胞增殖的影响，并基于灰色关联度分析法建立HPLC指纹图谱-毒效数据谱效关系，确定其毒性成分及炮制方法。结果:淫羊藿不同炮制品的半抑制浓度（IC 50）值依次为醋炙>羊脂油炙>生品>单炒>盐炙>酒炙，12个特征色谱峰中3号峰（木兰花碱，关联度为0.870）和6号峰（朝藿定C，关联度为0.851）与毒性参考值关联度较高。 结论:醋炙、羊脂油炙均具有减毒作用，木兰花碱、朝藿定C可能是淫羊藿的主要毒性成分，本研究可为淫羊藿炮制减毒的工艺优化提供依据。

目的 探究箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.叶片不同发育时期黄酮类成分变化与元素积累的规律,揭示其黄酮类成分的形成机制.方法 以箭叶淫羊藿叶片为研究对象,将其按照不同发育时期分为t1～t6共6个时期,高效液相色谱(HPLC)测定4种黄酮类成分含量,紫外分光光度法测定总黄酮醇苷含量;实时荧光定量法(RT-qPCR)测定17个与黄酮类成分合成关键酶基因的相对表达量;电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定25种元素含量;皮尔逊(Pearson)相关性分析黄酮类成分与元素的关系.结果 淫羊藿苷含量呈现先上升后下降的趋势,朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、总黄酮醇苷的含量显著降低,但是5种黄酮类成分总量却显著升高,在t4和t5时期大量积累.大部分黄酮类成分合成关键酶基因表达量在t4和t5时期显著上调,在t2时期显著下调,不同基因的表达量随叶片发育而变化;叶片中元素Mg、Ca、Ti、Mn、Fe、Sr和Ba元素含量显著升高,元素K和Co含量显著降低;元素P、K、V、Cu的含量与箭叶淫羊藿中黄酮类成分含量呈显著性正相关.结论 箭叶淫羊藿叶片中黄酮类成分形成过程受到叶片发育程度及相关基因表达的影响,黄酮类成分在叶片发育后期大量积累.

探究不同比例有机肥和化肥配施对柔毛淫羊藿产量和品质的影响,为柔毛淫羊藿的高产优质栽培提供科学的施肥依据.该试验采用田间小区试验,以CK(不施肥)为对照,设置 5 个不同比例有机肥和化肥配施处理组,OF0(100%化肥)、OF25(25%有机肥配施)、OF50(50%有机肥配施)、OF75(75%有机肥配施)和OF100(100%有机肥),测定不同施肥模式对柔毛淫羊藿农艺性状、产量、有效成分含量、养分积累量及土壤理化的影响,并采用CRITIC权重法对药材产量及品质进行综合评价.结果发现各施肥处理药材产量均较CK显著增加,尽管各有机肥配施化肥处理产量略低于OF0 处理,但无显著差异,表明有机肥配施化肥可以保证药材产量.随着有机肥配比的提高,药效成分朝藿定A、朝藿定B和朝藿定C呈先增后降趋势,以OF25 处理含量最高,淫羊藿苷则呈不断上升趋势,以OF100 处理最佳,但总体来说,总黄酮醇苷ABCI以OF25 处理积累最多.CRITIC法结果显示药材情况综合得分前三的施肥处理为OF25、OF50、OF75.有机肥配施化肥有利于提高土壤的持肥能力和供肥能力,土壤指标以OF100 处理最优,土壤酶活以OF75 处理活性最高,同时有机肥配施化肥有助于植株对养分的吸收积累,以OF25 处理促进最明显.综合不同比例有机肥配施化肥对柔毛淫羊藿产量、有效成分含量及养分积累量等指标,建议在柔毛淫羊藿生产中第一年采用 25%比例(7 500 kg·hm-2)的有机肥和化肥配施,以促进柔毛淫羊藿产业增产提质.

目的:探究仙茅-淫羊藿水提物(EX)中入血成分的抗炎作用.方法:采用AutoDockTools软件将EX中5种入血成分(仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷I、苔黑酚葡萄糖苷和朝藿定A)与靶蛋白髓细胞触发受体2(TREM2)进行分子对接;采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测EX中5种入血成分在不同浓度下对小胶质细胞(BV2)细胞活力的影响;采用LPS刺激BV2或小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)及尼日利亚菌素(nigericin)刺激LPS预处理的BMDMs细胞建立炎症模型,并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测5种入血成分对细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平的影响.结果:EX的入血成分仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ和朝藿定A与TREM2结合十分稳定,苔黑酚葡萄糖苷与TREM2结合较为稳定;仙茅苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、朝藿定A和苔黑酚葡萄糖苷均可在一定浓度下减少BMDMs细胞产生的IL-1β水平,而仅高浓度的仙茅苷和淫羊藿苷可减少BMDMs细胞产生的TNF-α水平.结论:EX的5种入血成分均可与TREM2结合,抑制下游NF-κB、NLRP3炎症通路改善炎症,可能是EX调控TREM2改善学习记忆能力和神经炎症的有效物质基础,在EX中起到协同增效的作用.

目的 通过数据挖掘、网络药理学及分子对接技术分析含淫羊藿的保健食品的组方规律并对其潜在的机制进行研究.方法 通过检索国家市场监督管理总局及药智网含淫羊藿的保健食品,采用频数统计和关联规则等方法分析基本信息及组方规律.通过检索TCMSP等数据库、整理相关文献获得淫羊藿相关化学成分及潜在靶点;根据保健功能频次分析结果,从GeneCards等数据库中筛选相关的潜在靶点信息;借助R语言相关软件包、String数据库、Cytoscape软件等筛选出关键成分和关键靶点.随后进行蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析,根据度(degree)值筛选出核心靶点,并进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析.最后,利用分子对接技术验证核心靶点和关键成分的作用亲和力.结果 筛选纳入501种含淫羊藿保健食品.剂型以胶囊剂为主;保健功能频次排名前3的分别为缓解体力疲劳(343次)、有助于增强免疫力(140次)、有助于改善骨密度(87次);涉及116种中药,以补虚药为主,四气以温为主,五味以甘为主,归经以肾经为主.获得淫羊藿有效成分139个、靶基因1 677个,获得体力疲劳相关潜在靶点849个、免疫力相关潜在靶点2 076个、骨质疏松相关潜在靶点1440个;将淫羊藿和主要保健功能的靶基因取交集,得到淫羊藿缓解体力疲劳关键靶点227个、有助于增强免疫力关键靶点358个、有助于改善骨密度关键靶点332个;淫羊藿通过激酶活性的正向调节等过程及磷脂酰肌醇-3-羟激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B,Akt)等信号通路起到缓解体力疲劳的作用,通过细胞因子产生的正向调节等过程及Th17细胞分化等信号通路起到增强免疫力的作用,通过对肽的反应等过程及PI2K/Akt等信号通路起到改善骨密度的作用.分子对接结果提示淫羊藿的关键成分与核心靶点能自发稳定地结合.结论 通过数据挖掘、网络药理学和分子对接研究,分析了含淫羊藿的保健食品相关信息,初步揭示淫羊藿主要保健功能的潜在靶点与机制通路,为淫羊藿后续产品的研发提供了理论依据.

建立淫羊藿Epimedium brevieornu中13种化学成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的一测多评法,考察该方法在评价不同产地和不同品种的淫羊藿药材质量中具有一定的可行性和准确性.通过对实验方法的科学性及准确性考察,采用外标法测定淫羊藿中13种化学成分的含量,同时,以淫羊藿苷为内标,分别建立淫羊藿苷与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的相对较正因子,计算淫羊藿中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的含量,实现用一测多评法测定其含量,最后比较实测值与计算值的差异,来验证一测多评法在测定中的准确性及科学性.各成分相对校正因子重复性较好,外标法测定结果与一测多评测定结果无显著性差异.以淫羊藿苷为内标,同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的一测多评法可用于淫羊藿的定量分析.

目的 建立参仙升脉口服液的特征指纹图谱及多指标成分定量测定方法.方法 采用Ultimate LP-C18(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈和0.2％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为270 nm(0～16 min,24～38 min)、210nm(16～24min,38～100 min),体积流量为1.0 mL·min1,柱温为30 ℃,进样量为10μL.应用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)对10批参仙升脉口服液进行分析,建立HPLC指纹图谱,并测定10个指标成分的含量.结果 建立的指纹图谱确定共有峰28个,指认了其中12个,10批样品间相似度均在0.934以上.定量分析的10个成分分别为丹参素、盐酸伪麻黄碱、补骨脂苷、异补骨脂苷、迷迭香酸、丹酚酸B、补骨脂素、异补骨脂素、朝藿定C和淫羊藿苷,质量浓度分别为 1.218～2.781、0.333～0.702、2.391～4.120、2.083～3.486、0.151～0.203、0.158～1.046、0.189～0.286、0.196～0.305、0.231～0.403和0.323～0.512mg·mL-1.结论 所建立的指纹图谱与多指标成分定量方法准确可靠,可用于参仙升脉口服液较全面的质量控制.

背景与目的 探索来源于传统中药补骨脂和淫羊藿中治疗肝癌的有效成分,或者两种中药中协同治疗肝癌的有效成分,以期为补骨脂和淫羊藿在治疗肝癌中的临床应用提供科学依据.方法 本研究以淫羊藿和补骨脂所含化学成分为研究对象,采用细胞增殖及毒性试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测人肝癌HepG2细胞活力,构建药物浓度-细胞活力响应曲线,分析这些成分对HepG2细胞活力的影响,并结合协同效应指数明确上述成分对肝癌细胞的协同抑制作用及强弱关系.结果 CCK-8测定结果显示,补骨脂中补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂定、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂酚、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚对HepG2细胞活力具有显著抑制作用,其中补骨脂甲素呈显著剂量-效应关系;淫羊藿中只有淫羊藿次苷II对HepG2细胞活力具有显著抑制作用,提示这8种成分是潜在抑制肝癌细胞活力的有效成分.随后,我们以补骨脂甲素为主要药效成分,筛选与其联用协同抑制肝癌细胞活力的有效成分.协同效应指数结果显示,7种补骨脂成分(补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂苷、补骨脂乙素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂酚和补骨脂定)和8种淫羊藿成分(淫羊藿苷、淫羊藿素、朝藿定A1、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ和淫羊藿次苷II)与补骨脂甲素联用后,对HepG2细胞活力均具有协同抑制作用,其中淫羊藿次苷II或补骨脂定呈剂量依赖,淫羊藿次苷II的协同效应指数最大(q = 2.69),其次是补骨脂定(q = 2.6).结论 淫羊藿和补骨脂中均含有抑制肝癌细胞活力的有效成分,补骨脂和淫羊藿中成分可以不同强度协同补骨脂甲素抑制肝癌细胞活力.本研究可为淫羊藿和补骨脂配伍治疗肝癌的物质基础提供科学依据.

目的 通过UPLC-Q-TOF-MS技术,探讨不同基原淫羊藿和巫山淫羊藿的药材体外化学成分的差异,为淫羊藿及巫山淫羊藿药材鉴定及质量控制奠定基础.方法 采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,2.7 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-甲醇(+)及水-甲醇(-)为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1.质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下进行数据采集.通过保留时间、相对分子质量及二级碎片离子对巫山淫羊藿、淫羊藿、柔毛淫羊藿、箭叶淫羊藿及朝鲜淫羊藿药材中的化学成分进行鉴定,并基于所鉴定出的化合物对不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材的化学成分通过SIMCA软件进行差异分析.结果 不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材中共鉴定出朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷等 37 种化学成分,经过对比发现不同基原的淫羊藿及巫山淫羊藿药材中淫羊藿定L、2''-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、木兰花碱等12 种成分的相对含量具有明显差异,差异化合物经鉴定主要为黄酮类化合物.结论 本试验所发现的差异化合物可以作为区分不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材的指标,这5种药材的鉴别和质量控制奠定基础.