目的:寻找肝脏内质网应激过程中未折叠蛋白反应-蛋白激酶R样内质网激酶（UPR-PERK）通路潜在的作用靶点，并在肝脏内质网应激模型中验证UPR-PERK通路对氧化应激诱导生长抑制因子1（ Osgin1）是否存在调控关系。 方法:以GEO数据库作为分析数据的来源，通过GEO2R软件挑选出符合标准的差异基因，对禁食-再喂食、运动及年龄3种生理因素引起显著变化的差异基因使用韦恩图取交集，确定 Osgin1是变化显著的基因。通过GENEMANIA数据库验证UPR-PERK通路与 Osgin1是否存在直接作用。随后分别在GEO数据库和TCGA数据库中通过3种不同的肝脏内质网应激模型（急性内质网应激模型、非酒精性脂肪性肝病模型及肝癌模型）进一步验证UPR-PERK通路对于 Osgin1的调控关系。数据统计采用GraphPadPrism 9.0.0软件，采用Pearson相关分析法分析UPR-PERK通路基因与 Osgin1转录水平的相关性。 结果:与对照组相比，在禁食-再喂食、增加运动及增龄3种生理因素下， Osgin1转录水平分别上调了700%、下调156%以及229%（ P<0.05）。经GENEMANIA数据库验证UPR-PERK通路与 Osgin1存在直接作用。在内质网应激诱导剂导致的急性肝脏内质网应激模型中，与对照组相比，抑制UPR-PERK通路相关基因（ Eif2ak3）可以显著逆转由内质网应激诱导剂Tunicamycin导致的 Osgin1 mRNA水平的上调（ Osgin1 mRNA下调87%， P<0.001）；在非酒精性脂肪性肝病模型中，与对照组相比，通过给予药物实现缓解UPR-PERK通路的同时， Osgin1转录水平也随之下调（减重药物BI4556906组 Osgin1 mRNA下调48.0%；EX10970组 Osgin1 mRNA下调43.3%；肌醇需要酶1α激动剂IXA4组 Osgin1 mRNA下调56.6%； P<0.05）；在肝癌模型中，与对照组相比，UPR-PERK通路相关基因与 Osgin1转录水平在肝癌组织中显著上调（ Osgin1 mRNA上调109%， P<0.001）。 结论:在生理条件及肝脏内质网应激模型中，UPR-PERK通路的激活上调 Osgin1转录水平。

探讨葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)缓解内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)改善体内外糖代谢的效应机制.分子对接预测GQD入血主要药效成分与ERS相关靶点的结合活性.取冻存正常组、高脂诱导糖尿病模型组、二甲双胍组和GQD组大鼠肝组织,提取RNA和蛋白质,qPCR检测ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白 78(glucose-regulated protein 78,Grp78)、未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)通路基因肌醇需求酶 1(inositol requiring enzyme 1,Ire1)、转化因子6(activating transcription factor 6,Atf6)、Atf4、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,Chop)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12 基因mRNA表达;Western blot 检测 GRP78、IRE1、蛋白激酶 R 样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、ATF6、X-盒结合蛋白 1(X-box binding protein 1,XBP1)、ATF4、CHOP、caspase-12、caspase-9 和caspase-3 蛋白表达;比色法检测肝组织钙离子含量.体外采用衣霉素诱导 6 h建立 ERS-HepG2 细胞模型,2.5%、5%、10%GQD 含药血清(GQD-containing serum)给药 9 h,葡萄糖氧化酶法检测细胞外液葡萄糖含量;流式细胞术检测细胞凋亡;糖原染色检测细胞糖原含量;免疫荧光检测ERS标志蛋白GRP78 表达;比色法检测胞内钙离子含量;Western blot检测GRP78 和ERS诱导IRE1、PERK、ATF6 和真核翻译启动因子 2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)磷酸化,同时检测胰岛素降糖通路蛋白胰岛素受体底物 1(insulin receptor substrate 1,IRS1)、磷脂酰肌醇 3-激酶p85 调控亚基(phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit p85,PI3Kp85)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)的磷酸化水平.此外,Western blot检测沟通ERS与胰岛素降糖通路的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNKs)磷酸化水平.分子对接结果显示,GRP78、IRE1、PERK、ATF4 与黄芩素、小檗碱、大豆黄酮、药根碱、甘草苷、棕榈碱、葛根素、汉黄芩苷有较强结合活性,提示GQD可能干预ERS诱导的UPR.体内结果显示,GQD可下调糖尿病大鼠 Ire1、Atf6、Atf4、Grp78、caspase-12、Chop的 mRNA转录,下调 GRP78、IRE1 和 PERK及ERS诱导凋亡相关因子ATF4 和CHOP、caspase-12、caspase-9和caspase-3表达,上调XBP1 增强适应性UPR.此外,GQD可升高肝组织钙离子含量,有助于蛋白正确折叠.体外结果显示,GQD可增加衣霉素诱导ERS-HepG2 细胞葡萄糖消耗量且不明显影响细胞活力,增加肝糖原合成,下调 ATF6 和 p-eIF2α(Ser51)、IRE1、PERK 和 GRP78 的表达,下调 p-IRS1(Ser312)和p-JNKs(Thr183/Tyr185)的表达,上调p-PI3Kp85(Tyr607)和p-Akt(Ser473)的表达.研究提示GQD可缓解肝过度ERS,减轻胰岛素抵抗,改善体内外肝糖代谢.

近年来,内质网应激(ERS)和它所诱导的细胞凋亡被认为在慢性疾病、神经退行性疾病、癌症和糖尿病等疾病的病理生理中发挥重要作用.当内质网(ER)正常功能紊乱时,会扰乱细胞内环境,引起ERS,从而激活一系列进化保守的自我保护性信号通路统称为未折叠蛋白质反应(UPR).最初,UPR旨在恢复ER内部平衡,保护细胞存活,但如果这些尝试失败,UPR将转而激活凋亡级联反应,导致细胞凋亡.文章对ERS反应进行介绍,综述了ERS激活跨膜蛋白激酶(IRE1)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子6(ATF6)介导的促存活通路及ERS介导的包括增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、半胱天冬氨酸蛋白12(Caspase12)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)等促细胞凋亡途径的可能机制.

目的 观察疏血通注射液联合西医治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者的临床疗效及对未折叠蛋白反应(UPR)中PERK-ATF4-CHOP通路的影响.方法 将符合纳入标准的70例AECOPD患者随机分为治疗组和对照组,每组35例.对照组给予吸氧、抗感染、解痉平喘、祛痰、营养支持等常规治疗,治疗组在此基础上予疏血通注射液6 mL静脉滴注,每日1次,2组均治疗14 d.统计2组临床疗效,观察2组治疗前后肺功能[第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV1/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1％)]及动脉血气分析[p(O2)、p(CO2)、血液酸碱度(pH)]变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组治疗前后血清葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)水平,采用qRT-PCR法检测2组治疗前后外周血GRP78 mRNA、PERK mRNA、ATF4 mRNA、CHOP mRNA表达水平.结果 治疗组总有效率为91.43％,明显高于对照组的80.00％(P<0.05);治疗后2组FEV1、FVC、FEV1/FVC、FEV1％ 、p(O2)、血pH均有不同程度升高(P均<0.05),p(CO2)均有不同程度降低(P均<0.05),且治疗组改变更明显(P均<0.05);治疗后2组血清GRP78、PERK、ATF4、CHOP水平和GRP78 mRNA、PERK mRNA、ATF4 mRNA、CHOP mRNA表达水平均有不同程度下降(P均<0.05),且治疗组变化更明显(P均<0.05).结论 疏血通注射液联合常规西医治疗AECOPD患者,可一定程度上纠正患者存在的内质网应激状态,从而改善患者肺功能及血气分析,提高临床治疗效果.

目的:探讨内质网相关降解蛋白1 (endoplasmic reticulum correlative protein 1,Derlin-1)在非酒精性脂肪肝组织中的表达情况及其通过对蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK),即内质网应激中未折叠蛋白反应感受蛋白的影响,抑制非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发生机制.方法:通过免疫组织化学染色及Western bolt技术检测NAFLD小鼠肝脏组织中Derlin-1的表达;在HepG2细胞中利用质粒过表达Derlin-1,以Western blot技术检测其对内质网应激信号通路PERK的影响.结果:Derlin1在NAFLD肝组织中表达明显高于正常肝脏组织;过表达Derlin-1能抑制内质网应激信号通路的激活.结论:Derlin1在NAFLD肝组织的高表达提示其可能通过抑制内质网应激中未折叠蛋白反应感受蛋白PERK,减少内质网应激,阻止肝脏细胞脂肪变.

目的:研究G蛋白偶联受体30 (G protein-coupled receptor 30,GPR30)对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡能力的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:将靶向GPR30的shRNA (shRNA-GPR30)或携带有GPR30全基因的慢病毒(LV-GPR30)分别导入子宫内膜癌Ishikawa和KLE细胞中,构建沉默GPR30和过表达GPR30的细胞株,然后用蛋白质印迹法检测转染效率.采用CCK-8法检测沉默或过表达GPR30对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响,采用FCM法检测沉默或过表达GPR30对子宫内膜癌细胞凋亡能力的影响.采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测沉默或过表达GPR30对内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)和内质网应激的未折叠蛋白反应信号通路关键分子蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)、活化转录因子6 (activating transcription factor 6,ATF6)的表达水平变化.结果:GPR30分别在Ishikawa和KLE细胞中被沉默或过表达.沉默GPR30后,子宫内膜癌细胞的增殖能力下降,凋亡率升高(P值均＜0.01);过表达GPR30后,子宫内膜癌细胞的增殖能力增强,凋亡率降低(P值均＜0.01).沉默GPR30可下调子宫内膜癌细胞中GRP78、PERK、IRE1和ATF6的表达水平,过表达GPR30可上调子宫内膜癌中GRP78、PERK、IRE1和ATF6的表达(P值均＜0.01).结论:沉默GPR30可抑制子宫内膜癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡;过表达GPR30可促进子宫内膜癌细胞的增殖能力,并抑制细胞凋亡.推测该机制可能与内质网应激途径的未折叠蛋白反应有关.

[背景]氟咯草酮(FLC)可诱导睾丸支持细胞凋亡,但其具体机制尚未阐明.[目的]通过体内动物及体外细胞系构建FLC染毒模型,探究FLC染毒后小鼠睾丸组织中细胞凋亡以及小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞凋亡和内质网应激活化情况,并通过干预实验探究肌醇需酶1α(IRE1α)-c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在FLC诱导TM4细胞凋亡过程中的作用.[方法]利用C57BL/6雄性小鼠28 d经口染毒3、15、75和375 mg·(kg·d)?1 FLC结束后留取的睾丸标本,通过TUNEL染色观察睾丸组织中细胞凋亡发生情况,通过Western blotting检测睾丸组织中的凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相互作用介质(Bim)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达水平.在体外细胞实验中,使用不同浓度(40、80和160μmol·L?1)的FLC对TM4细胞染毒6 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bim、Bax)及内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化-蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、活化转录因子6(ATF6)、磷酸化-肌醇需酶1α(p-IRE1α)、磷酸化-JNK(p-JNK)]水平.随后使用IRE1α磷酸化抑制剂4μ8C(25、50μmol·L?1)、JNK磷酸化抑制剂SP600125(10、20μmol·L?1)预处理TM4细胞6 h后再使用160μmol·L?1 FLC染毒6 h,采用Western blotting检测凋亡及内质网应激相关蛋白水平,通过CCK-8法检测细胞活力.[结果]雄性C57BL/6小鼠经口染毒FLC 28 d后,睾丸组织TUNEL染色结果显示生精小管间质及基底部有细胞凋亡发生.Bcl-2家族抗凋亡蛋白Bcl-2水平在FLC染毒75、375 mg·(kg·d)?1组中较对照组下降(P<0.05);而促凋亡蛋白Bim水平在FLC染毒75 mg·(kg·d)?1组中,Bax水平在FLC染毒375 mg·(kg·d)?1组中较对照组上升(P<0.05).0、40、80和160μmol·L?1 FLC染毒组的细胞凋亡率分别为2.7％±0.2％、4.8％±1.3％、9.4％±0.3％、13.2％±0.2％,FLC染毒组细胞凋亡率均明显上升(P<0.05).TM4细胞中Bcl-2蛋白水平在160μmol·L?1 FLC染毒时下降(P<0.05),而Bim和Bax蛋白水平在80、160μmol·L?1 FLC染毒时均上升(P<0.05),内质网应激相关蛋白(GRP78、p-PERK、ATF6、p-IRE1α和p-JNK)水平在FLC染毒后均上升(P<0.05)或呈上升趋势.4μ8C(25、50μmol·L?1)和SP600125(10、20μmol·L?1)预处理后,由FLC染毒引起的GRP78、p-IRE1α、p-JNK以及Bim、Bax蛋白表达水平上调幅度降低(P<0.05)或呈降低的趋势;预先使用两种抑制剂处理细胞后,FLC对细胞活力的损伤得到明显缓解(P<0.05)或呈缓解的趋势.[结论]FLC能够诱导小鼠睾丸组织发生细胞凋亡,并且通过激活内质网应激及IRE1α-JNK信号通路诱导TM4细胞凋亡发生.