目的:评价吡法齐明（pyrifazimine，TBI-166）与抗耐药结核病A组药物贝达喹啉（bedaquiline，BDQ）、莫西沙星（moxifloxacin，MFX）及新型抗结核药物德拉马尼（delamanid，DLM）、SQ109、Q203、PBTZ169两药组合在体外及小鼠体内的抗结核活性，为TBI-166联合用药提供依据。方法:本研究自2020年9月至2021年7月。应用棋盘法测定TBI-166与BDQ、MFX、DLM、SQ109、PBTZ169两药组合的相互作用，时间杀菌曲线法评估具有部分协同作用的两药组合的抗结核活性；BALB/c小鼠急性结核病模型评价两药联用组（TBI-166+BDQ、TBI-166+SQ109、TBI-166+PBTZ169、TBI-166+Q203）与单药组（TBI-166、BDQ、SQ109、PBTZ169、Q203）治疗4和8周的抗结核活性，采用独立样本 t检验进行数据分析。 结果:TBI-166与抗结核药物联用后，最低药物浓度（MIC）降至应用单药的6.25%~25.00%，TBI-166分别与BDQ、SQ109、PBTZ169两药联用后，部分抑制浓度指数（FICI）值分别为0.56、0.75、0.75；时间杀菌实验显示TBI-166分别与BDQ、SQ109、PBTZ169两药组合作用于结核分枝杆菌14 d后与单药应用时相比活菌量减少了至少3 log 10 CFU/ml；在小鼠实验中发现BDQ、SQ109和PBTZ169分别与TBI-166组合后与单药组相比肺组织活菌量较少，其中TBI-166+BDQ组小鼠在治疗4周后肺组织培养阴性，小鼠肺内活菌数比BDQ单药组低1.49 log 10CFU（ P<0.01）。 结论:体外及小鼠体内实验揭示TBI-166分别与BDQ、SQ109、PBTZ169联用后均具有协同抗结核活性。

目的:探讨亚胺培南联合常用抗菌药物对bla KPC-2型碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的体外抗菌作用。 方法:选取乐清市人民医院2018年1月至2019年1月分离的6株非重复的经聚合酶链反应和DNA序列确认的bla KPC-2型CRKP菌株，测量其对常用9种抗菌药物的敏感率，采取棋盘稀释法进行亚胺培南联合8种抗菌药物的药物敏感性试验，计算部分抑菌浓度指数（FIC）并评价联合应用效果；通过绘制体外时间-杀菌曲线评估联合用药的杀菌作用。 结果:6株bla KPC-2型CRKP菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、环丙沙星、利福平、头孢噻肟等抗菌药物耐药率为100.00％（6/6），对米诺环素、克拉维酸耐药率为66.67％（4/6），对替加环素耐药率为33.33％（2/6）；亚胺培南联合替加环素抗菌作用较好，对4株起协同作用、2株起相加作用；以菌株KPN2进行亚胺培南联合替加环素治疗的时间-杀菌曲线显示：菌株KPN2在亚胺培南1/2最低抑菌浓度（MIC）与替加环素1/4 MIC在（t+2）时杀菌率>95％，此作用可维持（t+10）h至（t+12）h，亚胺培南联合替加环素对002杀菌率逐步降低，002生长曲线逐渐上升。 结论:体外药物敏感性试验显示，亚胺培南联合替加环素对bla KPC-2型CRKP具有较好协同杀菌作用，可供临床治疗bla KPC-2型CRKP感染患者时参考。

目的:通过体外药物代谢动力学(PK)/药物效应动力学(PD)研究，比较国产和原研替加环素对细菌的抗菌与杀菌效果。方法:利用体外PK自动模拟系统PASS400模拟不同剂量替加环素给药方案(100 mg，1次/d；50 mg，12 h/d；100 mg，12 h/d)，观察国产与原研替加环素对大肠埃希菌标准株(ATCC25922)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌标准株(ATCC BAA-1706)和多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株(AB-16703)时间杀菌曲线以及相关PD参数。应用GraphPad Prism 7统计软件对数据进行分析。结果:在模拟不同给药剂量PK条件下，国产与原研替加环素具有相似的抗菌效果，但均表现较弱的抗菌效果。两者的时间杀菌曲线几乎重叠，最大杀菌量均<2 log，在24 h内，细菌都恢复生长到细菌的生长平台期。在PD参数比较中，原研与国产替加环素(100 mg，1次/12 h)对大肠埃希菌ATCC25922最大杀菌量分别为(-1.101±0.147)lg CFU/mL和(-1.105±0.208)lg CFU/mL；对肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1706最大杀菌量分别为(-1.999±0.187)lg CFU/mL和(-1.865±0.066)lg CFU/mL；对鲍曼不动杆菌AB-16703最大杀菌量分别为(-0.240±0.209)lg CFU/mL和(-0.230±0.187)lg CFU/mL。不同给药方案下，两种药物对三种菌的最大杀菌量、细菌再生至初始菌量时间、24 h杀菌量和杀菌与恢复生长曲线与空白对照曲线面积差比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:替加环素在体外模拟人体药物代谢过程条件下不能表现出良好的抗菌活性；原研与国产替加环素体外PK/PD效果相似。

目的:探讨Halicin对金黄色葡萄球菌的抗菌作用。方法:采用微量肉汤稀释法检测Halicin对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度；通过摇菌培养和稀释菌落计数法检测Halicin对金黄色葡萄球菌的时间-杀菌曲线；通过微量棋盘稀释法检测Halicin与常用抗菌药物的联合抗菌作用；通过结晶紫染色法测定Halicin对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制和清除作用；通过红细胞溶血试验初步检测Halicin对红细胞的毒性；最后，通过小鼠皮肤脓肿模型，取脓肿周围皮肤组织研磨稀释菌落计数。采用 t检验比较Halicin的体内抗菌效果。 结果:Halicin对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用，其最低抑菌浓度为2~4 mg/L。Halicin 16 mg/L处理8 h后，金黄色葡萄球菌平均菌落数下降5.5×10 6 CFU/ml（ t=73， P<0.05），且呈现浓度依赖性。Halicin和氨苄西林联用时，表现为协同抗菌作用，其分级抑菌浓度指数为0.5。Halicin的浓度为4倍最低抑菌浓度时，可以有效抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成，使其生物膜总量（ A570）从（2.89±0.09）减少到（1.35±0.17）（ t=11.12， P<0.05），但对已形成的生物膜无显著清除效果。Halicin对红细胞几乎无溶血活性，即使当Halicin的浓度为128 mg/L，其溶血率仍低于10%。体内实验表明，20 mg/kg Halicin可使细菌数量下降3.0×10 7 CFU/ml。 结论:Halicin对金黄色葡萄球具有较强的抑菌作用且无明显的溶血毒性。

目的:探索盐酸美金刚(memantine hydrochloride, MEM)促进中性粒细胞对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)的杀菌作用并探索其分子机制。 方法:采用不同浓度的MEM与感染MRSA的中性粒细胞共孵育4 h后，取适量菌液涂LB平板培养、计数；收集共孵育后的中性粒细胞检测活性氧生成和中性粒细胞胞外诱捕网的释放情况。建立小鼠MRSA感染模型，给予或不给予MEM处理，收集血液、脾脏、肾脏进行菌落计数及血液中的降钙素原检测。MRSA感染小鼠后，腹腔注射MEM或PBS，记录48 h小鼠存活率，绘制生存曲线。结果:与未加MEM组相比，MEM处理后的混合培养液中MRSA数量显著减少，且在一定浓度范围内，MRSA的存活数随着MEM浓度的升高而减少。此外，MEM能显著促进中性粒细胞产生活性氧以及胞外诱捕网的形成。动物实验显示，MEM组小鼠血清降钙素原浓度显著降低，血液及脏器中的载菌量显著降低，48 h小鼠存活率较PBS组显著升高。结论:MEM能显著增强中性粒细胞对MRSA的杀菌作用，其机制可能是MEM促进了中性粒细胞活性氧和胞外诱捕网的产生。

目的:金黄色葡萄球菌(以下简称"金葡菌")的耐药性已成为感染性疾病治疗中的难题,研究针对多重耐药金葡菌及其生物膜的抗菌药物具有重要的临床价值.本研究将药物重新利用,探讨抗寄生虫药物氯氰碘柳胺对耐甲氧西林金葡菌及其生物膜的抗菌活性.方法:通过微量肉汤稀释实验和纸片扩散实验检测金葡菌对氯氰碘柳胺的敏感性.采用时间-抑菌/杀菌曲线结合平板稀释菌落计数检测氯氰碘柳胺的抑菌效率和杀菌活性;扫描电镜联合荧光探针SYTOX Green和DiSC3(5)研究氯氰碘柳胺对金葡菌的杀菌机制;亚抑菌浓度的氯氰碘柳胺连续作用检测其对金葡菌耐药的影响;96孔板结合结晶紫染色法检测氯氰碘柳胺的抗生物膜活性;CCK-8试剂盒检测氯氰碘柳胺的细胞毒性.结果:氯氰碘柳胺对甲氧西林敏感和耐药金葡菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)均为0.125～1.000 μg/mL.纸片扩散实验发现80 μg的氯氰碘柳胺即可出现抑菌圈,且随着药量增加抑菌圈直径明显增大.亚抑菌浓度(0.031 μg/mL)的氯氰碘柳胺可显著抑制金葡菌的增殖,使细菌浊度从0.26±0.00减少到0.11±0.01(t=16.06,P＜0.001),且随着氯氰碘柳胺浓度的升高,其抑菌活性越强.0.25×MIC的氯氰碘柳胺可抑制金葡菌增殖12 h,1×MIC的氯氰碘柳胺可抑制金葡菌增殖长达24 h以上,且活菌数量随着药物浓度升高而减少.机制研究结果表明氯氰碘柳胺可有效破坏金葡菌细胞膜的完整性,使SYTOX Green和DiSC3(5)的荧光强度明显升高.即使经过亚抑菌浓度氯氰碘柳胺的25 d连续作用,仍未产生耐药性.0.062 5 μg/mL的氯氰碘柳胺即可显著抑制金葡菌生物膜的形成,使其形成量从1.29±0.16减少到0.62±0.04(t=11.62,P＜0.001),且呈现明显的剂量依赖性.2 μg/mL的氯氰碘柳胺还可显著清除已形成的生物膜,使生物膜量从1.62±0.34减少到0.51±0.39(t=4.84.P＜0.01).此外,氯氰碘柳胺的细胞毒性极低,其对肝癌细胞HepG2和正常肝脏细胞LO2的半数抑制浓度均大于64 μg/mL.结论:氯氰碘柳胺对金葡菌及其生物膜具有强抗菌活性且对人体细胞毒性低,有望为金葡菌相关感染提供新的治疗策略.

目的 探讨乙酰唑胺对万古霉素耐药肠球菌(VRE)体内外抗菌活性作用和可能的作用机制.方法 实验菌株为医院临床分离的肠球菌菌株,经鉴定为VRE菌株,分别进行体外和体内抗菌活性研究.采用琼脂平板稀释法测定乙酰唑胺对VRE的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),杀菌曲线实验测定待测菌株的时间杀菌变化曲线,检测胞外碱性磷酸酶(AKP)含量评估对细胞壁的破坏作用,计算相对电导率测定评估细胞膜渗透性.使用临床分离的VRE菌株建立腹膜炎小鼠模型,分为对照组(正常小鼠),模型组(腹膜炎小鼠)和乙酰唑胺组(30 mg/kg/5 h干预),每组10只.干预30 h后统计各组小鼠死亡情况,进行腹膜液、脾脏、肝脏菌落计数,HE染色观察脾脏、肝脏病理改变.结果 乙酰唑胺对VRE的抑菌活性检测显示,MIC和 MBC分别为1.45 mg/L和4.62 mg/L.Time-Kill曲线分析乙酰唑胺杀菌动力学显示,乙酰唑胺杀菌活性与时间和浓度呈正相关,乙酰唑胺浓度越大,细菌死亡率越高,时间越长,杀死的细菌越多.当乙酰唑胺浓度达到16×MIC,作用时间达到12 h时,VRE细菌生长被完全抑制.干预30 h后,对照组小鼠均存活,存活率100％;模型组小鼠7只陆续死亡,存活率30％;乙酰唑胺组小鼠2只出现死亡,存活率80％,存活率明显高于模型组(P＜0.05).相较于对照组,模型组小鼠腹膜液、肝脏、脾脏菌载量均明显提高(P＜0.05);相较于模型组,乙酰唑胺组小鼠腹膜液、肝脏、脾脏菌载量均明显降低(P＜0.05).与对照组比较,1 × MIC组和4×MIC组AKP含量显著升高(P＜0.05);与1×MIC组比较,4×MIC组AKP含量显著升高(P＜0.05),乙酰唑胺对VRE细胞壁的破坏作用呈现剂量依赖.与对照组比较,1×MIC组和4×MIC组电导率显著升高(P＜0.05);与1×MIC组比较,4× MIC组相对电导率显著升高(P＜0.05),乙酰唑胺对VRE细胞渗透性的提高作用呈剂量依赖.结论 乙酰唑胺对VRE具有较好的体内、体外抗菌活性,其作用机制可能与破坏细胞完整性有关.

目的 探究氯喹单独使用及联用传统抗真菌药物对白念珠菌生物膜及其耐药性的改变.方法 采用白念珠菌标准株及耐药株进行实验,使用XTT减低法和棋盘稀释法分别检测氯喹单独使用及联用抗真菌药物后对两种白念珠菌生物膜的抑制作用,绘制时间-杀菌曲线,扫描电镜观察两种白念珠菌生物膜形态.结果 50 μmol/L及以上浓度氯喹对两种白念珠菌生物膜有直接抑制作用,且随着浓度增加,抑制作用增强.氯喹与两性霉素B联用存在协同抑菌作用.氯喹单独使用和联用两性霉素B的时间-杀菌曲线结果显示,白念珠菌在不同时相培养中生长趋势有所不同;形态学观察发现均可降低白念珠菌菌丝和生物膜形成能力.结论 氯喹对白念珠菌生物膜存在直接抑制,可降低白念珠菌生物膜耐药性.氯喹与两性霉素B联用时具有协同作用.

目的:研究香芹酚对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)生物膜的体外抑制作用,及其与美罗培南和左氧氟沙星的联用效果.方法:采用肉汤稀释法检测亚胺培南和美罗培南对10株临床分离肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC),微量肉汤稀释法测定香芹酚的MIC和最低杀菌浓度(MBC);通过生长曲线法检测香芹酚对CRKP生长能力的影响;采用结晶紫染色法测定香芹酚对CRKP生物膜形成能力影响,微量肉汤稀释法测定最低抑制生物膜浓度(MBIC)和最低清除生物膜浓度(MBEC);采用微量棋盘法测定联合抗生物被膜分数(FBICs).结果:香芹酚对2株CRKP的MIC和MBC分别为156和313 μg·mL-1,香芹酚的MBIC和MBEC分别为313和1250 μg·mL-1,明显降低CRKP1的生长能力和生物膜形成能力,与美罗培南和左氧氟沙星的FBIC分别为0.31和0.37.结论:香芹酚可以抑制CRKP生长和生物膜的生成,与美罗培南和左氧氟沙星联合用药有协同抑制CRKP生物膜作用,为治疗CRKP感染提供新的思路.

目的 头孢他啶/阿维巴坦(CZA)是治疗碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌(CRPA)的一种有效的替代抗生素,在临床上被广泛应用,然而CZA耐药CRPA菌株的出现使得治疗铜绿假单胞菌感染的难度不断增加.本研究旨在通过体外时间杀菌分析,探讨多黏菌素(COL)对携带不同碳青霉烯耐药基因的CZA耐药铜绿假单胞菌菌株的体外杀菌活性,为铜绿假单胞菌感染的临床治疗提供科学依据.方法 从浙江省的一家三甲医院收集了CZA耐药的铜绿假单胞菌菌株.通过聚合酶链反应(PCR)和全基因组测序筛选了携带不同碳青霉烯耐药基因的5株代表性铜绿假单胞菌菌株,包括携带blaKPC-2的PA4696、携带blaKPC-90的PA2207、携带blaKPC-33的PA1308、携带blaVIM的PA2070、携带blaIMP-45的PA6227.通过微量肉汤稀释法确认了实验菌株的抗生素敏感性.对COL敏感的菌株进行重复的时间杀菌实验.结果 5株CRPA菌株均对CZA耐药(MIC≥16/4 mg/L),对COL敏感(MIC≤2 mg/L);其中携带blaIMP-45的菌株PA6227表现出特殊的药敏表型(ISMR),对亚胺培南(IPM)敏感(MIC=2 mg/L)而对美罗培南(MEM)(MIC=128 mg/L)等其他碳青霉烯类药物耐药.时间杀菌曲线显示,5株CZA耐药的铜绿假单胞菌菌株在前2～8 h被不同浓度的COL完全抑制,但随后恢复生长.结论 COL对CZA耐药的CRPA菌株具有体外杀菌活性,但不能单独使用.不同类型的碳青霉烯耐药基因会影响CZA的作用效果,但与COL的杀菌活性无关,携带不同碳青霉烯耐药基因的分离株均在不同时间恢复生长.在治疗铜绿假单胞菌感染时,可以调整给药间隔或药物浓度,以维持COL的浓度,从而获得更好的治疗效果.同时应注意具有ISMR这一特殊药敏表型的CRPA在临床上的出现,避免抗生素的不合理应用.