目的 建立基于TaqMan探针的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)E301R基因荧光定量PCR(fluo-rescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测方法,并进行验证,以期应用于临床样本中ASFV的检测.方法 通过对ASFVE301R基因序列进行分析,选择基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针.PCR扩增E301R基因片段,克隆至pCAGGS载体,构建质粒标准品,建立基于TaqMan探针的qPCR检测方法,并验证方法的线性范围、精密性、特异性、敏感性及准确性.采用建立的方法检测92份临床样本,并与商品化ASFV荧光PCR试剂盒检测结果进行比较.另采用建立的方法对E301R基因转录动力学进行分析.结果 质粒标准品在1.6×(101～108)拷贝/μL范围内,与Ct呈良好的线性关系,线性回归方程为:y=-3.239 x+40.774,R2=0.994;重复性及中间精密性验证CV均＜2％;除 ASFV外,猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and re-spiratory syndrome virus,PRRSV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)及猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)均未出现扩增曲线;最低可稳定检出1.6× 101拷贝/μL的质粒标准品;浓度为1.6× 102和1.6× 101拷贝/μL质粒标准品的加标回收率在90％～110％之间.建立的方法与商品化ASFV荧光PCR试剂盒对92份临床样本检测结果的符合率为96.7％(Kappa=0.932,P=1.000).E301R基因可能为ASFV感染的中期转录基因.结论 建立的基于TaqMan探针的qPCR检测方法具有良好的精密性、特异性、敏感性及准确性,可用于临床样本中ASFV的检测.

1统计研究设计:应交代统计研究设计的名称和主要做法.如调查设计(分为前瞻性、回顾性还是横断面调查研究)、实验设计(应交代具体的设计类型,如自身配对设计、成组设计、交叉设计、析因设计、正交设计等)、临床试验设计(应交代属于第几期临床试验,采用了何种盲法措施等);主要做法应围绕4个基本原则(重复、随机、对照、均衡)概要说明,尤其要交代如何控制重要非试验因素的干扰和影响.

目的:优选菟丝子酒炙炮制工艺,为规范酒菟丝子炮制工艺提供参考.方法:基于L9(34)正交试验设计,以饮片外观性状、金丝桃苷含量、总黄酮含量、醇溶性浸出物含量为指标,以加酒量(A)、闷润时间(B)、炒制温度(C)、炒制时间(D)为考察因素,采用层次分析法(AHP)结合熵权法的组合赋权方式计算综合评分,利用逼近理想解排序(TOPSIS)模型筛选出酒菟丝子炮制的最佳工艺参数并进行工艺验证.结果:筛选出最优炮制工艺为生药材加10％黄酒,闷润6 h,炒炙温度为300 ℃,炒炙10 min.结论:运用正交试验设计-组合赋权TOPSIS法优选菟丝子酒炙工艺,结果简便、准确、可行.

目的:构建靶向HLA-A2且表达PDL1的嵌合抗原受体修饰的调节性T细胞（CAR-Treg），探讨CAR-Treg对CD4+ T细胞的抑制作用。方法:设计并合成CAR基因，通过慢病毒载体质粒构建靶向HLA-A2且表达PDL1的CAR-Treg核心质粒，通过BamHI/EcoRI双酶切鉴定，应用流式细胞仪检测转染CAR质粒后T细胞的CAR表达情况；通过抑制HLA-A2+/-乳腺癌细胞的增殖实验，证实CAR能够成功靶向HLA-A2靶点；后续通过流式细胞仪检测Foxp3、PDL1、CD25、ICOS、CTLA4等与Treg细胞功能相关的标志，并联合细胞代谢分析及体外抑制CD4+ T细胞增殖实验，验证CAR-Treg抑制CD4+ T细胞的能力。结果:双酶切鉴定结果显示，靶向HLA-A2的CAR质粒构建成功，流式细胞仪检测CAR-T/CAR-Treg细胞均证实细胞表面有HLA-A2 CAR稳定表达。HLA-A2 CAR-T细胞与MCF-7（HLA-A2+）乳腺癌细胞共同培养，证实表达HLA-A2的CAR-T细胞能够成功识别HLA-A2靶点。流式细胞检测显示CAR-Treg明显表达Foxp3和PDL1，细胞增殖数量及传代数明显增加。细胞代谢分析显示，CAR-Treg表现出比普通Treg细胞更高的基础细胞耗氧率，CAR-Treg更依赖于脂肪酸氧化代谢。细胞增殖抑制实验显示，CAR-Treg能在体外高效地抑制CD4+ T细胞增殖。结论:成功构建靶向HLA-A2且表达PDL1的CAR-Treg，能在体外高效抑制CD4+ T细胞增殖，为后续的动物体内实验提供了实验基础。

1 统计研究设计:应交代统计研究设计的名称和主要做法.如调查设计(分为前瞻性、回顾性还是横断面调查研究)、实验设计(应交代具体的设计类型,如自身配对设计、成组设计、交叉设计、析因设计、正交设计等)、临床试验设计(应交代属于第几期临床试验,采用了何种盲法措施等);主要做法应围绕4个基本原则(重复、随机、对照、均衡)概要说明,尤其要交代如何控制重要非试验因素的干扰和影响.

该研究概述血管内冲击波导管的临床应用、技术特点和生产工艺,结合MAUDE数据库相关产品的不良事件统计数据,对血管内冲击波导管的不良事件发生原因和产品失效模式进行分析,梳理产品存在的风险点.基于医疗器械全生命周期管理的方法,结合产品风险和医疗器械生产质量管理规范及附录要求,探讨性地提出此类产品在设计与开发、制造、使用阶段的关键控制点.

在"重组DNA分子的基本工具"一节教学中,创建工程学情境,以科学前沿进展为支架,选择"制备转基因荧光大肠杆菌"为主线,驱动课堂教学,引导学生基于情境,主动构建概念模型、物理模型等,转变学习方式,在分析问题和解决问题的过程中,提升生物学学科核心素养;基于情境-模型建构的教学,能辅助学习者逐步掌握知识,最终完成思维进阶,实现深度学习.

1.统计研究设计:应交代统计研究设计的名称和主要做法.如调查设计(分为前瞻性、回顾性还是横断面调查研究),实验研究(应交代具体的设计类型,如自身配对设计、成组设计、交叉设计、析因设计、正交设计等),临床试验设计(应交代属于第几期临床试验,采用了何种盲法措施等);主要做法应围绕4个基本原则(重复、随机、对照、均衡)概要说明,尤其要交代如何控制重要非试验因素的干扰和影响.

目的 整合患者报告结局(patient-reported outcomes,PRO)的缺失值问题及对策,为尽可能降低 PRO数据缺失所带来的影响提供解决思路和参考.方法 检索国内外相关文献,从数据缺失的原因及其影响、可行的预防措施、对缺失值的处理及规范报道等几个方面归纳PRO的缺失值问题.结果 对缺失数据产生原因及其严重影响的充分认识,严谨的研究设计,规范的实施流程等可降低PRO数据缺失的风险;对无法避免的缺失数据进行合理处理和分析,并透明报告,也能得出可信的结论.结论 随着科学研究的不断发展,PRO数据应被更合理、更有效地利用.

目的 探讨经皮肾镜碎石术(PCNL)患者出院准备度对出院后结局指标的影响.方法 本研究为纵向研究设计,连续抽取2023年3月至12月在西南医科大学附属医院泌尿外科行PCNL的193例住院患者.出院当天调查患者一般资料、出院准备度、出院指导质量、社会支持;出院后1个月随访出院后结局指标,包括是否微信群咨询、电话咨询、非计划门诊和再入院.结果 181例患者完成基线调查;159例患者完成随访调查.181例患者出院准备度总分为[180.00(151.00,201.00)]分;181例患者中27.1％(49/181)的患者未做好出院准备.单因素分析显示,不同文化程度、家庭人均月收入、通道数量的PCNL患者出院准备度得分比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Spearman相关性分析显示,PCNL患者出院准备度与出院指导质量、社会支持均呈正相关(r＞0,P＜0.05);多元线性回归分析显示,文化程度、通道数量及出院指导质量是PCNL患者出院准备度的影响因素(P＜0.05).159例患者中28.9％(46/159)的患者未做好出院准备.出院后1个月内,做好出院准备组微信群咨询、电话咨询、非计划门诊率低于未做好出院准备组患者(P＜0.05).结论 护理人员应根据患者的文化程度和通道数量提供个性化的健康教育,提升出院指导质量并提高患者出院准备度,以尽可能地减少患者出院后的困惑与症状不确定性,降低非计划就诊率.