目的 研究枸骨不同药用部位的石蜡包埋切片和粉末显微构造,为枸骨资源的综合开发利用奠定基础.方法 采用石蜡切片法对枸骨不同药用部位进行切片,采用显微技术观察组织构造及显微特征.结果 描述了枸骨叶、树皮、果实、根的显微特征,绘制了横切面图和粉末显微图.结论 枸骨各部位的显微特征均较明显,其中,枸骨树皮、种子、根的显微特征属首次报道.

患者 男,91岁.2年前发现前列腺增生.6 d前出现全程肉眼血尿,伴腹胀、腹痛、排尿不尽、重度贫血、低血压.影像学检查:盆腔MRI示前列腺中央腺体明显增大,呈分叶状,腺体右份见一较大结节突入膀胱,压迫膀胱颈,周围见短T2包膜(图1).病变在T1WI上呈较均匀等信号(图2),DWI (b=1 000 s/mm2)见中度扩散受限(图3).盆腔内、腹股沟区多枚肿大淋巴结.抑脂T2WI上右侧髋臼、坐骨结节见斑片状高信号影,扩散受限.增强T1WI病变大部明显强化,伴不规则无强化区(图4).MRS分别于病变区和对侧测量胆碱(choline、Cho)、枸橼酸盐(citrate、Ci)、肌酸(creatine、Cr),前者Cho、Cr较后者升高,Ci无明显下降,且前者Cho、Cr高于Ci,后者反之(图5,6).考虑:前列腺癌(表现不典型).

本实验以枸骨叶为研究对象,经75％乙醇浸提,用极性递增的溶剂分离制备获得枸骨叶提取物,测定了枸骨叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用,并使用1,l-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrzyl,DPPH)自由基清除的方法检测了枸骨叶提取物抗氧化能力.实验结果表明:枸骨叶三氯甲烷和正丁醇提取物对酪氨酸酶具有较强的抑制作用,IC50值分别达到0.414 mg/mL和0.667 mg/mL,均为混合型可逆抑制类型.同时,二者均具有一定的清除DPPH自由基的能力,IC50值分别为0.132 mg/mL和0.039 mg/mL,表明枸骨叶提取物同时具有抑制酪氨酸酶活性和抗氧化的功效,在美容、药物及食品等行业具有潜在的应用价值.

目的:建立华中枸骨叶药材中6个绿原酸类指标性成分的含量测定方法.方法:采用UPLC法,色谱柱为Thermo Syncromis C18色谱柱(100 mm×3 mm,1.7 μm),流动相为0.2％甲酸水溶液(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱,流速为0.40 mL· min-1,检测波长为327 nm,柱温为40℃.结果:10 min内新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C等6个指标性成分分离度良好,且在各自的检测范围内与峰面积积分值呈现良好的线性关系,其相关系数均大于0.9999,加样回收率为97.77％～98.37％.结论:所建立的含量测定方法快速、简便、准确度高且重现性好,适用于华中枸骨叶药材的含量测定与质量控制.

为探究石灰岩山地淡竹林植物养分分布与吸收特征,辨析其与群落功能地位的关系,该研究通过测定江西瑞昌石灰岩山地淡竹林建群种淡竹(Phyllostachys glauca),伴生种胡颓子(Elaeagnus pungens)、油茶(Camellia oleifera)和枸骨(Ilex cornuta)不同器官9种元素含量,对比分析了元素分布与吸收特征.结果表明:(1)淡竹各器官大量元素(N、P、K、Ca、Mg)分布规律为叶>根>茎,微量元素(Fe、Mn、Zn、Cu)分布规律为根>叶>茎;其叶中N[(18.82±1.16)g·kg-1]、P[(1.17±0.19)g·kg-1]、Fe[(1.01±0.09)g·kg-1]元素含量高;各器官的元素生物吸收系数大小顺序与元素含量一致.(2)伴生种植物大量元素分布与生物吸收系数顺序均为叶>茎>根.微量元素在器官的分布顺序因物种而异,油茶叶的Mn含量最高,为(1.88±0.18)g·kg-1,而Ca、Mg、Zn元素在枸骨茎中富集最多.(3)群落上层植物淡竹和光照条件较好的胡颓子各元素含量及分配规律相近,而林下植物油茶和枸骨元素含量与之相比相差较大.研究认为,淡竹林建群种和伴生种在元素分布和吸收特征的差异与群落光照条件密切相关.

法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是三萜皂苷生物合途径的一个关键酶,为研究FPS基因在枸骨中的功能,该研究采用PCR技术将一个FPS基因的cDNA序列从枸骨叶中分离出来,并命名为IcFPS1.结果 表明:根据测序结果分析发现扩增获得的IcFPS1基因cDNA长度为1 591 bp,包含一个完整的开放阅读框,大小为1 029 bp.通过序列分析发现枸骨IcFPS1基因编码342个氨基酸,分子量和等电点分别为39.58 kDa和5.18.通过理化性质预测分析发现IcFPS1蛋白不含信号肽,不含有跨膜区域,该IcFPS1蛋白为亲水性蛋白质.通过序列多重比对发现IcFPS1蛋白质与其他植物的FPS蛋白质高度同源,有共同的保守区域和氨基酸序列,其中与西洋参FPS序列的相似性高达89％.通过系统进化树分析发现枸骨FPS蛋白与同属于被子植物的五加科植物FPS蛋白亲缘关系较近,说明FPS基因在进化过程中相对比较保守.根据蛋白调控网络预测分析结果发现该蛋白可能与IPP1、IPP2、GGPS3、GGPS6和ERA1相互作用,参与类异戊二烯的合成代谢过程.通过实时荧光定量PCR分析发现IcFPS1基因在枸骨各个组织部位中均有表达,其中在枸骨根中表达量最高,在茎和雌花中表达量最低.

目的 建立HPLC同时测定枸骨叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C 10种多酚类成分含量的方法.方法 采用YMC-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.2％磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长为320 nm;柱温:40℃;流速:1.0 mL·min-1;进样量:10μL.结果 10种多酚类成分的分离效果良好,质量浓度分别在8.19～163.80、3.20～64.00、2.76～55.20、2.31～46.20、4.33～86.60、4.91～98.20、3.03～60.60、2.88～57.60、2.48～49.60、5.09～101.80 μg· mL-1范围内呈良好的线性关系(r＞0.999 6),平均加样回收率(n=6)在97.37％～ 105.58％之间,RSD≤3.72％.结论 该方法快速、准确、重复性好,可用于同时测定枸骨叶中10种多酚类成分的含量,为枸骨叶药材的质量控制提供科学依据.

目的 优化华中枸骨叶总黄酮超声提取工艺,并评价其抑菌作用.方法 在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、液料比、提取时间作为影响因素,总黄酮含有量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化提取工艺.然后,采用牛津杯法测定抑菌作用.结果 最佳条件为提取温度25℃,超声功率480W,乙醇体积分数55％,液料比25∶1,提取时间30 min,提取次数2次,总黄酮含有量57.81 mg/g.提取液(总黄酮质量浓度50 mg/mL)对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌均有抑制作用,并呈浓度依赖性.结论 该方法稳定可靠,可用于超声提取具有广谱抑菌作用的华中枸骨叶总黄酮.

目的:研究枸骨叶水提物(ICAE)对高脂饮食(HFD)小鼠肥胖的预防作用及对脂肪分化的影响.方法:本研究采用HFD诱导小鼠肥胖,同时灌胃给予ICAE,以奥利司他(orlistat)为阳性对照药.39只昆明雄性小鼠分成4组,包括对照组(n=10)、肥胖模型组(n=9)、orlistat治疗组(n=10)和ICAE治疗组(n=10).以体重、腹内和皮下脂肪含量、肝重以及血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平为指标,观察ICAE对肥胖的预防作用;在实验第5周,连续5 d监测ICAE对小鼠24 h平均摄食量的影响;HE染色观察ICAE对脂肪组织的影响.分离和培养大鼠附睾来源的前脂肪细胞,尼罗红染色观察ICAE对分化脂肪细胞内脂滴形态的影响,Western blot法检测ICAE对细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂滴包被蛋白1(Plin1)及激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白表达的影响.结果:ICAE可以显著抑制HFD引起的小鼠体重、腹内和皮下脂肪含量以及肝重的增加(P＜0. 01),并且显著降低血清TC和TG水平(P＜0. 01),但是对摄食量无显著影响;HE染色显示,ICAE能够显著减少HFD引起的白色脂肪细胞肥大.此外,在原代培养的大鼠分化脂肪细胞中,ICAE可以显著抑制细胞内脂滴的积累,并且显著下调脂肪分化关键转录因子PPARγ以及脂肪分化标志物Plin1和HSL的蛋白水平(P＜0. 01).结论:ICAE对HFD诱导的小鼠肥胖具有预防作用,但对摄食量无明显影响;ICAE可以显著抑制脂肪分化过程,此作用可能与下调PPARγ的蛋白表达有关.

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定枸骨叶中长梗冬青苷、27-p-Coumaroyloxy ursolic acid、3β-Hydroxyurs-11-en-28,13β-olide和乌发醇的定量分析方法,并观察各化合物在不同采收时期的含量差异.方法 采用HPLC法对枸骨叶中4种三萜类成分进行含量测定.色谱柱:YMC-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-0.4％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:205 nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1.结果 枸骨叶中4种三萜类化合物均有良好的分离度,长梗冬青苷、27-p-Coumaroyloxy ursolic acid、3β-Hydroxyurs-11-en-28,13β-olide和乌发醇分别在54.4～1740μg·mL-1(r=0.9997)、47.2～755.2μg·mL-1(r=0.9999)、45.2～867.84μg·mL-1(r=0.9997)、31.2～998.4μg·mL-1(r=0.9998)范围内呈现较好的线性关系,平均加样回收率在99.85％～101.74％之间,RSD均小于3％(n=6).结论 该方法简单准确,具有良好的重复性和稳定性,适用于测定枸骨叶中4种三萜类成分的含量,可为枸骨叶的质量控制提供科学依据.不同采收时期枸骨叶中4种三萜类成分含量存在一定差异.