柑橘大实蝇Bactrocera minax(Enderlein),是柑橘的重要害虫.本文基于光学显微镜、扫描电镜、石蜡切片观察,对柑橘大实蝇的内生殖系统形态结构进行研究.结果表明,柑橘大实蝇雌虫内生殖系统主要由卵巢、侧输卵管、中输卵管、受精囊、附腺、前生殖腔(包含布氏交配囊、桑葚腺、生殖腔片)、后生殖腔(阴道和产卵针)组成.雄虫内生殖系统主要由精巢、精泵、输精管、附腺、输入射精管、输出射精管、后附腺和阳茎组成.其雌虫有泄殖腔,位于产卵针前端稍后,雄虫无泄殖腔.雌虫前生殖腔表面被2对肌肉包裹,内部的布氏交配囊、桑葚腺和生殖腔片不易被观察.精泵是一个淡黄色球体,由射精突(精泵内骨骼)、肌纤维(肌肉)、射精囊组成.柑橘大实蝇的内生殖形系统形态结构或组织经过进化,从而适应其伪产卵器的运动、交配、产卵等行为机制.为理解昆虫繁殖生理、进化和多样性,以及昆虫的产卵、交配和代谢物排泄等行为机制提供理论基础.

为探明影响柑橘大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)成虫取食偏好的因素,本文研究了其对不同颜色和糖类物质的选择及其嗅觉反应.结果表明:柑橘大实蝇成虫明显偏好黄色和橙色基质的食物,对绿、白、蓝、黑、红色食物趋性较弱;对不同糖类的选择顺序是:红糖>蜂蜜>蔗糖和白糖;不同采集地间和不同性别间的柑橘大实蝇对颜色、糖类物质的选择差异不显著.嗅觉行为测试结果,柑橘大实蝇雌雄虫对所测试几种糖的气味均表现明显趋性,其中,雌虫对红糖和蜂蜜气味的嗅觉反应比雄虫更敏感.研究结果可以为柑橘大实蝇成虫食诱剂的研制和诱捕器的设计提供重要参考依据.

柑橘大实蝇Bactrocera minax (Enderlein) 是为害柑橘类果实的毁灭性害虫.本研究采用顶空捕集法和气相色谱-质谱联用技术,对中国板栗挥发物进行了初步鉴定,并利用Y型嗅觉仪测定了1日龄和3日龄柑橘大实蝇雌、雄成虫对3种不同处理中国板栗和7种挥发性化合物的选择行为反应.结果表明中国板栗对柑橘大实蝇成虫具有极显著的诱引作用.中国板栗挥发物中含有26种化学成分,主要为一些芳香烃类、酸类、醛类、酮类、醇类、萜烯类、酯类和胺类化合物.柠檬烯、异丁醛、α-蒎烯、苯乙酸甲酯对柑橘大实蝇成虫表现出显著的诱引作用,乙偶姻和戊醛对柑橘大实蝇成虫表现出显著的驱避作用.结果进一步表明柑橘大实蝇成虫的嗅觉行为反应与化合物的浓度和成虫的日龄及性别有关,这为柑橘大实蝇成虫植物源引诱剂的开发和应用提供了一定的理论依据.

[目的]证实并探明柑橘大实蝇Bactrocera minax成虫在中国板栗Castanea mollissima雄花花序上的取食行为,从而为柑橘大实蝇的非化学防控提供理论依据.[方法]采用录像技术对柑橘大实蝇成虫在中国板栗雄花花序上的行为活动过程进行跟踪观察和分析.[结果]柑橘大实蝇成虫在中国板栗雄花花序上的取食行为分为爬行、取食、梳理和静息4个阶段,成虫的取食行为没有固定次序,除无法从静息阶段直接到取食阶段外,成虫可从爬行、取食、梳理和静息4个阶段中的任一阶段随意转入另一阶段.成虫取食行为各个阶段的频次占比由高到低排列顺序为:爬行＞取食＞梳理＞静息.静息阶段平均耗时显著超过取食、梳理和爬行阶段;取食、梳理和爬行阶段之间的平均耗时无显著差异.柑橘大实蝇雌成虫与雄成虫之间,各个阶段频次占比和平均耗时均无显著差异.[结论]结果证实柑橘大实蝇雌雄成虫在中国板栗雄花花序上存在取食行为.

[目的]昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)与嗅觉识别密切相关,在触角感受器淋巴液内运输外界的脂溶性气味分子顺利到达嗅觉受体过程中起着关键的作用.本研究对柑橘大实蝇Bactrocera minax的气味结合蛋白基因进行了克隆和表达分析,旨在更好地了解气味结合蛋白在柑橘大实蝇嗅觉识别中的作用及为进一步研究柑橘大实蝇嗅觉传递的分子机制奠定基础.[方法]利用RT-PCR和RACE技术克隆柑橘大实蝇的气味结合蛋白基因,并进行生物信息学分析;构建重组表达载体pET28a(+)-BminOBP25,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE及Western blotting鉴定重组表达蛋白;采用荧光定量PCR检测该基因在柑橘大实蝇成虫不同组织中的表达.[结果]克隆获得柑橘大实蝇气味结合蛋白基因的cDNA全长序列,命名为BminOBP25(GenBank登录号:MH181875).测序结果表明,BminOBP25开放阅读框全长447 bp,编码148个氨基酸,预测分子量为17.5 kD,编码序列具有OBPs典型的6个保守半胱氨酸和6个α螺旋区域特征.在IPTG诱导下目标蛋白以6×His标签融合蛋白的形式在宿主菌中得到稳定表达.荧光定量PCR分析表明,BminOBP25 mRNA在成虫触角、头(去除触角)、胸、腹、足、翅和产卵器中均有表达,其中在触角、头(去除触角)、足和产卵器中表达量较高.[结论]BminOBP25在柑橘大实蝇成虫触角、头、足和产卵器中具有高转录活性,提示该基因在非嗅觉组织中可能也具有生理功能,特别是可能在昆虫的取食与产卵地选择过程中起重要作用,其功能还需深入研究.本研究实现了BminOBP25基因的原核表达,为深入研究BminOBP25基因的功能奠定基础.

[目的]通过比较柑橘大实蝇Bactrocera minax蛹滞育期与滞育前和滞育后以及滞育蛹与非滞育蛹体内海藻糖和葡萄糖含量的变化、海藻糖合成代谢途径中关键酶的活力变化以及关键酶基因的表达量变化,明确蛹滞育期间海藻糖合成代谢途径中关键酶对海藻糖含量的调控.[方法]利用分光光度法检测柑橘大实蝇滞育前(1日龄蛹)、滞育期(30,60和90日龄蛹)以及滞育后(120和150日龄蛹)蛹体内海藻糖与葡萄糖含量的变化,以及海藻糖合成代谢途径中的海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)、海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(TPP)和海藻糖酶(Tre)活力的变化;利用实时定量荧光PCR (qPCR)检测TPS,TPPB,TPPC-1,TPPC-2和Tre-1基因表达量的变化.向1日龄蛹体内注射20-羟基蜕皮酮(20E)作为处理(以注射10％乙醇为对照),分别于注射后1和30 d比较处理组与对照组蛹体内海藻糖与葡萄糖含量、关键酶活力以及上述基因表达量的差异.[结果]柑橘大实蝇蛹进入滞育后,海藻糖含量显著升高,葡萄糖含量无显著变化;TPS和TPP的酶活力以及TPS,TPPC-1和TPPC-2表达量在化蛹后逐渐升高,于滞育期达到最高水平,维持至羽化前显著下降;TPPB表达量在整个蛹期无显著差异;Tre酶活力以及Tre-1表达量在化蛹后逐渐升高,于滞育早期达到最高水平,随后显著下降,羽化前再次显著上升.注射20E后1d,与对照组相比,处理组蛹体内海藻糖与葡萄糖含量、关键酶(TPS,TPP和Tre)活力以及TPS,TPPC-2和Tre-1表达量无显著变化,TPPB表达量显著下降,TPPC-1表达量显著上升;注射后30 d,与对照组滞育蛹相比,处理组非滞育蛹海藻糖含量显著上升,葡萄糖含量、TPS和Tre酶活力、TPS和Tre-1表达量显著下降,TPP酶活力以及TPPB和TPPC-2表达量无显著差异.[结论]柑橘大实蝇蛹体内海藻糖的含量在合成代谢途径中关键酶的调控下,随着滞育状态发生变化,表明海藻糖与滞育之间存在密切的关系,但其作用机理仍待进一步研究.

为明确广东橘园生境的实蝇种类及优势种的季节动态,2016年在肇庆市怀集县、韶关市始兴县和潮州市潮安区各选择一处橘园开展实蝇监测并分析实蝇昆虫的多样性特征及优势种的季节动态.本次监测共诱集到7属15种实蝇.其中,怀集县橘园的物种丰富度最高,所获得的l5种实蝇在该地均有发现,橘小实蝇Bactroceradorsalis为怀集县橘园的优势种.此外,值得关注的是,怀集县橘园还监测到柑橘专性害虫蜜柑大实蝇B.tsuneonis,蜜柑大实蝇的此次发现在广东省为首次报道.始兴县橘园监测到实蝇7种,其多样性、优势度和均匀度指数在3个橘园中最高,南瓜实蝇Bactrocera tau和橘小实蝇是该橘园的优势种.潮安区橘园监测到5种,其所有多样性指数在3个橘园中最低,橘小实蝇占绝对优势.监测结果表明橘小实蝇、南瓜实蝇、瓜实蝇和具条实蝇是广东橘园生境的常见种.橘小实蝇与南瓜实蝇是橘园生境的优势种,橘小实蝇与南瓜实蝇的成虫全年均可发生.

柑橘大实蝇是柑橘上的重要害虫.本文分别利用Y型嗅觉仪和饲喂法测定了柑橘大实蝇成虫对12种杀虫剂的选择行为和击倒作用,以期筛选出田间防治柑橘大实蝇的高效农药,并为研发其诱杀剂提供理论依据.结果 表明:12种杀虫剂中,吡虫啉、阿维菌素对雌成虫具有极显著的驱避作用;多杀霉素、丁硫克百威、阿维菌素、氟铃脲对雄成虫具有极显著的驱避作用;多杀霉素、毒死蜱、噻嗪酮对雌成虫具有显著的驱避作用;啶虫脒、噻虫嗪、乙酰甲胺磷、高效氯氟氰菊酯和高效氯氰菊酯对柑橘大实蝇雌雄成虫既无驱避作用也无引诱作用.同种药剂对柑橘大实蝇雌雄成虫的击倒时间无显著差异,不同药剂间对柑橘大实蝇成虫的击倒时间有显著差异,其中啶虫脒的击倒时间(KD50＜1 min)最短.综合考虑杀虫剂对柑橘大实蝇选择行为的影响及击倒作用,认为啶虫脒更适宜作为柑橘大实蝇诱杀剂中的杀虫剂.

[目的]探明危害我国柑橘的实蝇种类以及柑橘大实蝇Bactrocera minax不同地理种群和不同寄主种群的遗传多样性.[方法]利用mtDNA COI基因对危害柑橘的果实蝇进行种类鉴定,采用MEGA软件对其中28个地理种群的535头果实蝇COI基因片段(约505 bp)序列进行比对,分析种间及种内遗传距离,构建系统发育树.使用DnaSP软件分析柑橘大实蝇不同地理种群和不同寄主种群的遗传多样性.[结果]从柑橘虫果内共鉴定出4种实蝇,分别为柑橘大实蝇B.minax、桔小实蝇B.dorsalis、蜜柑大实蝇B.tsuneonis和瑞丽果实蝇B.ruiliensis.这4种实蝇的种间遗传距离为0.0264～0.2410,种内遗传距离为0.0000～0.0140,种间与种内遗传距离没有重叠区域.单个柑橘虫果内一般仅有1种实蝇,极个别柑橘果实可同时被两种实蝇危害(4/43);在这些为害柑橘的实蝇种类中,以柑橘大实蝇的个体数量比例最大,占90.70％.柑橘大实蝇地理种群遗传多样性高,28个种群共有17个单倍型.[结论]柑橘大实蝇是所调查地区柑橘实蝇的绝对优势种,其种群遗传分化程度较高,扩散危害风险大.本研究结果对柑橘果实蝇类的监测和防控具有重要意义.

柑橘大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)是一种为害柑橘类果实的毁灭性害虫.评价亚致死浓度的丁硫克百威和阿维菌素对其成虫运动行为的影响,可为预防和控制该害虫提供理论基础.本文通过不同亚致死浓度的丁硫克百威和阿维菌素处理柑橘大实蝇成虫,并于药后1h和6h检测其起飞率、水平和垂直爬行距离.结果表明,与空白对照组(CK)相比,LC5、LC10丁硫克百威处理后1 h的雌、雄虫起飞率分别显著降低66.7％、50.0％、43.3％和40.0％;LC5丁硫克百威处理的成虫垂直爬行距离也明显降低34.6％,而LC10丁硫克百威处理的成虫水平爬行距离却显著增加24.7％.与空白对照组(CK)相比,LC5、LC10、LC25阿维菌素的处理后1 h的柑橘大实蝇雌、雄成虫起飞率分别显著降低33.3％、23.3％、23.3％、33.3％、53.3％和46.7％;LC5和LC25阿维菌素处理的成虫水平爬行距离分别明显降低24.2％和38.0％.LC10和LC25阿维菌素处理的成虫垂直爬行距离也分别明显降低25.2％和84.4％.结果还表明,丁硫克百威和阿维菌素对柑橘大实蝇成虫的水平爬行能力、垂直爬行能力和起飞能力的亚致死效应与其浓度相关.丁硫克百威的亚致死浓度处理对柑橘大实蝇成虫水平爬行能力的影响存在性别差异,而阿维菌素的亚致死浓度处理对该成虫起飞能力和水平爬行能力的影响亦存在性别差异.此外,丁硫克百威和阿维菌素对柑橘大实蝇成虫水平爬行能力和垂直爬行能力的亚致死效应与药剂处理后时间长短相关.