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血浆hnRNP A2/B1与Aβ 42和P-tau在术前诊断轻度认知功能障碍中的应用价值
编辑人员丨2天前
目的:探讨血浆核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear rib nucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)、β淀粉样蛋白42(amyloid-β 42,Aβ 42)及磷酸化tau 蛋白(phosphorylated tau protein,P-tau)水平在术前诊断老年患者轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)的应用价值。 方法:纳入2020年6月至2021年3月于天津市第三中心医院行择期手术患者200例,年龄65~80岁。根据国际MCI工作组标准及欧洲阿尔茨海默病联合会工作组标准将患者分为MCI组( n=100)与对照组( n=100),每组男58例、女42例。术前检测患者血浆hnRNP A2/B1、Aβ 42及P-tau水平,计算其诊断MCI的灵敏度、特异度及准确度,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估各指标的诊断价值。 结果:MCI组血浆hnRNP A2/B1、Aβ 42及P-tau水平[ M( Q1, Q3)]分别为310.0(275.1,344.2)、34.5(24.9,42.5)、190.4(150.4,301.7)ng/L,显著高于对照组的272.7(239.6,291.5)、18.7(14.7,26.6)、140.0(101.8,217.5)ng/L(均 P<0.05)。以国际MCI工作组标准为金标准,血浆hnRNP A2/B1预测MCI的灵敏度、特异度与ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)分别为80%、61%、0.781,Aβ 42预测MCI的灵敏度、特异度与AUC分别为78%、73%、0.744,P-tau预测MCI的灵敏度、特异度与AUC分别为51%、79%、0.675。hnRNP A2/B1与Aβ 42预测MCI的灵敏度、特异度与AUC差异均无统计学意义(均 P>0.05),但两者灵敏度均高于P-tau(均 P<0.001);与P-tau相比,血浆hnRNP A2/B1预测MCI的AUC较高( P<0.05)。当3种指标联合时,其灵敏度为82%,AUC为0.842,均为最高,但特异度(71%)降低(均 P<0.05)。 结论:血浆hnRNP A2/B1、Aβ 42及P-tau三者联合可提高术前诊断老年患者MCI的灵敏度和准确度,诊断效能最大,有一定临床应用价值。
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编辑人员丨2天前
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Kapβ2介导的hnRNPA2/B1核转位与七氟烷脑神经毒性的关系:细胞实验
编辑人员丨2天前
目的:采用细胞实验评价核转运蛋白β2 (Kapβ2)介导的核不均一性核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)核转位与七氟烷脑神经毒性的关系。方法:采用小鼠海马细胞系HT22细胞,以2×10 5/孔和1×10 6/孔的密度接种于共聚焦培养皿和六孔培养板,采用随机数字表法分为4组( n=12):携带绿色荧光蛋白(GFP)空载腺病毒转染的对照组(GFP-C组)、携带GFP空载腺病毒转染的七氟烷组(GFP-Sev组)、Kapβ2基因过表达腺病毒转染的对照组(Kapβ2-C组)和Kapβ2基因过表达腺病毒转染的七氟烷组(Kapβ2-Sev组)。细胞常规培养48 h后,转染携带GFP的空载腺病毒(GFP-C组和GFP-Sev组)和Kapβ2基因过表达的腺病毒(Kapβ2-C组和Kapβ2-Sev组)。转染48 h后GFP-C组和Kapβ2-C组继续常规培养48 h;GFP-Sev组和Kapβ2-Sev组采用3%七氟烷孵育3 h,随后常规培养48 h。采用Western blot法测定细胞Kapβ2、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、hnRNPA2/B1表达,并计算hnRNPA2/B1核质比。采用免疫荧光实验进行hnRNPA2/B1亚细胞定位。 结果:与GFP-C组比较,GFP-Sev组SYP、PSD95表达下调,hnRNPA2/B1核质比降低,细胞质hnRNPA2/B1表达上调,Kapβ2-C组Kapβ2表达上调( P<0.05);与Kapβ2-C组比较,Kapβ2-Sev组SYP、PSD95表达下调,hnRNPA2/B1核质比降低,细胞质hnRNPA2/B1表达上调( P<0.05);与GFP-Sev组比较,Kapβ2-Sev组Kapβ2、SYP、PSD95表达上调,hnRNPA2/B1核质比升高,细胞质hnRNPA2/B1表达下调( P<0.05)。 结论:Kapβ2介导的hnRNPA2/B1核转位可能是七氟烷脑神经毒性的内源性保护机制。
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编辑人员丨2天前
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核内不均一核糖核蛋白A2/B1与神经退行性疾病的研究进展
编辑人员丨2天前
核内不均一核糖核蛋白属于RNA结合蛋白中的一类,具有高度保守的结构。其中,核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)参与转录、翻译等多种过程。近年来,神经退行性疾病研究领域发现,hnRNPA2/B1促进细胞质内纤维蛋白聚集,参与神经元内应激颗粒形成,调节多种认知功能相关过程,与肌萎缩侧索硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病等神经退行性疾病存在密切联系。本文综述相关研究,对hnRNPA2/B1在神经退行性疾病中的重要作用与机制进行总结,为未来神经退行性疾病诊断及治疗提供帮助。
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编辑人员丨2天前
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沉默hnRNP A2/B1抑制人宫颈癌Hela细胞中cyclin D1/E表达的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨沉默核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)基因后对人宫颈癌Hela细胞中细胞周期蛋白(cyclin) D1及cyclin E的表达及裸鼠移植瘤生长的影响.方法 运用慢病毒转染沉默Hela细胞中的hnRNP A2/B1基因并用成功沉默后的细胞建立体外细胞及体内移植瘤模型.用Western blot检测细胞及移植瘤中的cyclin D1/E的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的增殖能力,免疫组织化学分析各组移植瘤组织中增殖相关蛋白增殖细胞抗原(PCNA)及Ki-67的表达水平并用HE染色分析组织的病理形态.结果 沉默hnRNP A2/B1基因后Hela细胞中cyclin D1/E表达降低,裸鼠移植瘤PCNA及Ki-67相较未沉默组表达降低,裸鼠移植瘤的生长明显受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 沉默hnRNP A2/B1基因后能降低宫颈癌Hela细胞中cyclin D1及cyclin E的表达,抑制肿瘤细胞增殖及生长.
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编辑人员丨2023/8/6
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沉默hnRNP A2/B1基因后通过Bcl-2/Bax影响 宫颈癌CaSki细胞的凋亡
编辑人员丨2023/8/6
目的 探索沉默核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)基因后对宫颈癌CaSki细胞的增殖、凋亡的影响及其相关作用机制.方法 建立稳定沉默hnRNP A2/B1的CaSki细胞株,分为未沉默hnRNP A2/B1的空白组(CaSki组)、转染阴性序列的阴性对照组(CaSki-NC组)、转染阳性hnRNP A2/B1干扰序列的实验组(CaSki-shRNA组).运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)对各组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达水平进行验证,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,细胞克隆实验检测各组细胞克隆形成能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化.结果 与CaSki组、CaSki-NC相比较,CaSki-shRNA组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达水平均明显减低,细胞的增殖能力在48 h降低,克隆形成能力下降,凋亡率增加,Bcl-2蛋白的表达减低,Bax表达升高(P<0.01),而CaSki组与CaSki-NC组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 沉默hnRNP A2/B1基因后能抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖能力,且可能通过Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡.
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编辑人员丨2023/8/6
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白头翁皂苷B4抑制香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病及癌前病变的作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 研究白头翁皂苷B4对香烟烟雾(CS)诱导的慢性阻塞性肺病(COPD)及癌前病变的影响并探讨作用机制.方法 80只C57BL/6小鼠,雌雄各半,通过连续CS诱导法建立COPD小鼠模型.在造模第9周,按照体重将小鼠随机分为正常组、CS诱导组、白头翁皂苷B41.5,3和6 mg·kg-1组,阳性对照药地塞米松1.5 mg·kg-1组.熏烟前1 h给药,持续4周.造模及给药结束后,采用肺功能仪测定小鼠肺功能参数的变化;高通量蛋白芯片技术测定支气管肺泡灌洗液中炎症因子的含量;HE染色观察肺组织病理变化及上皮细胞增生情况;PCR法测定小鼠肺组织中转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)基因表达水平以及基质金属蛋白酶2(MMP2),MMP9,MMP12和MMP抑制剂(TIMP1)的表达;采用试剂盒测定小鼠血浆中髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;免疫组织化学法测定肺组织中抑癌基因(p53)、增殖细胞核抗原(ki67)以及核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)的表达;Western印迹法检测小鼠肺组织中DNA甲基转移酶(Dnmt1)、脆性组氨酸三联体(FHIT)、抑癌基因CDKN2A/P16蛋白表达水平.结果 白头翁皂苷B4能够显著降低吸气时间(Ti)、肺阻力(LR)(P<0.05),升高最大呼气流速(PEF)(P<0.05):白头翁皂苷B4可缓解炎症细胞浸润情况,并能够降低支气管肺泡灌洗液中炎症因子IL-2,IL-5,IL-18和IL-10含量(P<0.01),显著下调小鼠肺组织中炎症因子TGF-β,TNF-α和IL-1β基因表达水平(P<0.01),显著降低MMP2和MMP12基因表达,升高MMP9、TIMP1基因表达水平(P<0.01);白头翁皂苷B4给药组能够不同程度降低MDA含量及MPO活性,同时能够显著提升GSH-Px活性(P<0.05,P<0.01);免疫组织化学实验结果表明,白头翁皂苷B43和6 mg·kg-1组均能够显著上调P53蛋白表达(P<0.01);白头翁皂苷B4对Dnmt1和Cdkn2a/P16蛋白表达无影响,可显著下调FHIT蛋白表达水平(P<0.01).结论 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺功能具有一定程度改善作用,能够通过平衡小鼠肺组织中蛋白酶与抗蛋白酶表达,降低氧化应激水平,改善肺组织氧化应激进而起到保护作用,并有抑制癌前病变的作用趋势.
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编辑人员丨2023/8/5
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羰基化蛋白质组学研究规律运动调控大鼠脑纹状体细胞凋亡的作用与适应性机制
编辑人员丨2023/8/5
为研究探讨规律运动对老年大鼠纹状体蛋白质氧化应激与细胞凋亡的影响,通过差异羰基化蛋白质组学特征分析,筛选靶标蛋白质并阐明其作用机制.将24只健康雄性23月龄老年大鼠随机分为静息组(Con-SED)和规律运动组(Aero-EXE).采用运动强度相当于最大摄氧量(VO2max)60%~65%逐渐递增到70% ~75%的10周中等强度规律运动.HE染色结果显示,规律运动改善了老年大鼠纹状体基质间区和纹状质间区的结构.TUNEL检测出所有老年大鼠纹状体均出现细胞凋亡核.与Con-SED组相比较,Aero-EXE组纹状体基质间区细胞凋亡指数增加了68.24%(P<0.01),而纹状质间区凋亡指数下降了43.14% (P<0.05).亲和素珠富集和电喷雾四级杆飞行时间质谱分离鉴定羰基化蛋白质.进一步使用MASCOT服务器的数据库进行生物信息学搜索,结果显示,羰基化蛋白质涵盖28种氧化修饰位点.其中鉴定出Con-SED组羰基化蛋白质有14-3-3蛋白(e)和核内不均一性核糖核蛋白(HNRNPA2B1)等69个;而Aero-EXE组羰基化蛋白质有电压依赖型阴离子选择性通道1(VDAC1)和VDAC2等71个.生物信息学分析羰基化蛋白质的氧化修饰位点及蛋白质相互作用关系,筛选出14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1羰基化蛋白质与细胞凋亡有着重要关系.免疫组织化学检测结果显示,与Con-SED组相比较,Aero-EXE组的大鼠纹状体SOD和BDNF表达水平显著提高(P<0.01,P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01);免疫印迹检测结果显示,PI3K/AKT1/mTOR和CAMKⅡα信号通路相关分子的表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01).综上所述,规律运动刺激了抗氧化系统的适应,改善了与细胞凋亡密切相关的14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1等蛋白质羰基化,维护了纹状体基质间区和纹状质间区细胞凋亡的稳态,其机制是通过上调14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1表达水平,促进BDNF的表达,进一步激活并上调下游PI3K/AKT/mTOR和CAMKs信号通路而调控纹状体细胞凋亡.
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编辑人员丨2023/8/5
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核内不均一核糖核蛋白A2/B1在舌鳞状细胞癌中的表达及作用
编辑人员丨2023/8/5
目的:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部的常见癌症,严重危害人们的生命健康.核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)是一种RNA结合蛋白,可调控多种基因的表达,参与多种癌症的发生和发展.本研究旨在探究hnRNP A2/B1对TSCC进展的表达及作用.方法:基于基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)相关芯片GSE146483、GSE85195分析hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中的差异表达情况,基于TSCC相关芯片GSE4676分析hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期的相关性.收集2021年7月至12月于湖南省肿瘤医院就诊的30例TSCC患者的癌及癌旁组织样本,采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法验证TSCC患者样本中hnRNP A2/B1 的mRNA和蛋白质表达情况.以人TSCC细胞Tca-8113为研究对象,分别转染hnRNP A2/B1空载敲减质粒(sh-NC组)、敲减质粒(sh-hnRNP A2/B1组)、空载过表达质粒(OE-NC组)和过表达质粒(OE-hnRNP A2/B1组).采用蛋白质印迹法检测hnRNP A2/B1敲减或过表达效率,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测Tca-8113细胞增殖活性,流式细胞术检测Tca-8113细胞凋亡率.结果:基于GEO数据库中的OSCC相关芯片GSE146483、GSE85195分析发现:hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中均存在差异表达(均P<0.01),同时对TSCC相关芯片GSE4676的分析证实hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期呈负相关(P=0.006).Real-time RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示:与癌旁组织样本相比,TSCC组织样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质相对表达水平均显著上调(均P<0.01).蛋白质印迹法结果显示:Tca-8113细胞在转染敲减或过表达hnRNP A2/B1质粒后,细胞内的hnRNP A2/B1表达水平被显著抑制或促进(均P<0.01).CCK-8及流式细胞术结果显示:抑制Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以降低细胞增殖活性(P<0.05),增高细胞凋亡率(P<0.01);促进Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以增加细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01).结论:HnRNP A2/B1是调控TSCC细胞增殖和凋亡水平的关键因子,通过抑制hnRNP A2/B1的表达可以降低TSCC细胞的增殖活性,促进TSCC细胞的凋亡.
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编辑人员丨2023/8/5
