目的:探讨白头翁皂苷B4对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的作用。方法:采用随机数字法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型对照组及糖尿病＋白头翁皂苷B4处理组，每组20只。模型对照组、糖尿病＋白头翁皂苷B4处理组大鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型。建模成功3 d后，糖尿病＋白头翁皂苷B4处理组以5 mg/kg的剂量腹腔注射白头翁皂苷B4，2次/d，持续腹腔注射8周，正常对照组、模型对照组大鼠腹腔注射同等剂量生理盐水。于糖尿病＋白头翁皂苷B4处理组腹腔注射8周后，获取视网膜组织，行视网膜石蜡切片苏木精-伊红染色(HE)，观察视网膜组织结构及形态改变；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2及Bax蛋白表达水平；行荧光定量PCR(Q-PCR)检测视网膜组织中Caspase-3 mRNA表达水平。结果:HE染色显示，正常对照组大鼠视网膜结构完整，形态清晰；模型对照组大鼠视网膜结构紊乱，各层变薄，细胞排列紊乱、稀疏；而白头翁皂苷B4治疗后的大鼠视网膜结构与形态好转；与正常对照组相比，模型对照组大鼠视网膜Bcl-2蛋白相对表达量减弱( t＝57.81， P<0.01)，Bax表达增强( t＝10.47， P<0.01)，Bcl-2/Bax比值下降( t＝23.98， P<0.01)，差异均具有统计学意义；与模型对照组比较，糖尿病＋白头翁皂苷B4处理组大鼠视网膜Bcl-2蛋白相对表达量增强( t＝41.07， P<0.01)，Bax表达减弱( t＝6.811， P<0.01)，Bcl-2/Bax比值上升( t＝14.70， P<0.01)，差异均具有统计学意义；模型对照组大鼠视网膜组织Caspase-3 mRNA表达较正常对照组增高( t＝7.916， P<0.01)，而糖尿病＋白头翁皂苷B4处理组大鼠视网膜组织中Caspase-3 mRNA表达较模型对照组降低( t＝6.221， P<0.01)，差异均有统计学意义。 结论:白头翁皂苷B对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡具有一定的抑制作用，其机制可能与增强Bcl-2表达及下调Bax、Caspase-3表达有关。

目的:探索白头翁皂苷B4对卵巢癌SKOV3细胞株细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞，利用CCK-8法检测不同浓度白头翁皂苷B4处理SKOV3细胞后其增殖情况，并计算IC 50值；流式细胞术检测IC 50值浓度下不同时间白头翁皂苷B4处理细胞后的凋亡情况；Transwell法检测IC 50值浓度白头翁皂苷B4处理细胞不同时间后细胞迁移和侵袭情况；Western blot检测细胞内相关蛋白表达量变化。 结果:白头翁皂苷B4能有效抑制SKOV3细胞的增殖，呈现出浓度依赖性，IC 50值为（6.08±0.56）μM，且抑制效果强于阳性对照药物顺铂，差异具有统计学意义（ P<0.05）；流式细胞术显示白头翁皂苷B4处理24 h后SKOV3细胞的凋亡比例为52.3%，且降低了Bcl-xl表达，上调了Bax，cleaved-caspase-3和PARP表达，且与0 h组相比差异具有统计学意义（ P<0.05）；白头翁皂苷B4能下调N-cadherin的表达，上调E-cadherin表达，进而抑制SKOV3细胞的迁移；白头翁皂苷B4能抑制JAK/STAT3信号通路蛋白的表达。 结论:白头翁皂苷B4能有效抑制卵巢癌细胞的增殖，并通过调控JAK/STAT3信号通路影响SKOV3细胞凋亡并抑制其发生迁移，白头翁皂苷B4在卵巢癌的治疗及新药开发中具有研究潜力。

目的 研究白头翁皂苷B4的抗动脉粥样硬化作用及其机制.方法 将雄性的C57小鼠设为对照组,共6只,给予正常饮食;给予ApoE-/-小鼠高脂饮食喂养9周后,随机分为4组:模型组、辛伐他汀(阳性对照,5mg·kg-1)组及白头翁皂苷B4低、高剂量(5、20 mg·kg-1)组,每组7只.ig给药9周,C57对照组和ApoE-/-模型组给予等量的0.9％的氯化钠溶液.给药的同时造模小鼠仍给予高脂饮食,每周统计1次体质量,给药9周后进行取材.通过兽用血常规分析仪检测全血中血小板(PLT)、白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)及淋巴细胞(Lym)水平;ELISA法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)的水平;试剂盒法检测血清中总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;通过全长主动脉油红染色检测主动脉中脂质积累情况;通过苏木精-伊红染色法、Masson染色法和油红O染色法检测主动脉窦的组织病理变化.结果 与模型组比较,在白头翁皂苷B4及辛伐他汀给药后,体质量呈降低趋势;PLT、WBC、Neu、Lym、IL-6水平均显著降低(P＜0.05、0.01、0.001);血清TC、FC、TG、LDL-C水平显著降低(P＜0.001),HDL-C水平显著升高(P＜0.001);全长主动脉被染红区域显著缩小(P＜0.001);主动脉窦油红染色区域面积明显减少,小鼠主动脉窦斑块减少,可见少量泡沫细胞,炎症细胞浸润减少,中膜层平滑肌及弹性纤维排列增厚不明显,胶原含量多且分布规律,胶原间的腔隙减少,油红染色区域面积明显减少.结论 白头翁皂苷B4对高脂饮食诱导的ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化具有治疗作用,其作用机制与减少脂质浸润和炎症反应有关.

目的 探讨白头翁皂苷B4和常春藤皂苷C(HSC,又名白头翁皂苷B5)质量比为4∶1的组合物对帕金森病和阿尔茨海默病模型小鼠的保护作用及机制.方法 取60只健康雄性C57BL/6小鼠,随机抽取10只作为对照组,剩余50只小鼠ip 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病(PD)模型,模型构建成功后随机分为模型组、左旋多巴胺片(阳性对照,30mg·kg-1)组和白头翁皂苷B4+HSC高、中、低剂量(20、10、5mg·kg-1)组,每组10只,ig给药14d,每天1次,对照、模型组小鼠ig等量0.9％的氯化钠溶液.每2天观察动物震颤行为出现与消失的时间,于给药第7、14天展开行为学实验并记录评分;HE染色法观察脑组织黑质病理学变化;免疫组化检测脑组织α-突触核蛋白表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠脑组织多巴胺转运体(DAT)、酪氨酸羟化酶(TH)mRNA表达.将50只APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐(阳性药,1.5 mg·kg-1)组和白头翁皂苷B4+HSC高、中、低剂量(20、10、5mg·kg-1)组,取10只同背景APP/PS1转基因阴性小鼠作为对照组,每天1次,连续ig给药28d,模型组和对照组ig等量0.9％的氯化钠溶液.给药结束后进行行为学实验并记录评分;ELISA法检测小鼠血清中炎症因子白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、环氧化酶2(COX-2)和氧化应激因子活性氧(ROS),试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平.结果 在PD模型小鼠中,与模型组比较,白头翁皂苷B4+HSC显著降低震颤麻痹评分(P＜0.01、0.001),显著降低旷场实验评分(P＜0.01、0.001),显著降低爬杆实验评分(P＜0.01、0.001),显著降低悬挂实验评分(P＜0.01、0.001),显著降低游泳实验评分(P＜0.01、0.001),显著降低行为学实验综合评分(P＜0.001),明显改善黑质体结构损伤,明显降低α-突触核蛋白表达,显著升高小鼠脑组织DAT和THmRNA水平(P＜0.05、0.01、0.001).在AD模型小鼠中,与模型组比较,白头翁皂苷B4+HSC显著缩短水迷宫定位航行实验逃避潜伏期(P＜0.001),明显延长在目标象限的累计停留时间(P＜0.05、0.01、0.001),显著增加准确穿越平台所在位置的次数(P＜0.05、0.01),显著降低血清炎症因子水平(P＜0.05、0.01、0.001),显著降低ROS水平、升高SOD和GSH-Px的水平(P＜0.05、0.01、0.001).结论 白头翁皂苷+HSC对PD和AD小鼠具有保护作用,可能通过发挥抗炎、抗氧化,改善脑组织和神经元损伤等来实现.

目的 研究白头翁皂苷B4栓剂抗痛风作用.方法 应用混合脂肪酸甘油酯制备白头翁皂苷B4栓剂;使用尿酸钠诱导大鼠急性痛风性关节炎模型,观察白头翁皂苷B4栓剂(9、18、36 mg·kg-1,直肠给药)对大鼠踝关节肿胀度的影响,试剂盒法检测血清炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,HE染色后观察踝关节组织病理学变化;使用氧嗪酸钾诱导大鼠急性高尿酸血症,给予别嘌醇(阳性药,22 mg·kg-1,ip给药)和白头翁皂苷B4栓剂低、中、高剂量(9、18、36 mg·kg-1),试剂盒法检测大鼠血清中尿酸、黄嘌呤氧化酶(XOD)、尿素氮(BUN)水平,检测肝脏组织中尿酸、BUN、肌酐(CRE)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)水平,HE染色后检测肾脏组织病理学变化;使用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀建立炎症动物模型,足容积测量仪观察白头翁皂苷B4栓剂对肿胀率的影响;使用甲醛诱导小鼠致痛模型,观察白头翁皂苷B4栓剂(13、26、52mg·kg-1)对舔足次数的影响.结果 与模型组比较,白头翁皂苷B4栓剂能够显著抑制尿酸钠诱导急性痛风性关节炎大鼠的关节肿胀(P＜0.05、0.01、0.001),降低血清炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β水平(P＜0.05、0.01、0.001);降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠血清尿酸、XOD、BUN水平,降低肝脏中尿酸、BUN、CRE和MDA水平,升高肝脏中GSH-Px、CAT水平(P＜0.05、0.01、0.001),改善肾脏组织病理改变;显著抑制角叉菜胶诱导大鼠足肿胀(P＜0.05);显著减少甲醛诱导小鼠致痛模型的舔足次数(P＜0.01).结论 白头翁皂苷B4栓剂具有抗痛风性关节炎、抗急性高尿酸血症及抗炎镇痛作用.

目的 基于大鼠体内实验以及网络药理学探讨白头翁皂苷B4治疗子宫肌瘤的作用机制.方法 大鼠按体质量随机分为6组:对照组、模型组、米非司酮(阳性药,1.25 mg·kg-1)组和白头翁皂苷B4低、中、高剂量(5、10、20 mg·kg-1)组,每组8只.采用雌激素负荷法制备子宫肌瘤模型,于造模成功后ip给药,对照组及模型组每天ip等量0.9％氯化钠溶液.通过对大鼠一般行为学的观察、子宫组织的明场以及病理HE染色切片观察、ELISA试剂盒检测血清与子宫组织中雌二醇、孕酮、雌激素受体的表达水平,明确白头翁皂苷B4对大鼠子宫肌瘤是否有治疗作用;通过网络药理学收集白头翁皂苷B4与子宫肌瘤的交互靶点,并对其进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络信息的构建以及基因功能富集分析,并将靶点以及药物进行AutoDock Vina分子对接分析,确定作用靶点;最终对组织进行相关靶点Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白水平的Western blotting检测进行验证.结果 体内实验结果显示,与模型组比较,白头翁皂苷B4组大鼠子宫形态明显好转,子宫指数显著降低(P＜0.001);HE染色显示,白头翁皂苷B4组大鼠子宫平滑细胞排列整齐,形态正常,色泽均一,肌层炎症细胞浸润减少;血清及子宫组织中雌二醇、孕酮、雌激素受体的水平显著降低(P＜0.05、0.01、0.001).通过Pubchem数据库筛选得到白头翁皂苷B4相关作用靶点23个,与子宫肌瘤共同作用靶点8个,富集得到69条KEGG信号通路,主要包括细胞凋亡、脂质和动脉粥样硬化、IL-17、NF-κB、小细胞肺癌、MAPK等相关信号通路.AutoDock Vina结果显示白头翁皂苷B4与关键靶点BCL2、BAX、Caspase3结合良好.与模型组比较,白头翁皂苷B4中、高剂量组Bax、Caspase-3蛋白水平显著升高(P＜0.001),Bcl-2蛋白水平显著降低(P＜0.001).结论 白头翁皂苷B4可能通过BCL2、BAX、Caspase-3等关键靶点诱导凋亡,同时降低雌二醇、孕酮、雌激素受体的表达,从而治疗子宫肌瘤.

目的 建立评价白蒲黄胶囊质量的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和化学模式识别方法.方法 色谱柱为Waters Acquity BEH C18 柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为 0.3 mL/min,柱温为 35℃,切换检测波长 210 nm及 323 nm,进样量为 2μL.建立 2 个厂家 10 批样品的指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析(CA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),筛选不同批次样品的差异性标志物.结果 方法学考察结果显示,精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于 2.0%.10 批样品共标定了 19 个共有峰;通过与对照品比对,指认 7 个成分,分别为盐酸黄柏碱(4 号峰)、绿原酸(6 号峰)、咖啡酸(10 号峰)、菊苣酸(11 号峰)、黄芩苷(13 号峰)、盐酸小檗碱(17 号峰)、白头翁皂苷B4(19 号峰).10 批样品的指纹图谱相似度均不低于 0.978.10 批样品按厂家聚为 2 类;在OPLS-DA模型下,以变量重要性投影值大于 1 筛选出 4 个差异性标志物,分别为白头翁皂苷B4(19号峰)、5号峰、菊苣酸(11号峰)、绿原酸(6号峰).结论 该方法操作简单、结果准确,可客观评价白蒲黄胶囊的质量.

目的:基于网络药理学预测和动物实验验证探讨白头翁汤对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)的治疗作用及机制.方法:通过文献查阅及TCMSP、Gene Cards等数据库收集白头翁汤成分、靶点及VVC疾病靶点,Cityscape 3.6.0软件构建"药物活性成分-靶点-通路"网络;String数据库构建蛋白互作网络.通过DAVID平台进行基因功能(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock软件对核心成分及关键靶点进行分子对接.将SPF级KM小鼠采用随机数表法分为正常组,模型组,白头翁汤低、中、高剂量组,氟康唑组(n=12).阴道腔内接种白色念珠菌建立VVC模型.连续给药14 d后,革兰氏染色法和平板计数法观察阴道灌洗液中真菌载量;HE染色观察阴道组织形态改变;ELISA 法检测血清 IL-17、IL-23、IL-1β 的含量;Western blot 法验证主要靶点 TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和 IL-23/IL-17 轴核心调控因子ROR-γT蛋白表达.结果:筛选得到白头翁皂苷B4、二氢尼洛替星、黄柏酮、β-谷甾醇、小檗碱为治疗VVC的核心成分;筛选出18个关键作用靶点和75条通路.动物实验结果显示,与模型组比较,白头翁汤给药后可降低阴道内真菌载量和血清炎症因子IL-17、IL-23和IL-1β含量,降低阴道组织内TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和ROR-γT蛋白表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:白头翁汤通过调控STAT3、TNF-α等靶点以及IL-23/IL-17轴发挥治疗VVC作用.

目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定白头翁汤中白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5、黑海常春藤皂苷A1、白头翁皂苷D、白头翁皂苷A3、α-常春藤皂苷、秦皮素、秦皮甲素、秦皮乙素、黄柏碱、巴马汀、黄连碱、小檗碱的含量,并考察配伍前后其变化.方法 白头翁、白头翁汤、缺白头翁阴性汤50％甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLC ? BEH C18色谱柱(2.1 mmx50 mm,1.7 μm);流动相甲醇-0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量0.2mL/min;柱温24.5℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式.结果 13种成分在各自范围内线性关系良好(R2＞0.990 0),平均加样回收率94.4％～106.2％,RSD 1.1％～4.2％.在白头翁汤中,双糖类皂苷(白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5)、单糖类皂苷(白头翁皂苷A3、α-常春藤皂苷、黑海常春藤皂苷A1、白头翁皂苷D)含量低于白头翁中,香豆素(秦皮素、秦皮甲素、秦皮乙素)含量高于缺白头翁阴性汤中,生物碱(小檗碱、黄柏碱)含量低于缺白头翁阴性汤中.结论 白头翁汤中生物碱可能与皂苷结合而形成其他化合物,导致两者含量降低.

目的 探讨白头翁汤对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠黏液屏障的保护作用以及对Notch通路的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、美沙拉嗪(50mg/kg)组和白头翁汤低、高剂量(7.4、14.8 g/kg)组,对照组小鼠自由饮用纯净水,其余各组连续8 d自由饮用2.5％DSS溶液诱导UC模型,造模同时各给药组ig相应药物.每日记录小鼠体质量、粪便稠度以及血便情况;采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;采用AB-PAS染色观察结肠组织黏蛋白2(mucin2,MUC2)的分泌情况;ELISA法检测结肠组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性及促炎因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子IL-10的含量;免疫组化法检测结肠组织Ki67的表达情况;免疫荧光法测定结肠组织富含亮氨酸重复序列的 G 蛋白偶联受体 5(leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptor 5,Lgr5+)肠道干细胞(intestinal stem cells,ISCs)阳性细胞数;Western blotting 测定结肠组织 Notch-1、Atoh1、Hes1 和 MUC2 蛋白表达.结果 与模型组比较,白头翁汤能够缓解DSS诱导的UC小鼠体质量降低和疾病活动指数(disease activity index,DAI)升高(P＜0.05、0.01、0.001),缓解结肠组织的缩短、水肿以及病理学损伤(P＜0.01、0.001),减少炎性细胞浸润、隐窝的破坏与杯状细胞的丢失,降低结肠组织MPO活性和IL-1β、TNF-α水平(P＜0.05、0.01),升高IL-10水平(P＜0.05),增加结肠组织Ki67阳性细胞数(P＜0.01),促进MUC2的分泌和Lgr5+ISCs的阳性细胞数,并下调Notch和Hes-1蛋白表达水平(P＜0.05、0.001),上调Atoh1和MUC2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 白头翁汤能够降低UC小鼠结肠组织促炎细胞因子水平,增加Lgr5+ISCs的增殖和分化,保护隐窝和杯状细胞结构,促进MUC-2分泌,其作用可能与调控Notch-1/Atoh1/Hes1通路密切相关.