目的:探讨上皮细胞黏附分子（EpCAM）靶向的核酸适体药物偶连物（SYL3C-MMAE）对人胃上皮细胞GES-1（以下简称GES-1细胞）以及人胃癌细胞AGS、MKN45（以下简称AGS、MKN45细胞）的亲和力以及毒性。方法:采用实验研究方法。采用免疫组织化学染色检测胃癌组织中EpCAM的表达水平；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（PCR）检测胃癌组织中EpCAM的mRNA表达水平；应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测GES-1、AGS、MKN45细胞中EpCAM蛋白的表达水平；通过流式细胞仪检测SYL3C对3种细胞的亲和力；通过巯基的SYL3C序列马来酰亚胺反应合成SYL3C-MMAE；采用CCK8法检测药物对细胞的毒性；碘化丙啶法检测药物处理后细胞周期情况。观察指标：（1）EpCAM在胃癌中的表达情况。（2）靶向EpCAM的抗体与SYL3C对相关细胞系的亲和力。（3）药物合成情况。（4）药物毒性检测以及细胞周期抑制情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差异法检验；方差不齐者采用Welch' t检验。偏态分布的计量资料以 M（IQR）表示，组间比较采用配对秩和检验。计数资料以绝对数表示，组间比较采用配对 χ2检验。 结果:（1）EpCAM在胃癌中的表达情况。组织芯片免疫组织化学染色检测结果显示：35对胃癌及其癌旁组织（正常组织）中，胃癌组织EpCAM阳性率为82.9%（29/35），正常组织EpCAM阳性率为22.9%（8/35），两者比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示：12对胃癌组织及其癌旁组织中EpCAM的mRNA相对表达水平分别为1.23（4.13）和4.04（1.72），两组比较，差异有统计学意义（ Z=-2.67， P<0.05）。Western blot检测结果显示：以AGS细胞中EpCAM蛋白表达量为标准，GES-1、AGS、MKN45细胞中，EpCAM蛋白的相对表达量分别为0、1.00、0.27。（2）靶向EpCAM的抗体与SYL3C对相关细胞系的亲和力。流式细胞仪检测结果显示：EpCAM抗体以及SYL3C均对AGS以及MKN45细胞有较好的亲和力，而对于GES-1细胞则没有亲和力。（3）药物合成情况。SYL3C与单甲基奥瑞他汀E（VcMMAE）连接合成质谱检测结果显示：合成完成后的药物原液于16 355分子量位置出现强峰，符合SYL3C-MMAE复合物的预期分子量，提示SYL3C-MMAE合成成功。（4）药物毒性检测以及细胞周期抑制情况。CCK8法检测细胞活力结果显示：VcMMAE对GES-1、AGS、MKN45细胞半抑制浓度（IC 50）分别为123.00、30.48、51.83 nmol/L。SYL3C-MMAE对于上述3种细胞的IC 50分别为241.80、20.66、27.64 nmol/L。PI法检测细胞周期结果显示：VcMMAE与SYL3C-MMAE均能引起GES-1、AGS、MKN45细胞的细胞周期发生G2/M期阻滞。 结论:SYL3C-MMAE对于胃癌细胞有较好的亲和力，与VcMMAE比较，其在高效抑制胃癌细胞的同时对正常细胞的影响显著减轻。

核酸适配体(aptamer)是1种可以和不同靶标(包括小分子、离子、病毒、细胞等)高特异性、高亲和力结合的单链DNA或RNA。该文主要介绍核酸适配体在核医学领域的研究进展，包括在SPECT和PET显像领域的研究。随着核医学相关设备和核素标记技术的发展，核酸适配体将在核医学领域中具有更广阔的应用前景。

目的:筛选血管炎性标志物脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）的DNA适体，并建立以非标记核酸适体-纳米金为探针的可视化检测方法。方法:方法学建立。通过磁珠固定SELEX技术经孵育结合、ssDNA分离、PCR扩增、单链回收的8轮循环筛选Lp-PLA2适体，利用表面等离子体共振技术和流式细胞术验证适体的亲和力和特异性，并通过计算机软件模拟适体二级结构及其与靶蛋白的三维分子对接。随后制备适体-纳米金复合物，利用靶标竞争结合导致纳米金溶液在盐诱导下凝聚引起颜色变化，分光光度计检测溶液的吸光度检测靶标浓度，建立样品溶液中Lp-PLA2浓度与吸光度的线性关系。结果:筛选获得3条高亲和力、强特异性的Lp-PLA2核酸适体B76-2、B76-4及B76-5，解离常数分别为1.07、1.26及1.75 nmol/L；并成功基于B76-2适体构建纳米金比色传感方法，其线性范围和检测限分别是20~500 ng/ml和78 ng/ml，反应时间30 min，可特异性区分靶标与其他血栓标志物如凝血酶和髓过氧化物酶。结论:利用核酸适体-纳米金显色实现了简单、快速、特异的Lp-PLA2可视化检测。

成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关基因(Cas)系统是古菌和细菌适应性免疫系统,最初被发现用来进行基因编辑,近年其特异识别和切割特性以及可编程性使其在核酸和非核酸靶标检测中崭露头角.目前基于CRISPR/Cas系统的核酸检测系统主要与核酸扩增技术如PCR、链置换扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)和EXPAR等恒温扩增技术结合,以提高灵敏度;多项研究也在尝试开发基于CRISPR/Cas的无预扩增核酸检测系统;另外也有研究尝试通过生物祖体(包括适体、DNAzymes和抗原-抗体反应)特异性识别靶物质实现非核酸信号转换为核酸信号,实现基于CRISPR/Cas的蛋白质、小分子、细胞等非核酸物质的检测.但仍存在一些挑战,其中目标中痕量原始浓度的信号转换和放大是分析系统的关键挑战;其他挑战包括CRISPR/Cas存在一定背景活性,CRISPR RNA和单链DNA/单链RNA信号报告序列有降解风险等.随着技术的逐渐成熟,CRISPR/Cas系统将在生物靶标检测中发挥更大作用.本文就CRISPR/Cas系统在核酸检测这一领域的最新发展方向作一述评.

目的 制备核酸适体(58 个碱基)与一甲基澳瑞他汀 E(MMAE)或依喜替康 DX8951 的偶联物,评价其体外抗胃癌细胞活性.方法 以不同取代羧酸为起始原料经酰胺缩合、取代等反应制得连接子 4a～4d,通过连接子 4a～4d,将 MMAE 或DX8951 与核酸适体偶联制得核酸适体偶联药物 1a～1f、7a～7f,制得化合物经质谱、核磁等确证结构;以人胃癌细胞 SUN-5 为阳性细胞,利用 CCK8 试剂盒测定细胞增殖及存活率,以分析核酸适体偶联药物的细胞增殖抑制活性.结果 合成了连接子 4 个,核酸适体偶联药物 12 个,细胞增殖抑制活性结果表明 1a～1f、7a～7f 均具有细胞增殖抑制活性,其中 1a～1d、7a、7c～7f 的 IC50 值均在100 nmol/L 以下,具有较强的细胞增殖抑制活性.结论 核酸适体偶联药物具有显著的抑制胃癌细胞增殖能力,与全身毒性的、非靶向性的细胞毒素 MMAE 等相比,更具安全性.

核酸适体是运用指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligand and by exponential enrichment,SELEX)技术从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中,经过多轮筛选后得到的单链DNA或RNA,具有识别靶标范围广、亲和力高和稳定性好等优势.Cell-SELEX技术是指将整个细胞作为靶标筛选特异性核酸适体的技术,近年来已经广泛应用于肿瘤细胞特异的核酸适体筛选.本研究综述了Cell-SELEX技术的筛选过程以及通过cell-SELEX技术产生的核酸适体在肿瘤标志物、肿瘤靶向治疗和循环肿瘤细胞的识别与检测等方面的应用研究进展.

肿瘤干细胞具有自我更新和多向分化潜能,在肿瘤生成、转移、复发和放化疗抗性等方面起着重要作用,是近年来肿瘤研究的热点.适配子是小分子寡核苷酸,具有极强的靶向性和亲和力,是肿瘤诊断和治疗的新型核酸分子.目前利用适配子进行肿瘤干细胞的诊断和治疗的研究越来越多,为肿瘤的诊断和治疗提供新的研究工具.

核酸适体(aptamer)是运用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)从体外人工合成的随机寡核苷酸序列库中经过多轮筛选后得到的单链DNA或RNA,它可以高亲和力与金属离子、小分子、糖类、脂质以及蛋白质等靶标特异性结合,具有制备方便、热稳定性好、低免疫原性等优点.核酸适体在分子成像、生物传感、疾病早期诊断及药物靶向治疗等生物医学领域中有很大的应用潜能.在儿童恶性肿瘤中,核酸适体技术具有实现肿瘤的早期诊断以及靶向治疗的应用前景,可避免传统化疗带来的儿童生长发育障碍以及远期的脏器功能不良等副作用.本文总结了与儿童恶性肿瘤相关的核酸适体筛选与应用的研究进展.

核酸适配体以其高特异性和高亲和力在肿瘤的早期诊断、治疗等领域显现出巨大潜能,运用cell-SELEX筛选获得的核酸适配体能够通过靶分子变化识别肿瘤细胞,进而实现肿瘤的预防与治疗.目前研究者们利用cell-SELEX技术并结合流式细胞术成功筛选到多条核酸适配体.弥补适配子缺陷并发挥其优势,可使核酸适配体技术真正应用于临床诊断与治疗.

新的肿瘤标志物的鉴别对推进研究肿瘤发生发展机制以及早期诊断具有极其重要的意义.而基于Cell-SELEX(细胞指数富集配体系统进化)方法得到的核酸适体具有特异性区分肿瘤细胞、非肿瘤细胞以及肿瘤干细胞、不同分化程度的肿瘤细胞的特性.本篇概述了近年来基于Cell-SELEX技术筛选得到的核酸适体进行肿瘤标志物鉴别的系统方法,探讨了Cell-SELEX技术用于鉴别潜在肿瘤标志物的可行性,回顾了近年来基于该方法鉴别肿瘤标志物的发展进程,并总结了目前此方法面临的困难与挑战及可能的改善方法.